血清丙氨酸氨基转移酶测定-标准操作程序

血清丙氨酸氨基转移酶测定-操作程序 文件编号: 血清丙氨酸氨基转移版本/状态:A/1 三级文件 第2页 共3页 酶测定标准操作程序 生效日期: 目的:建立血清丙氨酸氨基转移酶测定标准操作规程。 范围:适用于血清丙氨酸氨基转移酶测定的标准操作。 职责:生化部检验人员对本规程的实施负责。 规程: 1 测定方法:采用连续监测法测定人血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT/GPT)的活力。 丙氨酸氨基转移酶催化L-丙氨酸的氨基转移到α-酮戊二酸生成丙酮酸和L-谷氨 酸。乳酸脱氢酶(LDH)在催化丙酮酸还原的同时将NADH氧化成NAD+。通过 测定NADH在340nm处吸光度下降的速度可求得丙氨酸氨基转移酶的活力。 ALT L-丙氨酸 + α-酮戊二酸 ????? 丙酮酸 + L-谷氨酸 LDH ++丙酮酸 + NADH + H ?????? 乳酸 + NAD 2 仪器设备 GS200全自动生化仪 3 试剂 3.1 血清丙氨酸氨基转移酶试剂盒，包括试剂1(R-1)、试剂2(R-2)。 ????????????????????????????????? 试 剂 成 份 含 量 ????????????????????????????????? R-1 乳酸脱氢酶(LDH) ?4000U/L L-丙氨酸 ?025g /L Tris ?7g /L ????????????????????????????????? R-2 α-酮戊二酸二钠 ?12.5g/L 辅酶I二钠盐 (NADH?Na) ?0.6g/L 2 Tris ?4g/L ????????????????????????????????? 3.2 分析用人基质质控血清(RANDOX)、血清 3.3 试剂稳定性与贮存 血清丙氨酸氨基转移酶试剂盒在2-8?下避光保存可稳定一年;试剂R-1、R-2 开启后在2-8?避光保存可稳定一个月。 3.4 样本稳定性与贮存 3.4.1 分析用人基质质控血清:该血清自生产之日起，在2-8?下保持可稳定4年; 该血清一旦复融，在25?下可稳定24小时，在2-8?下可稳定7天，在-20? 文件编号: 血清丙氨酸氨基转移版本/状态:A/1 三级文件 第3页 共3页 酶测定标准操作程序 生效日期: 可稳定1个月。 3.4.2 待测血清: 2-8?保存可稳定7天;-20?保存可稳定3个月。样本不可反复冻融。不可使用已被污染的样本。 4 操作步骤 4.1 打开全自动生化仪，按照 GS200全自动生化分析仪操作维护保养程序，完成普 通测试流程。 4.2 检验方法 分析方法:速率A;主波长:340 nm;副波长:405nm;样品量:15.0ul;R-1:400ul，R-2:100ul;校准方式:K因子;反应方向:下降;测定温度:37?。 样品与R-1混匀后反应5分钟，加入R-2混合后延迟60秒，测定240秒。 样品 15ul 主波长340nm R-1 400ul R-2 100ul 副波长405nm 测光 测光 K =?4448 0 5 6 10min 4.3 计 算 ?A/min×Vt×1000 ALT(U/L)= ????????????? 6.22×Vs× d ?A/min = 每分钟吸光度变化率 Vt = 反应液总体积(ml) 1000 =U/ml到U/L的转换系数 6.22 = NADH的毫摩尔吸光系数 Vs = 样品体积(ml) d = 比色杯光径(cm) 5 检验结果的解释 抗坏血酸?40mg/dl、游离胆红素?684umol/L(40mg/dl)、结合胆红素?684umol/L(40mg/dl)、血红蛋白?500mg/dl、乳糜微粒?3000浊度单位对测定无影响。 6 注意事项 6.1 高度溶血可导致正的误差。