反相高效液相色谱法测定清肝二十七味丸中栀子苷的含量

反相高效液相色谱法测定清肝二十七味丸中栀子苷的含量 邹继红 (赤峰学院 医学院，内蒙古 赤峰 024000) 摘 要:目的:建立测定清肝二十七味丸中栀子苷的方法.方法:采用HPLC法，色谱柱为Agilent Eclipse XDB-C18柱，流动相为0.1%三乙胺(10%磷酸调pH7.0)-乙腈(83:17)，流速为1mL?min-1，检测波长为238nm.结果:栀子苷的进样量在0.784-3.920μg与峰面积呈良好的线性，回归方程为:Y,1419.8X+3.095，(r,0.9998);平均加样回收率为99.1%，RSD=0.79%.结论:所用方法简便、快速、准确，适用于清肝二十七味丸中栀子苷的质量控制. 关键词:反相高效液相色谱法;清肝二十七味丸;栀子苷;含量测定 中图分类号:R286.0 文献标识码:A 文章编号:1673-260X(2011)11-0097-03 清肝二十七味丸又名钦那德贡斯乐，是根据蒙医药学配方理论及现代药理研究方法研制而成的传统名方，具有疏肝清热、健胃消食、杀粘虫、抑制肝炎病毒、促使HBsAg转阴的作用[1].主要用于急、慢性肝炎，脾胃虚热，骨蒸烦闷，食欲不振，恶心呕逆等症[2]，是治疗肝病的良药.为了有效控制其质量，作者参考有关文献[3-5]，采用反相高效液相色谱法对清肝二十七味丸中的栀子苷进行测定，操作简单、省时，结果准确、可信，精密度、重复性较好. 1 实验部分 1.1 仪器与试剂 Agilent 1200高效液相色谱系统(美国安捷伦公司);KQ-250E型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);METTLER AE240电子天平(瑞士梅特勒公司);栀子苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号为110748-200512);乙腈为色谱纯(美国Fisher);水为娃哈哈纯净水;甲醇为分析纯(天津市福晨化学试剂厂). 蒙药清肝二十七味丸(内蒙古库伦蒙药厂，批号:090413，090414，090415);阴性对照品的药材(内蒙古赤峰市中蒙医院). 1.2 方法与结果 1.2.1 色谱条件 色谱柱为Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱(150mm×4.6mm，5μm)，柱温为室温，流动相为0.1%三乙胺(10%磷酸调pH7.0)-乙腈(83:17)，流速为1.0mL?min-1，检测波长为238nm，进样量20μL. 1.2.2 溶液的制备 精密称取4.9mg栀子苷对照品，置25mL量瓶中，用流动相溶解，并稀释至刻度，即得196mg?L-1的对照品贮备溶液.精密吸取贮备溶液2mL，置10mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，即得39.2mg?L-1的对照品溶液.精密称取1.5g已研细的清肝二十七味丸，置具塞锥形瓶中，加入25mL50%甲醇，密塞，精密称定重量，超声处理(功率:250w，频率:40KHz)30min，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液即得供试品溶液.按处方要求制备不含栀子苷药材的样品，同法制成阴性样品溶液，备用. 1.2.3 阴性对照试验 取栀子苷对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液，在“1.2.1”项的色谱条件下分别进样20μL，测定(图1).由图可知:阴性样品对栀子苷的测定无干扰，且栀子苷与其他组分可达基线分离. 1.2.4 曲线的制备 精密吸取4、8、12、16、20 μL栀子苷对照品贮备溶液，进样，测定峰面积，以进样量(μg)为横坐标、峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为:Y=1419.8X+3.095，(r=0.9998).结果明:栀子苷进样量在0.784,3.920μg与峰面积具 有良好的线性关系. 1.2.5 精密度试验 取浓度为39.2mg?L-1的对照品溶液及供试品溶液各20μL，分别进样，重复5次测定峰面积.计算得对照品的RSD=0.76%，样品的RSD=0.92%，表明仪器精密度良好. 1.2.6 稳定性试验 精密吸取同一份供试品溶液，分别于0、4、8、12、24h时进样，测定峰面积.计算得栀子苷峰面积的RSD=1.3%，表明供试品溶液在24h内稳定. 1.2.7 重复性试验 精密称取同一批样品，按“1.2.2”项下方法制备6份供试品溶液，按“1.2.1”项的色谱条件进样测定.计算得样品中栀子苷的平均含量为0.660mg?g-1，RSD=1.1%，表明方法的重复性良好. 1.2.8 加样回收率试验 分别精密称取1.5g已知栀子苷含量的同一批(批号为090414，含量为0.660mg?g-1)样品粉末6份，分别精密加入一定量196mg?L-1的栀子苷对照品贮备溶液，按“1.2.2”项方法处理后进样20μL测定，计算栀子苷回收率，结果见表1. 1.2.9 样品的测定 取3个批号6份样品，按“1.2.2”项方法进行处理，然后分别精密吸取20μL对照品溶液和供试品溶液，进样，测定峰面积，按外标法计算栀子苷的含量，结果见表2. 2 讨论 以分光光度计扫描栀子苷对照品溶液，其最大吸收波长为238nm，故选取检测波长为238nm. 在流动相选择的过程中，参考有关文献[6-9]尝试用乙腈-0.1%磷酸溶液、甲醇-水、甲醇-0.2%冰醋酸溶液和水-乙腈-磷酸作为流动相，但栀子苷峰形不佳.经反复试验，最后当采用文中的条件时，栀子苷的峰形对称，且与其他组分分离良好. 样品的预处理，曾经采用甲醇和50%甲醇溶液分别进行提取，结果发现50%甲醇溶液的提取效率比较高，所以最终采用50%甲醇溶液为提取溶剂. 分别测定了超声提取20min、30min和40min的样品，结果提取30min和40min的样品测得的结果比较接近，所以最后采用超声30min. 参考文献: 〔1〕哈森高娃，白恒慧.清肝二十七味丸(钦那德贡斯乐)治疗病毒性乙型肝炎[J].中国民族医药杂志，2007(6):20. 〔2〕陈东龙.清肝二十七味丸治疗肝病的临床观察[J].中国民族医药杂志，2007(6):16. 〔3〕熊野娟.HPLC测定复肾宁片中栀子苷的含量[J].江西化工，2007(4):97-98. 〔4〕席海山.HPLC测定蒙药沏其日甘-5中栀子苷的含量[J].光谱实验室，2009，26(3):711-713. 〔5〕郝玉霞,王中彦,曹侃，等.HPLC法测定栀子柏皮软胶囊中栀子苷和小檗碱的含量[J].药物分析杂志，2007，27(12):1913-1916. 〔6〕李健，饶凡，吴逢波，等.HPLC测定鼻窦炎颗粒中的栀子苷[J].中国药师，2008，11(9):1076-1077. 〔7〕拉喜那木吉拉，胡春.HPLC测定蒙药六味木香散中栀子苷含量[J].中成药，2008，30(1):147-148. 〔8〕苏明武，王坤玲，邓超，等.高效液相色谱法测定炎热清胶囊药材浸膏栀子苷含量[J].医药导报，2008，27(11):1386-1387. 〔9〕肖培云，杨永寿，刘光明.高效液相色谱法测定小儿导赤片中栀子苷的含量[J].时珍国医国药，2008，19(5):1110-1111.