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血清谷丙转氨酶的测定实验报告

2017-09-26 8页 doc 21KB 4980阅读

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血清谷丙转氨酶的测定实验报告血清谷丙转氨酶的测定实验报告 转氨酶 血清 测定 实验 报告 血清谷丙转氨酶正常值 血清谷丙转氨酶偏低 篇一:实验五血液中谷丙转氨酶活力的测定 实验五 血液中谷丙转氨酶活力的测定 【目的和要求】 了解转氨酶在代谢过程中的重要作用及其在临床诊断中的意义,学习转氨酶活力测定的原理和方法。 【原理】 生物体内广泛存在的氨基移换酶也称转氨酶,能催化α-氨基酸的α-氨基与α-酮基酸的α-酮基互换,在氨基酸的合成和分解、尿素和嘌呤的合成等中间代谢过程中有重要作用。转氨酶的最适pH接近7.4,它的种类甚多,其中以谷氨酸-草酰...
血清谷丙转氨酶的测定实验报告
血清谷丙转氨酶的测定实验 转氨酶 血清 测定 实验 报告 血清谷丙转氨酶正常值 血清谷丙转氨酶偏低 篇一:实验五血液中谷丙转氨酶活力的测定 实验五 血液中谷丙转氨酶活力的测定 【目的和要求】 了解转氨酶在代谢过程中的重要作用及其在临床诊断中的意义,学习转氨酶活力测定的原理和方法。 【原理】 生物体内广泛存在的氨基移换酶也称转氨酶,能催化α-氨基酸的α-氨基与α-酮基酸的α-酮基互换,在氨基酸的合成和分解、尿素和嘌呤的合成等中间代谢过程中有重要作用。转氨酶的最适pH接近7.4,它的种类甚多,其中以谷氨酸-草酰乙酸转氨酶(简称谷草转氨酶)和谷氨酸-丙酮酸转氨酶(简称谷丙转氨酶)的活力最强。它们催化的反应如下。 正常人血清中只含有少量转氨酶。当发生肝炎,心肌梗死等病患时,血清中转氨酶活力常显著增加,所以在临床诊 1 断上转氨酶活力的测定有重要意义。 测定转氨酶活力的方法很多,本实验采用分光光度法。谷丙转氨酶作用于丙氨酸α-酮戊二酸后,生成的丙酮酸与2,4-二硝基苯肼作用生成丙酮酸2,4-二硝基苯腙。 丙酮酸2,4-二硝基苯腙加碱处理后呈棕色,可用分光光度法测定。从丙酮酸2,4-二硝基苯腙的生成量,可计算酶的活力。 【操作方法】 2,4-硝基苯肼可与有酮基的化合物作用形成苯腙。底物中的α-酮戊二酸与2,4-二硝基苯肼反应,生成α-酮戊二酸苯腙。因此,在制作曲线时,须加入一定量的底物,(内含α-酮戊二酸)以抵消由α-酮戊二酸产生的消光影响。 先将试管置于37?恒温水浴中保温10min以平衡内外温度。向各管内加入0.5ml2,4-二硝基苯肼溶液后再保温20min,最后,分别向各管内加入0.4mol/L氢氧化钠溶液5ml。在室温下静置30min,以0号管作空白,测定520nm的光吸收值。用丙酮酸的微摩尔数为横坐标,光吸收值为纵坐标,画出标准曲线。 2(酶活力的测定:取2支试管并标号,用第1号试管做为未知管,第2号试管做为空白对照管。各加入谷丙转氨酶底物0.5ml,置于37?水浴内10min,使管内外温度平衡。取血清0.1ml加到第1号试管内,继续保温60min。到60min 2 时,向两支试管内各加入2,4-二硝基苯肼试剂0.5ml,于37?保温20min,然后再向2支管中加入0.4mol/L氢氧化钠溶液5ml。在室温下静置30min后,测定未知管的520nm波长光吸收值(显色后30min至2小时内其色度稳定)。在标准曲线上查出丙酮酸的微摩尔数。(用1μmol丙酮酸代1.0单位酶活力)。计算每100ml血清中转氨酶的活力单位数。 【试剂和器材】 一`试剂 1(试管及试管架 2(吸管 3(恒温水浴 4(分光光度计 二`器材 1(0.1mol/L磷酸缓冲液(pH7.4) 2(2.0μmol/ml丙酮酸钠标准溶液。 取分析纯丙酮酸钠11mg溶解于50ml磷酸缓冲液内 [当日配制]。 3(谷丙转氨酶底物。 取分析纯α-酮戊二酸29.2mg DL-丙氨酸1.78g克置于小烧杯内,加1mol/L氢氧化钠溶液或1mol/L盐酸调整pH至7.4后,加磷酸缓冲液至100ml。然后加氯仿数滴防腐。此溶液每毫升含α-酮戊二酸2.0μmol,丙氨酸200μmol。[在冰箱内可保存一周]。 4(2,4-二硝基苯肼溶液。 在200ml锥形瓶内放入分析纯2,4-硝基苯肼19.8mg,加100ml 1 mol/L盐酸。把锥形瓶放在暗处并不时摇动,待2, 3 4-二硝基苯肼全部溶解后,滤入棕色玻璃瓶内置 [冰箱内保存]。 5(0.4mol/L氢氧化钠溶液。 6(人血清 [冰箱内保存] 篇二:实验五 血液中谷丙转氨酶活力的测定 实验五 血液中谷丙转氨酶活力的测定 【目的和要求】 了解转氨酶在代谢过程中的重要作用及其在临床诊断中的意义,学习转氨酶活力测定的原理和方法。 【原理】 生物体内广泛存在的氨基移换酶也称转氨酶,能催化α-氨基酸的α-氨基与α-酮基酸的α-酮基互换,在氨基酸的合成和分解、尿素和嘌呤的合成等中间代谢过程中有重要作用。转氨酶的最适pH接近7.4,它的种类甚多,其中以谷氨酸-草酰乙酸转氨酶(简称谷草转氨酶)和谷氨酸-丙酮酸转氨酶(简称谷丙转氨酶)的活力最强。它们催化的反应如下。 正常人血清中只含有少量转氨酶。当发生肝炎,心肌梗死等病患时,血清中转氨酶活力常显著增加,所以在临床诊断上转氨酶活力的测定有重要意义。 测定转氨酶活力的方法很多,本实验采用分光光度法。谷丙转氨酶作用于丙氨酸α-酮戊二酸后,生成的丙酮酸与2,4-二硝基苯肼作用生成丙酮酸2,4-二 硝基苯腙。 4 丙酮酸2,4-二硝基苯腙加碱处理后呈棕色,可用分光光度法测定。从丙酮酸2,4-二硝基苯腙的生成量,可计算酶的活力。 【操作方法】 1(标准曲线的给制:取6支试管,分别标上0,1,2,3,4,5六个号。按 2,4-硝基苯肼可与有酮基的化合物作用形成苯腙。底物中的α-酮戊二酸与2,4-二硝基苯肼反应,生成α-酮戊二酸苯腙。因此,在制作标准曲线时,须加入一定量的底物,(内含α-酮戊二酸)以抵消由α-酮戊二酸产生的消光影响。 先将试管置于37?恒温水浴中保温10min以平衡内外温度。向各管内加入0.5ml2,4-二硝基苯肼溶液后再保温20min,最后,分别向各管内加入0.4mol/L氢氧化钠溶液5ml。在室温下静置30min,以0号管作空白,测定520nm的光吸收值。用丙酮酸的微摩尔数为横坐标,光吸收值为纵坐标,画出标准曲线。 2(酶活力的测定:取2支试管并标号,用第1号试管做为未知管,第2号试管做为空白对照管。各加入谷丙转氨酶底物0.5ml,置于37?水浴内10min,使管内外温度平衡。取血清0.1ml加到第1号试管内,继续保温60min。到60min时,向两支试管内各加入2,4-二硝基苯肼试剂0.5ml,于37?保温20min,然后再向2支管中加入0.4mol/L氢氧化钠 5 溶液5ml。在室温下静置30min后,测定未知管的520nm波长光吸收值(显色后30min至2小时内其色度稳定)。在标准曲线上查出丙酮酸的微摩尔数。(用1μmol丙酮酸代表1.0单位酶活力)。计算每100ml血清中转氨酶的活力单位数。 【试剂和器材】 一`试剂 1(试管及试管架 2(吸管 3(恒温水浴 4(分光光度计 二`器材 1(0.1mol/L磷酸缓冲液(pH7.4) 2(2.0μmol/ml丙酮酸钠标准溶液。 取分析纯丙酮酸钠11mg溶解于50ml磷酸缓冲液内 [当日配制]。 3(谷丙转氨酶底物。 取分析纯α-酮戊二酸29.2mg DL-丙氨酸1.78g克置于小烧杯内,加1mol/L氢氧化钠溶液或1mol/L盐酸调整pH至7.4后,加磷酸缓冲液至100ml。然后加氯仿数滴防腐。此溶液每毫升含α-酮戊二酸2.0μmol,丙氨酸200μmol。[在冰箱内可保存一周]。 4(2,4-二硝基苯肼溶液。 在200ml锥形瓶内放入分析纯2,4-硝基苯肼19.8mg,加100ml 1 mol/L盐酸。把锥形瓶放在暗处并不时摇动,待2, 6 4-二硝基苯肼全部溶解后,滤入棕色玻璃瓶内置 [冰箱内保存]。 5(0.4mol/L氢氧化钠溶液。 6(人 血清 [冰箱内保存] 篇三:实验五血液中谷丙转氨酶活力的测定_4 实验五 血液中谷丙转氨酶活力的测定 【目的和要求】 了解转氨酶在代谢过程中的重要作用及其在临床诊断中的意义,学习转氨酶活力测定的原理和方法。 【原理】 生物体内广泛存在的氨基移换酶也称转氨酶,能催化α-氨基酸的α-氨基与α-酮基酸的α-酮基互换,在氨基酸的合成和分解、尿素和嘌呤的合成等中间代谢过程中有重要作用。转氨酶的最适pH接近7.4,它的种类甚多,其中以谷氨酸-草酰乙酸转氨酶(简称谷草转氨酶)和谷氨酸-丙酮酸转氨酶(简称谷丙转氨酶)的活力最强。它们催化的反应如下。 正常人血清中只含有少量转氨酶。当发生肝炎,心肌梗死等病患时,血清中转氨酶活力常显著增加,所以在临床诊断上转氨酶活力的测定有重要意义。 测定转氨酶活力的方法很多,本实验采用分光光度法。谷丙转氨酶作用于丙氨酸α-酮戊二酸后,生成的丙酮酸与2,4-二硝基苯肼作用生成丙酮酸2,4-二硝基苯腙。 7 丙酮酸2,4-二硝基苯腙加碱处理后呈棕色,可用分光光度法测定。从丙酮酸2,4-二硝基苯腙的生成量,可计算酶的活力。 【操作方法】 2,4-硝基苯肼可与有酮基的化合物作用形成苯腙。底物中的α-酮戊二酸与2,4-二硝基苯肼反应,生成α-酮戊二酸苯腙。因此,在制作标准曲线时,须加入一定量的底物,(内含α-酮戊二酸)以抵消由α-酮戊二酸产生的消光影响。 先将试管置于37?恒温水浴中保温10min以平衡内外温度。向各管内加入0.5ml2,4-二硝基苯肼溶液后再保温20min,最后,分别向各管内加入0.4mol/L氢氧化钠溶液5ml。在室温下静置30min,以0号管作空白,测定520nm的光吸收值。用丙酮酸的微摩尔数为横坐标,光吸收值为纵坐标,画出标准曲线。 2(酶活力的测定:取2支试管并标号,用第1号试管做为未知管,第2号试管做为空白对照管。各加入谷丙转氨酶底物0.5ml,置于37?水浴内10min,使管内外温度平衡。取血清0.1ml加到第1号试管内,继续保温60min。到60min时,向两支试管内各加入2,4-二硝基苯肼试剂0.5ml,于37?保温20min,然后再向2支管中加入0.4mol/L氢氧化钠溶液5ml。在室温下静置30min后,测定未知管的520nm波长光吸收值(显色后30min至2小时内其色度稳定)。在标 8 准曲线上查出丙酮酸的微摩尔数。(用1μmol丙酮酸代表1.0单位酶活力)。计算每100ml血清中转氨酶的活力单位数。 【试剂和器材】 一`试剂 1(试管及试管架 2(吸管 3(恒温水浴 4(分光光度计 二`器材 1(0.1mol/L磷酸缓冲液(pH7.4) 2(2.0μmol/ml丙酮酸钠标准溶液。 取分析纯丙酮酸钠11mg溶解于50ml磷酸缓冲液内 [当日配制]。 3(谷丙转氨酶底物。 取分析纯α-酮戊二酸29.2mg DL-丙氨酸1.78g克置于小烧杯内,加1mol/L氢氧化钠溶液或1mol/L盐酸调整pH至7.4后,加磷酸缓冲液至100ml。然后加氯仿数滴防腐。此溶液每毫升含α-酮戊二酸2.0μmol,丙氨酸200μmol。[在冰箱内可保存一周]。 4(2,4-二硝基苯肼溶液。 在200ml锥形瓶内放入分析纯2,4-硝基苯肼19.8mg,加100ml 1 mol/L盐酸。把锥形瓶放在暗处并不时摇动,待2,4-二硝基苯肼全部溶解后,滤入棕色玻璃瓶内置 [冰箱内保存]。 5(0.4mol/L氢氧化钠溶液。 6(人血清 [冰箱内保存] 9 10
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