00000202_HPLC法测定银黄滴丸中黄芩苷的含量

00000202_HPLC法测定银黄滴丸中黄芩苷的含量 HPLC法测定银黄滴丸中黄芩苷的含量 刘艳，张玉萍 (天津中医药大学，天津，300193) 摘要:[目的]建立一种简便、快速的高效液相色谱法测定银黄滴丸中的指标成分 黄芩苷的含量。[方法]采用色谱柱为Kromasil C柱，乙腈-蒸馏水-四氢呋喃-18 磷酸(22?76?2?0.1)为流动相，检测波长为274nm，流速为1.0ml/min。[结 果]在浓度为5.0,150.0,g/ml范围内具有良好的线性关系，A=19054C-46154 (r=0.9997，n=8)，方法回收率为98.8%。[结论]该方法简单,灵敏度高,可用 于银黄滴丸中黄芩苷的含量测定。 关键词:银黄滴丸;黄芩苷;高效液相色谱;含量测定 Determination of baicalin in yinhuang drop pills by HPLC Liuyan，Zhang Yuping (Tianjin University of TCM，Tianjin 300193，China) Abstract: Purpose: To establish a simple and rapid method for the Determ ination of baicalin in yinhuang drop pills by HPLC.Methods: Using chromatographic column Kromasil Cand the mobile phasa consisted of 18 acetonitrile，distilled water tetrahydrofuran and orthophosphoric acid(22?76?2?0.1).The detection wavelength was set at 274nm at room temperature. The flow rate was set at 1.0 ml/min.Results: The method showed a good linear relationship in the range of 5.0,150.0,g/ml for rosuvastatin A=19054C-46154(r=0.9997，n=8).The method recovery was 98.8%. Conclusion:Themethod is simple ,quick ,sensitive ,accurate ,reproducible and can be use to control the quality of yinhuang drop pills. Key words: yinhuang drop pills; baicalin;HPLC; determination 银黄滴丸由黄芩、金银花组成,具有清热,解毒的功效,用于急、慢性扁桃体 炎,急、慢性咽喉炎,上呼吸道感染等。为有效地控制产品质量,选择方中君药黄 芩中的黄芩苷作为含量控制的指标,采用高效液相色谱法测定银黄滴丸中的黄芩 苷,该方法可靠、灵敏、快速。 1 仪器与试药 1.1仪器 :LC-10ATvp液相色谱仪，SPD-10AvpUV-VIS检测器(日本岛津);ANASTAR色谱数据处理系统(Suntex); 1.2试药:黄芩苷对照品,购于中国药品生物制品检定所(含量测定用,批号110753-200706);甲醇，乙腈，四氢呋喃(色谱纯);冰醋酸(分析纯)，磷酸(分析纯);水(二次蒸水);银黄滴丸(批号:20071009,20071025，20071029; 规格:每袋装2g)。 2 方法与结果 色谱条件: 测定复方制剂中黄芩苷含量的色谱条件多为ODS柱，用甲醇-水-磷酸(冰醋 [1][2]酸)为流动相。经试验，黄芩苷色谱峰参数不理想。参考文献的色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶〔Kromasil ODS-AP(200×4.6mm，5,m)〕;流动相为乙腈-水-四氢呋喃-磷酸(22?76?2?0.1);检测波长为274nm。 2.2 对照品溶液的制备: 精密称取黄芩苷对照品10mg，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀;精密量取5ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。 2.3 供试品溶液的制备:取本品5丸(约100mg，批号071009)，加甲醇10ml，超声处理10分钟，用微孔滤膜(0.45,m)滤过，取滤液，得到供试品溶液。 2.4 空白溶液的制备:按处方组成,取除黄芩外的其余药材,按制备工艺要求制成不含黄芩的空白对照样品,按供试品制备项下的方法制备空白溶液。分别吸取黄芩苷对照品溶液供试品溶液与空白溶液各10,l注入液相色谱仪。结果明,在上述色谱条件下黄芩苷与其他成分分离良好，空白溶液与供试品溶液比较,相应位置未出峰,认为无干扰，见图1。 黄芩苷对照品溶液 银黄滴丸供试品溶液 空白溶液 图1 2.5 线性关系考察:将上述对照品溶液依次稀释为浓度为5.0、10.0、20.0、 40.0、60.0、80.0、100.0 、150,g/ml的溶液。取各浓度标准溶液10,l，在上述色谱条件下分别进样，色谱图，以峰面积(A)对浓度(C)线性回归，求得回归方程为A=19054C-46154(r=0.9997，n=8)，黄芩苷质量在5.0,150.0,g/ml与峰面积积分值呈良好的线性关系。 2.6精密度试验:精密吸取黄芩苷对照品溶液10,l连续进样6次,测得峰面积平均值为752535,RSD值为0.92%。 2.7重复性试验:按上述供试品溶液制备方法,称取同批号样品(批号071009)6份,分别进行测定。得黄芩苷的平均含量为199mg，RSD为1.6%。 2.8供试品稳定性试验:取供试品(批号:20071009)5丸(约0.1g)，同方法精密度项下方法操作，分别于0、1、2、4、8和24h进样，平均峰面积为1012751, RSD为1.2%,表明供试品溶液在24h内稳定。 2.9回收率试验:采用标准添加法，取供试品(批号:20071009)，以适当的比例，分别加入黄芩苷对照品甲醇溶液(1mg/ml)后，依法测定，依据标准曲线求算测得量。以〔(测得量-本底值)/加入量〕×100计算回收率，测得黄芩苷的平均回收率为98.8%，结果见表1。 表1 方法回收率考察结果(n=6) 本底值加入量测得量回收率 平均含量序号 RSD(%) (mg) (mg) (mg) (%) (%) 1 10.26 5.00 15.06 96.0 2 10.34 5.00 15.48 102.8 3 10.28 10.00 19.99 97.1 98.8 2.4 4 10.18 10.00 20.08 99.0 5 10.19 15.00 25.08 99.3 6 10.34 15.00 25.12 98.6 2.10样品含量测定:分别取不同批号的银黄滴丸,精密称定,按上述样品溶液制备方法和色谱条件测定峰面积积分值,结果见表2。 表2 银黄滴丸中黄芩苷含量测定结果 批号 装量(g) 含量(mg/袋) 071009 2.08 194 071025 2.05 189 071029 2.06 191 3 讨论 银黄滴丸在含量测定方法方面采用高效液相色谱法，成功地实现了对黄芩苷的检测，很好地实现了黄芩苷与其它黄酮类物质的分离，使测定结果更接近于真实值，提高了含量测定的准确性。实验表明，该方法专属性较强。经过检测，证明了银黄滴丸这一剂型的质量稳定。 [1] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典(2005年版一部)，化学工业出版社，北京，2005:599. [2] 王瑞，李玉娟，毕开顺. RP-HPLC法测定解毒宣透汤中连翘苷、绿原酸及黄芩苷的含量. 中药材，2001，24(4):287.