广州管圆线虫对淡水螺感染性的实验研究

广州管圆线虫对淡水螺感染性的实验研究 广州管圆线虫对淡水螺感染性的实验研究 中国热带医学2007年第7卷第9期CHINATROPICALMEDICINEVo1.7No.9September2007l5l7 广州管圆线虫对淡水螺感染性的实验研究 刘义,高世同,耿艺介,黄达娜,张仁利 [论着] 摘要:目的比较研究广州管圆线虫对褐云玛瑙螺,福寿螺,中国圆田螺三种食用淡水螺感染性.方法在相 同的条件下,用广州管圆线虫I期幼虫感染三种螺2,4,8,12及24h后,随机抽样各20只,分别饲养于置有滤水器,水 温(24?1)?的玻璃缸内:感染2周内各组螺死亡数.第15d开始解剖,记录螺软体重量和感染虫数.同时设不 感染螺对照组.结果三种螺感染后均有死亡,第5d死亡数达高峰.三种螺的感染率和死亡率与螺的种类及感染 时间均无相关性,福寿螺感染8,12及24h均显着高于感染2h(P值均<0.05);褐云玛瑙螺感染24h均显着高于感染 2,4,8及12h的(P值均<0.05),中国圆田螺感染2,4,8,12及24h各组间差异均无显着性(P值均>0.05),褐云玛瑙 螺感染8,l2及24h的虫负荷均显着高于福寿螺和中国圆田螺(P值均<0.05).结论褐云玛瑙螺,福寿螺对广州 管圆线虫易感并有较高的相容性,其中褐云玛瑙螺的相容性较强. 关键词:广州管圆线虫;褐云玛瑙螺;福寿螺;中国圆田螺;相容性 中图分类号:R383.1文献标识码:A文章编号:1009—9727(2007)9—1517—03 ExperimentalstudyontheinfectivenessofAngiostrongyluscantonensistothreespeciesoffr eshwatersnails.LIUYi, GAOShi—tong,GENGYi—jie,eta1.(BaoanDistrictGongmingHealthCenter,Shenzhen518000,Guangdong,P.R.Chin a) Abstract:0bjectiveTocomparethecompatibilityofthreespeciesoft~eshwalersnails,Achatinafulica;Bellamya aeruginosa;CipangopaludinachinensiswithAngiostrongyluscantonensis.MethodsThethreespeciesofsnailswereinfectedby thefirst— stagelarvaeofAngiostrongyluscatlonensisundersameconditions.Twentysnailsofeachspecieswenrandomlysampled2, 4,8,12,24hoursafterexposedtothelarvae.Eachgroupwasputintoanaquarium.Anothergroupofthesamespeciesandnumber wastakenascontro1.Alltheaquariawereequippedwithafilter,thewatertemperaturewaskeptat(24?1)?.Inthefirsttwo weeks,thenumberofdeathwasrecorded.Later,thesnailsweresuccessivelyexaminedtorecordtheweightandWOIlTIburdenofeach snail.ResultsSomesnailsweredeadmostlyoccurredonthefifthdayofinfection.Thedeathrateandinfectionratewerenot associatedwithexposuretimeandsnailspecies.WormburdenofAchatinalica8,12and24hoursafterinfectionwassignificantly higherthantheothertwospecies2hoursafterinfection(P<0.05).However,theWOIlTIdensityofAchatinafulicaandB. aeruginosawasnotsignificantlydifferentbuthigherthanthatofCipangopaludinachinensis.Nosignificantdifferenceinworlnburden wasobservedinCipangopaludinachinensisamongeachgroups2,4,8,12and24hoursafterinfection(P>0.05).ThewoIlTI burdenofAchatinafulica8,12and24hoursafterinfectionwassignificantlyhigherthanthatofBellamyaaerugynosaand Cipangopaludinachinensis(P<0.05).ConclusionAchatinafulicaandandBellamyaaeruginosaaresusceptibleto AngiostrongyluscantonensisaswellasahighercompatibilitywithA.cantonensis.ThecompatibilityofA.fulicawithAngiostrongylus cantonensisissuperiortotheotherspecies. Keywords:Angiostrongyluscantonensis;Achatinalica;Bellamyaaeruginosa;Cipangopal udinachinensis;Compatibility 近年来,广州管圆线虫病的感染呈上升趋势.自2006年6 月北京友谊医院收治全市首例广州管圆线虫病患者以来,已确 诊广州管圆线虫病的患者已增至70余人,其中绝大多数患者 都因食用了凉拌福寿螺而发病.福寿螺是广州管圆线虫的主 要中间宿主之一,随着人们饮食习惯的改变,广州管圆线虫病 对人类的致病机会不容忽视. 随着气候变暖和气象异常事件的频繁发生,专家预测螺类 传播媒介的自下而上生存范围可能扩大,这对寄生虫病的发 生,发展有重要影响….自1986年福寿螺(Pomacea canaiiculata)首次被证明是广州管圆线虫(Angiostrongylus cantonensis)的适宜中间宿主以后,Et本,台湾地区,中国大陆等 地相继发生了自然感染的福寿蝌,并成为中国大陆文笔这圆 线虫病传播中是为主要的中间宿主之一3.但是,广州管圆线 虫的中间宿主多达50余种.国内市场上常见的褐云玛瑙螺 (Achatinafulica),中国圆田螺(Cipangopaludinachinensis)等食用 淡水螺也被证明可以自然感染广州管圆线虫.4J.为掌握这些 食用淡水螺的潜在传播危险性,我们对3种食用淡水螺与广州 管圆线虫的相容性进行了实验研究. 1材料与方法 1.1材料 1.1.1中间宿主3种食用淡水螺福寿螺和中国圆田螺于 2006年9月采自深圳龙岗癸涌地区,褐云玛瑙螺于2006年9 * 基金项目:深圳市科技项目(2007年度) 作者单位:1.深圳市宝安区公明预防保健所,广东深圳518000;2.深圳市疾病预防控 制中心分子生物研究室,广东深圳518020 作者简介:刘义.主管医师,主要从事传染病流行病学. 通讯作者:张仁利,医学博士,教授,主任医师,主要从事热带病研究. 1518CHINATROPICALMEDICINEVo1.7No.9September2007中国热带医学2007 年第7卷第9期 月采自深圳市罗湖区植物园,3种螺均在实验室繁殖后代,实 验室繁殖的后代无广州管圆线虫感染,以此作为广州管圆线虫 攻击感染的实验材料. 1.1.2广州管圆线虫1期幼虫广州管圆线虫模型动物购自 中山大学基础医学院寄生虫学教研室,模型动物的建立首先将 自然感染广州管圆线虫的褐云玛瑙螺,于2006年7月采自深 圳市南山区.将其压碎,去壳,组织匀浆后,按照文献L9J消化 法,置于人工消化液(0.2%胃蛋白酶,0.7%HCI)k37?2h,解 剖镜下分离广州管圆线虫?期幼虫.取8O条活跃幼虫灌胃感 染sD大鼠,6周后,每隔12h收集1次24h内的粪便,将所有粪 便浸泡在去氮水中,过滤,淘洗5,6次,每次静置15,30rain后 倾除上清液,用去氯水稀释沉渣,配制I期幼虫混悬液,备用. 1.2方法 1.2.1感染螺将3种螺分别置于有充气泵和滤水器的恒温 (24?2)?玻璃缸(59cmx55cmcm×33era)中饲养1周,待其生 存状态稳定后进行感染.将过渡,淘洗后的广州管圆线虫I期 幼虫混县液搅匀,分成2份,每份含I期幼虫约150000条,分 别倒人2个感染缸内,加水至深1cm.随机取3种螺各5O只, 混匀,随机放人2个感染缸内使其感染.分别于感染后2,4,8, l2及24h从2个感染缸中随机取3种螺各2O只,清水洗净,另 外取未感染的3种螺各2O只作为阴性对照. 1.2.2饲养取感染后不同时间的3种螺各20只常规饲养在 带充气泵和滤水器的玻璃缸中.统计2周内死亡情况. 1.2.3解剖感染螺饲养2周后解剖,在解剖镜(Nikon,日本) 及显微镜(Nikon,日本)下检查螺体感染情况.将螺压碎,去 壳,称重,剪碎软体,置绞碎机进一步粉碎,然后倒人量杯,加人 人工消化液(按"2g胃蛋白酶/1000ml及0.7%HCI"配制),于 37?消化2h.检查螺体内幼虫. 1.2.4观察指标包括实验螺数,已感染螺数,死亡螺数,检出 幼虫数,各螺的重量等.统计死亡率,感染率,感染度和虫密度. 死亡率=死亡螺数/实验感染螺总数; 感染率=被感染螺数/实验感染螺总数; 感染度即为虫负荷,是每一螺体内幼虫的绝对数量; 虫密度=虫负荷/螺重量. 1.2.5统计与分析采用SPSS(11.0)软件统计分析螺死亡 率,感染度,感染率.用Logistic回归分析死亡率,感染率与螺 的种类及感染时间相关性.用箱式图(中位数,四分位数,最大 值,最小值)描术3种螺的虫负荷与虫密度随感染时间的变化. 用Kruskal—Wallis法检验同种螺的虫负荷和虫密度与感染时 间的关系,检验相同感染时间组3种螺的虫负荷和虫密度的差 异.如差异显着,则进一步对各观察值取秩次并通过方差分 析法进行两两比较. 2结果 2.1三种螺死亡情况感染后2周内3种螺的死亡数相似, 福寿螺占35%(8/20),中国圆田螺占45%(9/20),褐云玛瑙螺 占35%(8/20).死亡高峰为感染第1周,占总死亡数的4l% (22/60).第8天后死亡率明显降低.通过Logistic回归分析结 果表明,死亡率与螺的种类无相关性(表1). 2.2感染率检验结果显示,感染24h褐云玛瑙螺的感染 率(75%)显着高于福寿螺(50%)和中国圆田螺的感染率 (41%)(=7.348,P<0.05),福寿螺和中国圆田螺的感染率 差异均无显着性(P>O.05). 表1三种不同淡水螺在不同感染时间的死亡率 Table1啊deathrateofdiff~atfreshw越髓8na丑Ondiffea~nt 2.3感染度 2.3.1虫负荷福寿螺和褐云玛瑙螺的虫负荷在不同感染肘 间组差异具有显着性(P<O.05).4,8,12,24h组显着高于2h 组,其他各组之间差异不显着.中国圆田螺不同感染时间组, 差异无显着性(P>0.05). 相同感染时间的三种螺比较显示,2,4h感染组,虫负荷差 异无显着性(P>O.05),而8,l2,24h感染组虫负荷,褐云玛瑙 螺显着高于其他2种螺(P<O.05)(图1). 700 500 500 400 300 200 1OO O 图1三种淡水螺的虫负荷比较 Fig1ComparisonOnwol'nlbul'dellamongthree叩ecie8fresh硼m snailA 2.3.2虫密度感染24h三种螺感染虫密度两两比较均有显 着性,其中褐云玛瑙螺的虫密度显着高于福寿螺和中国圆田螺 (P<0.05).福寿螺感染虫密度也显着性的高于中国圆田螺 (P<0.05)(图2). 图2三种淡水螺虫密度比较 Fig2ComparisonOnwol-nldensityamongthreespeciesfreshwlit~l" 3讨论 寄生虫的感染性和毒性与宿主的抵抗力都是寄生关系的 ?们约??的??0 1^1^1^l C-{-e, 中国热带医学2007年第7卷第9期 CHINATROPICALMEDICINEVo1.7No.9September2007l5l9 直接表现,但它们之间常有品系的差异.应用相容性可以更好 地表达寄生虫和宿主之间的相互关系』.相容性包括寄生虫 』.评价其相容性的指 对宿主的识别,穿透及在宿主体的发育_6 标有:感染致死率,感染率,感染度,发育历期等. 实验结果表明,三种螺感染广州管圆线虫后,死亡率与感 染相关,但与螺的种类及感染时间无相关性.感染螺的死亡主 要集中在感染后1周内,可能与广州管圆线虫幼虫的侵入与移 行有关.螺的感染率与种类有关,褐云玛瑙螺和福寿螺均易 感,寄生虫与贝类宿主之间存在种宿特异性,我们的实验证实 褐云玛瑙螺是广州管圆线虫的最适中间宿主. 螺的虫负荷,虫密度,存在较大的差异.虫密度更加说明 褐云玛瑙螺对广州管圆线虫的易感性,表明在螺的群体中存在 易感的种类,在很短的感染时间内即可达到较大的虫负荷中虫 密度.由于虫负荷和虫密度的个体差异不呈正态分布,不能用 算术均数统计描述.故本研究采用了箱式图描述三种螺的虫 负荷与密度的变化. 虫负荷常被用于评价感染].本研究中的三种螺体重差 异较大,若单用虫负荷来衡量与各种螺的相容性可能会掩盖其 真实性,故作者采用了虫密度这一指标,从而解决了由于螺体 重差异较大所带来的偏差.用虫负荷进行统计分析显示,褐云 玛瑙螺的感染度显着高于其他两种螺;而用虫密度进行统计分 析又表明,褐云玛瑙螺的感染度与福寿螺和中国圆田螺差异有 显着性.这一结果提示,褐云玛瑙螺作为广卅I管圆线虫的中间 宿主应当受到重视. 福寿螺是外来人侵物种,不仅影响入侵地的生态,也是广 州管圆线虫的重要中间宿主l8』.近年来广卅I管圆线虫病的几 次暴发流行足以证明这一点l9』.褐云玛瑙螺和中国圆田螺也 是市场常见的两种淡水食用螺,已经被证实可以自然感染广州 管圆线虫』,而且因食用褐云玛瑙螺和中国圆田螺引起的广州 管圆线虫病已有报道ll,本研究可以看出褐云玛瑙螺和福寿 螺对于传播广州管圆线虫病存在很大的潜在危险性,应当提高 警惕. 参考文献: [1]MeCarthyJJ,CanzianiOF,LearyNA,eta1.ClimatechangeImpacts, adaptationandvulnerabilitycontributionofworkinggroupstothethird assessmentreportoftheintergovemmentalpanelonclimatechange(IPCC) [M].2001,CambridgeUniversityPress,UK. 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