邻苯二甲醛杀灭枯草杆菌黑色变种芽孢效果及其影响因素的研究

邻苯二甲醛杀灭枯草杆菌黑色变种芽孢效果及其影响因素的研究 邻苯二甲醛杀灭枯草杆菌黑色变种芽孢效 果及其影响因素的研究 中国消毒学杂志2005年第22卷第2期?l25? 文章编号:1001-7658(2005)04—0125—02 邻苯二甲醛杀灭枯草杆菌黑色变种 芽孢效果及其影响因素的研究 许能锋林立旺徐文体黄育红陈路瑶 (福建医科大学公共卫生学院,福州350004;1福建省疾病预防控制中心) 【论着】 提要为研究邻苯二甲醛最佳杀菌效果,采用载体定量杀菌试验方法对其在不同条件下杀灭枯草杆菌黑色变种芽 孢效果及其影响因素进行了观察.结果,邻苯二甲醛在pH值为8.3(碱性)条件下杀菌效果最好.在碱性条件下, 邻苯二甲醛随浓度增加杀菌效果增强,19836mg/L邻苯二甲醛对载体上枯草杆菌黑色变种芽孢作用4h,杀灭对数 值为6.35.添加表面活性剂的邻苯二甲醛以4959mg/L作用30min,对枯草杆菌黑色变种芽孢杀灭对数值即可达 5.77.而4959mg/L邻苯二甲醛纯品作用4h平均杀灭枯草杆菌黑色变种芽孢对数值为3.69;5O%小牛血清对含 有表面活性剂的碱性邻苯二甲醛杀菌效果有轻微影响;在室温下连续反复浸泡器械35d,其杀芽孢效果基本不下 降.结论,邻苯二甲醛对枯草杆菌黑色变种芽孢的杀菌效果受其浓度,pH值和表面活性剂影响较大,以含表面活 性剂的碱性邻苯二甲醛杀芽孢效果最好且性能稳定. 关键词邻苯二甲醛;杀菌;枯草杆菌黑色变种芽孢 中图分类号:R187.2文献标识码:A SI-UDY0NEFFICACYOlFo啪0一PHTHALAI.DEI啪EK? LDGSP0RESOlFBacillus subtilisvat.nigerANDITSINFLUENCINGFACTORS XUNeng一,lg,LINLi—wang. , XUWen—ti,HUANGYu—hong. , CHENLu—yao. (CollegeofPublicHealth,FujianMedicalUniversity,Fuzhou350004;1.FujianProvincialCenterforDiseasePreven— tionandControl,China) AbstractInordertostudythebestgermicidalefficacyofortho— phthalaldehyde(OPA),carrierquantitativegermicidal testwasusedtoobselweitsefficacyinkillingsporesofBacillussubtilisIJ~tr.nigerunderdifferentconditionsanditsinfluen— eingfactors.Resuhs:Ortho— phthalaldehydepresentedtllebestbactericidalefficacyunderconditionofpH8.3falka— line).UnderalkaliRecondition,thebactericidalefficacyofortho— phtllalaldehvdeincreasedwitllincreasingconcentration. nlekiHinglogarithmofBacillussubtilisvar.nigersporesoncarriersexposedto19836mg/Lortho—pphthalaldehydefor4 hwas6.35.that0f.subtilisvar.nigersporesexpo~to4959mg/Lortho— phthalaldehydecontainingsurfactantf0r3O minattained5.77,whiletheaveragelogarithmofdecreaseinB.subtilis口 nirsporesexposedto4959mg/Lpureor- tho— phthalaldehydefor4hWas3.69.50%calfserunlinfluencedslighflytllebactericidalefficacyofalkahReortho— phthalaldehydecontainingsudactant.ItssporicidalefficacyessentiallydidnotdecreasewhenitWasusedforcontinuousre— peatedimmersionofinstrumentsatroomtemperaturefor35days.Conclusions:nleefficacyo fortho—phthalaldehydein killing且subtilisvar.nigersporesWasinfluencedconsiderablybyitsconcentration.pHvalueandsurfa etant.11lealkaline ortho—phthalaldehydecontainingsurfactantpresentedthebestsporicidalefficacyandWasstable. Keywordsortho—phthalaldehyde;bactericidale~ect:Bacillussubtilis"nigerspore 戊二醛是医院内镜常用消毒剂或灭菌剂之一, 但其存在毒性,刺激性和致突变等副作用卜引,国内 外都在寻找戊二醛的替代物,许多学者提出用邻苯 二甲醛(OTtho—phthalaldehyde,OPA)代替戊二醛作 为内镜消毒剂t引.OPA在常温下为浅黄色结晶, 含量/>99%;本试验复配时添加表面活性剂,配制成 浅绿色液体,有轻微村激气味.为观察OPA杀灭细 菌芽孢效果及其影响因素,在实验室进行了研究. 现将试验结果如下. 1方法 [作者简介]许能锋(96一),男,福建省闽清人,大学,副教授.1 . 1菌片的制备 ? 126?ChineseJournalofDisinfection2005;22(2) 取枯草杆菌芽孢黑色变种(ATCC9372)芽孢悬 液,用含10g/L蛋白胨磷酸盐缓冲液(PBS)制备试 验菌悬液.取试验菌悬液0.02ml滴染于无菌不锈 钢圆片上(直径15mm,厚0.5mm),置37~C温箱烘 干.制成菌片备用. 1.2中和剂选择试验 以枯草杆菌黑色变种芽孢为代表,设6组试验 (表1),按载体定量杀菌试验程序进行.结果以第 6组不长菌;第3,4,5组组间菌数相差?10%;第1 组不长菌或菌数远少于第2组,第2组菌数?100 cfu/片,为所选中和剂及其浓度适宜. 1.3栽体定量杀菌试验 以每个菌片5ml消毒液(阳性对照为磷酸盐缓 冲液)置于20?水浴中恒温,加入菌片作用至预定 时间,取出菌片,放入含5ml中和剂的试管内,中和 作用10min;用震荡器震荡40s,洗脱钢片上的菌, 取洗脱液作活菌计数,计算杀灭对数值.所有试验 重复3次. 1.4影响因素试验 1.4.1pH值影响试验配制含量为4959mg/L的 OPA消毒剂,以酸碱调节pH值(用便携式pH计测 定pH值),进行载体定量杀菌试验. 1.4.2浓度影响试验配制不同浓度OPA碱性(pH 8.3)消毒液,进行载体定量杀菌试验. 1.4.3复配成分影响试验在碱性OPA消毒液中 添加表面活性剂.然后进行载体定量杀菌试验. 1.4.4有机物影响试验在枯草杆菌黑色变种芽孢 悬液中加入不同浓度小牛血清滴染钢片,按载体定 量法进行试验. 1.4.5连续使用稳定性试验将医用镊子,剪刀,止 血钳等清洗干净,浸泡于盛有1500ml使用浓度的 OPA消毒剂带盖搪瓷盘中,一式3份;每个搪瓷盘 含医疗器械18件为达到满载;每日捞出,用清 水清洗甩干放回,于浸泡第1,7,14,49d时取浸泡 消毒液进行载体定量杀菌试验. 2结果 2.1中和剂试验结果 试验结果证明,用含10g/L甘氨酸+1g/L卵 磷脂+10g/L吐温80的PBS,可有效中和9918mg/ L(pH8.3)OPA和含有表面活性剂的4959mg/L OPA消毒剂残余作用(表1),满足中和剂试验 要求. 2.2不同浓度OPA杀菌效果 结果证明,用碱性OPA消毒液,含量为4959 mg/L对不锈钢片上枯草杆菌黑色变种芽孢作用2 h,平均杀灭对数值只有1.36;含量为9918mg/L OPA作用2h,平均杀灭对数值为3.71;而含量为 19836mg/LOPA作用2h,平均杀灭对数值达到5. 05(表2). 表1中和剂试验结果 Table1Resultsofneutralizertest 组别 Group 平均菌数(cfu/片) Averagebacterialcount (cfu/carrier) 碱性OPA含表面活性剂OPA AlkalineOPAcontaining 0PAsurfactant 注:试验温度为20?.结果为3次试验平均值. Note:Thetemperaturewas20~C.Theresultsareme.alaSoftriplicate tests. 表2不同浓度OPA对枯草杆菌黑色变种芽孢的杀灭效果 Table2EfficacyofOPAatdifferentconcentrationsinkill- ing&subtilisvctr.nigerspores OPA含量 0PAcontent (ms/L) 作用不同时间(h)的平均杀灭对数值 Averagekillinglooathmaftercxpomire fordifferentperiodsoftime(h) l234 注:试验温度为20~C.阳性对照组平均菌数为29O9667cfu/片.结 果为5次试验平均值. Note:Thetemperaturewas20~C.rheaveragebacterialcountoftheposi- tivecontrolgroupWas29O9667cfu/carrier.Theresultsaremeallflof 5replicatedtests.. 2.3pH值影响试验结果 试验结果证明,含4959mg/LOPA消毒剂,其 pH值分别为8.3,7.0,5.7,杀菌效果依次降低;而 ,其杀菌效果亦明显降低(表3).说 pH值达到9时 明OPA杀菌效果受pH值影响明显,以pH值7.5, 8.5范围为佳. 中国消毒学杂志2005年第22卷第2期?127? 表3pH值对OPA杀芽孢效果影响试验结果 Table3ResultsoftestforhlOuenceofpHvalueOI1sporici— daiemcacyofOPA 注:试验温度为20?.结果为3次试验平均值. Note:Thetemperaturewas20?.Theresultsaremeansoftriplicate testa. 2.4表面活性剂对OPA杀芽孢效果影响结果 在pH8.3的OPA消毒液中加入表面活性剂, 以OPA含量为4959mg/L作用30min,对枯草杆菌 黑色变种芽孢杀灭对数值达到5.77;而未添加表面 活性剂相同浓度的OPA作用4h,对枯草杆菌黑色 变种芽孢杀灭对数值仅有3.69.说明表面活性剂 对OPA具有明显增效作用. 2.5有机物影响试验结果 用pH8.3并含表面活性剂OPA消毒液,以含 4959mg/LOPA对含不同浓度小牛血清枯草杆菌黑 色变种芽孢悬液染菌片作用10min和20min,随小 牛血清浓度增加,杀菌效果下降(表4).说明小牛 血清对OPA杀菌效果具有一定影响. 表4小牛血清对OPA杀灭枯草杆菌黑色变种芽孢效果的影 响结果 Table4Ii~uellCeofcalfserulnOllefficacyofOPAinkillin~ &subtilisvt~r,nigerspores 注:试验温度为20?.结果为3次试验平均值. Note:ThetemperatureWaS2O?.Theresultsalemeansoftriplicate tests. 2.6连续使用稳定性试验结果 pH8.3的含表面活性剂OPA消毒液,以含量 为4959mg/L水溶液,在室温为25,31?条件下, 反复浸泡器械,其杀灭枯草杆菌黑色变种芽孢效果 有下降趋势,但反复浸泡持续至35d后,作用30 min,对细菌芽孢杀灭对数值仍达到6.63(表5). 表5OPA(加离子表面活性剂)连续使用稳定性试验结果 Table5ResultsoftestforstabmtyofOPA(containingionic surfactant)duringcontinuoususe 注:结果为3次试验平均值. Note:The8Ie?憧目nsoftriplicatetests. 3讨论 研究发现,溶液pH值对邻苯二甲醛杀菌效果 具有明显影响,碱性条件可促进其杀菌作用,此与 Walsh等报告的结果一致,但pH值达到9时反而 使其杀菌效果下降.所以,使用邻苯二甲醛配制消 毒液,最好将pH值调至7.5,8.5为好. 研究结果还证明,某些表面活性剂可明显增强 邻苯二甲醛杀菌效果.含表面活性剂碱性邻苯二甲 醛用4959ms/L,对枯草杆菌黑色变种芽孢作用30 min,杀灭对数值>5. 邻苯二甲醛杀菌效果受试验方法的影响亦值得 注意.walsh等用5000mg/L碱性邻苯二甲醛作 用4h,对细菌芽孢杀灭对数值只有0.14;李长青 等?用4800mg/L碱性邻苯二甲醛枯草杆菌黑色变 种芽孢作用2h,杀灭对数值>5;这些差异均可能由 试验方法不同所致. 有机物对含表面活性剂 有机物影响试验表明, 的碱性OPA杀菌效果有轻微影响,在有效作用剂量 之下显不出影响.此结论与相关文献报道基本相 同'一引. 参考文献 【1]DasT,Sharmas,SinshJ,eta1.Evaluationofglutaraldehydeand providoneiodineforsterilizationofwide—fieldcontactvitrectomy lenses[J].OphthalmicSurgLasel~,2001;32(4):300. (下转第124页) ? l24?ChineseJournalofDisinfection2005;22(2) 紫外线,干燥以及大多数消毒剂均比较敏感.高致 病性禽流感病毒HN和HN.,均属甲型流感病毒, 对消毒处理的抗力并不高.在pH值为2的酸性环 境,56~C加热,或70%乙醇作用30rain,其感染性均 能被破坏.Pirtle比较l3种病毒对热力,紫外线及 各类消毒剂的敏感性发现,在所有测试中,流感病 毒,疱疹病毒与辛德毕斯病毒的抵抗力都相对较 低?】.日本学者比较了各类病毒对包括碘伏,氯已 定,苯扎氯铵等常用消毒剂的抗力后指出,流感病毒 对碘伏最为敏感,含有效碘5000mg/I~的碘伏作用 15s即可将流感病毒完全灭活,而对其它所测消毒 剂的抗力稍强】.Bemstein等人使用悬液法评价含 1200mg/I~氯已定的漱口液对病毒的灭活效果发 现,对甲型流感病毒作用30s杀灭率即达到93%,5 rain杀灭率达98%以上J. 有机物的存在会降低各类消毒剂对禽流感病毒 的灭活效果.使用1.73mg/L过氧化氢气体熏蒸对 实验安全柜中存在于不同物体表面的多种禽类与哺 乳动物类病毒作用30rain后发现,禽流感病毒对数 滴度可由9.6ELD?降至0,抗力低于黄热病毒,微 小RNA病毒以及杯状病毒.相比而言存在于血液 中的病毒抗力强于不锈钢表面的存活病毒r. 本研究比较了甲型流感病毒,脊髓灰质炎病毒 (PV一1),F:噬菌体,大肠杆菌,金黄色葡萄球菌, 对热力消毒,过氧乙酸,次氯酸钠,二氧化氯,乙醇, 碘伏等的抗力大小.结果发现,甲型流感病毒的抗 力,明显低于脊髓灰质炎病毒与F噬菌体的抗力. 在相同的条件下,甲型流感病毒对消毒处理的抵抗 力,与大肠杆菌,金黄色葡萄球菌接近.这与文献报 告的结论基本一致. 根据本试验结论,可以作如下推论:可以选择大 肠杆菌,金黄色葡萄球菌,作为流感病毒消毒评价的 快速指标微生物,从而大大缩短实验室评价的时间, 加快高致病性禽流感病毒专用消毒剂的研制与开 发.同时,在评价现场消毒效果时,也可选择实验室 培养的细菌繁殖体作为观察指标,对比消毒前后微 生物的数量下降情况,以判断消毒处理是否达到消 毒的合格效果. 参考文献 [1]卫生部卫生法制与监督司.消毒技术[s].北京:中华人 民共和国卫生部,2002:15,39. 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