大鼠胆囊收缩素、肠促胰酶肽(CCK)ELISA试剂盒说明书

大鼠胆囊收缩素、肠促胰酶肽(CCK)ELISA试剂盒说明 大鼠胆囊收缩素(CCK)酶联免疫 试剂盒使用说明书 厦门慧嘉生物科技有限公司 本试剂盒仅供研究使用 预期应用 ELISA法定量测定大鼠血清、血浆或其它相关液体中胆囊收缩素，CCK含量。 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中CCK水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被抗体的微孔中依次加入CCK、生物素化的抗大鼠CCK抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的CCK呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，计算样品浓度。 试剂盒组成 1. 酶联板:一块(96孔) 品(冻干品):2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上， 然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为100 pmol/L，做系列倍比稀释后，分别稀释成100 pmol/L，50 pmol/L ，25 pmol/L，12.5 pmol/L，6.25 pmol/L，3.12 pmol/L，1.56 pmol/L，其 样品稀释液直接作为标准浓度0 pmol/L，临用前15分钟内配原液直接作为最高标准浓度， 制。 如配制50 pmol/L标准品:取0.5ml 100 pmol/L的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的 离心管中，混匀即可，其余浓度以此类推。 2. 样品稀释液:1×20ml/瓶。 3. 检测稀释液A:1×10ml/瓶。 4. 检测稀释液B:1×10ml/瓶。 5. 检测溶液A:1×120ul/瓶(1:100)临用前以检测稀释液A1:100稀释。 6. 检测溶液B:1×120ul/瓶(1:100)临用前以检测稀释液B1:100稀释。 7. 底物溶液:1×10ml/瓶。 8. 浓洗涤液:1×30ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。 9. 终止液:1×10ml/瓶(2N H2SO4)。 标本的采集及保存 1(血清:标本请于室温放置2小时或4?过夜后于1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20?保存，但应避免反复冻融。 2(血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8? C 1000 x g离心15分钟，或将标本放于-20?保存，但应避免反复冻融。 注:标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。 操作步骤 实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。 1. 加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100ul，余孔分别加标准 品或待测样品100ul，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁， 轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37?反应120分钟。 为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。 2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液 100ul(取1ul检测溶液A加99ul检 测稀释液A的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制)，37?,60分钟。 3. 温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，350ul/每孔，甩干。 4. 每孔加检测溶液B工作液(同检测A工作液) 100ul，37?，60分钟。 5. 温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350ul/每孔，甩干。 6. 依序每孔加底物溶液90ul，37?避光显色(30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有 明显的梯度兰色，后3-4孔梯度不明显，即可终止)。 7. 依序每孔加终止溶液50ul，终止反应(此时蓝色立转黄色)。终止液的加入顺序应尽量与底 物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止 液。 8. 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。 在加终止液后15分钟以内进行检 测。 注: 1( 每次实验留一孔作为空白调零孔，该孔不加任何试剂，只是最后加底物溶液及2NH2SO4。 测量时先用此孔调OD值至零。 2(为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜。 -8?保存。标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工3. 未使用完的酶标板或者试剂，请于2 作液请依据所需的量配置使用。请勿重复使用已稀释过的标准品、检测溶液A工作液或检 测溶液B工作液。 4. 建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。 洗板 手工洗板方法:吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层 吸水纸，酶标板朝下用力拍几次;将推荐的洗涤缓冲液至少0.4ml注入孔内，浸泡1-2分钟，根据需要，重复此过程数次。 自动洗板:如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。 特异性 本试剂盒可同时检测重组或天然的大鼠CCK，且与其它相关蛋白无交叉反应。 计算 以标准物的浓度为横坐标(对数坐标)，OD值为纵坐标(普通坐标)，在半对数坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 注意事项 1( 洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性。 2( 一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。 3( 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。 4( 如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请最后乘以稀释倍数。 5(在配制标准品、检测溶液工作液时，请以相应的稀释液配制，不能混淆。 6(底物请避光保存。 检测范围: 15.6 pg/ml-1000 pg/ml 灵敏度: 3.9 pg/ml 说明 1(试剂盒保存:-20?(较长时间不用时);2-8?(频繁使用时)。 2(有效期:6个月 (浓洗涤液会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。 3 4(刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何 影响。 5(中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。