【doc】 评价头孢西丁和苯唑西林纸片扩散法测定耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

【doc】 评价头孢西丁和苯唑西林纸片扩散法测定耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 评价头孢西丁和苯唑西林纸片扩散法测定 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 江西医学检验2005年12月第23卷第6期 ? 实验研究? 评价头孢西丁和苯唑西林纸片扩散法测定耐甲氧西林金黄色 葡萄球菌, 丁茂文李国雄陈丽珠丁文杰 中图分类号R446.5,Q939.92,R378.11文献标识码A文章编号1008—0023(2005)06—0555—03 I摘要】目的评价头孢西丁和苯唑西林纸片扩散法检测耐甲氧两林金黄色葡萄球菌(MIsA)的临床 价值.用头孢西丁和苯唑西林纸片扩散法检测临床分离的200株金黄色葡葡球菌,以测定PBP2a 的MRSA一乳胶凝集试验作为”金标准”结果92株PBP2a阳性金黄色葡萄球菌巾.头孢西丁和苯唑 西林纸片扩散法分别检出MRSA91株和84株:108株PBP2a阴性中,头孢西丁纸片扩散法全部为阴性, 苯唑西林纸片扩散法阴性为103株以PBP2a检测结果为标准.头孢西丁和苯唑西林纸片扩散法检测 MRSA的特异性分别为100.0%和95.4%.敏感性分别为98.9%和91-3%.5株苯唑西林纸片扩散法检测 为巾介的菌株.经PBP2a检测结果征实.3株为MRSA,2株为MSSA.结论头孢西丁比苯唑西林更适合 检测MRSA.并能提高测定MRSA的可靠性,是临床实验室常规检测MRSA的首选方法. [关键词】_头孢西丁:苯唑西林:乳胶凝集试验;甲氧两林耐药;金黄色葡萄球菌 耐甲氧两林金黄色葡萄球菌(MRSA)的感染几 乎遍及全球.南于其异质性及多重耐药性.极易引 起感染的爆发流行.采用快速,简便,可靠的方法准 确测定MRSA是控制感染.防止MRSA扩散和传播 的重要措施之一目前测定mecA或PRP被公认 为是检测MRSA的金标,/隹【21.但这些方法因仪器和 费用等因素的限制.在临床实验室难以常规开展. 纸片扩散法仍是临床微生物室常规检测MRSA的 首选方法MRSA表型耐药的多样化受培养条件和 抗生素使用情况等许多因素的影响.给苯唑西林纸 片扩散法等一些常用表型方法测定MRSA带来了 困难而头孢西丁检测mecA介导的MRSA的比苯 唑西林更可靠【:一.NCCLs也明确了头孢西丁纸片扩 散法是检测MRSA的首选方法[41为此我们以i贝0定 mecA基因编码的青霉素结合蛋白2a(PBP2a)作为” 金标准”.分析头孢两丁和苯唑西林纸片扩散法对 临床分离的200株金黄色葡萄球菌的检测结果. 1材料与方法 1.1材料 1.1.1菌株来源从一20?保存的菌株库中.挑出 2002年1月2005年4月所保存的200株金黄色 葡萄球菌并加以复苏,其中呼吸道标本65株,中段 作者单位:323000浙江省温州医学院附属第五医院(浙江省 丽水市中心医院1 作者简介:丁茂文,男,1968年8月生,浙江缙云人,毕业于温 州医学院检验系,主管技师,主要从事临床微生物检验工作. 尿40株,创面分泌物35株,脓液26株,jf?液1l 株,胆汁8株,其他标本15株.质控菌株为金黄色 葡萄球菌ATCC25923和ATCC43300 1.1.2主要试剂MRSA一乳胶凝集测定试剂盒为 法国生物梅里埃公司产品.头孢西丁(FOX,30g, 片)纸片,苯唑西林(ox,1IXg,片)纸片和MH琼脂为 英国OXOTD公司产品 1.2方法 1.2.1MRSA一胶乳凝集试验测定PBP2a:按厂家 提供的操作说明进行 1.2.2头孢西丁和苯唑西林纸片扩散试验采用 K—B法.按照2005年NCCLs标准进行【4J:挑取孵育 18,24h的单个菌落.以生理盐水释至0.5麦氏浊 度.以无菌拭子涂抹M—H琼脂表面待干后.帖上头 孢西丁30g/片和苯唑西林1g/片,35’E孵育满 24h.头孢西丁纸片判断标准:以抑菌环直径?19mm 为MRSA,~>20mm为甲氧两林敏感金黄色葡萄球 菌(MSSA)苯唑西林判断标准:以抑菌环直径? 10mm为MRSA,ll,12mm为中介,?13mm为 MSSA. 2结果 2.1200株金黄色葡萄球菌由MRSA一乳胶凝集 试验测得PBP2a阳性92株,阴性108株;头孢西丁 纸片扩散法测得MRSA91株和MSSA109株:苯唑 西林纸片扩散法测得MRSA87株,MSSA108株和 中介5株以PBP2a检测结果为标准,头孢西丁和 Jian~iJ.MedLabSci.December2005,Vol23,No6 苯唑两林纸片扩散检测MRSA的特异性分别为100.0%和95.4%,敏 感性分别为98.9%和91.3%.三 表l3种方法测定200株金黄色葡萄球菌结 种方法测定金黄色葡萄球菌结果见表1. 2.25株苯唑两林纸片扩散法检测为中介的菌 株.经PBP2a检测结果证实,3株为MRSA,2株为 MSSA:头孢两丁纸片扩散法的检测结果与PBP2a 结果一致.三种方法测定金黄色葡萄球菌不一致结 表23种办法测定金黄色葡萄球菌结果不一致菌株比较 汪:I.表OX法结米为中敏 果见表2. 2.3头孢两丁纸片扩散法测得MRSA91株.其抑 菌环直径为6—19mm.抑菌环直径6mm的有70株 (76.9%).7,17mm的有18株(19.8%):测得MSSA 108株,其抑菌环直径为23,36mm.主要集中在 25,33ram.共有104株(96.2%):1株PBP2a阳性而 头孢西丁纸片扩散法为阴性的金黄色葡萄球菌.其 抑菌环直径为25mm 3讨论 金黄色葡萄球菌细胞壁的主要成分肽聚糖是 由N一乙酰葡萄糖胺和N一乙酰胞壁酸交联形成青 霉素结合蛋(PBPs)催化其中的转肽反应苯唑西 林等B一内酰胺类抗生素能竞争PBPs的活性位 点,当抗生素浓度达到MICs.可使PBPs失去催化活 性.抑制细胞壁的合成.细菌无法复制.而MRSA则 由meeA基因编码大量低亲和力的PBP2a.替代高 亲和力PBPs完成细胞壁合成功能.是引起耐药的 根本原因.但meeA的表达受遗传背景和诱导剂等 冈素的影响.致使其耐药水平从表型敏感到高度耐 药不等【5J.使目前临床应用较普遍的苯唑两林纸片 扩散法等一些常用的表型检测方法受到了严重的 挑战.2005年NCCLs明确了头孢西丁纸片扩散法 是检测MRSA的首选方法.其判断折点可预测 mecA介导的葡萄球菌耐药.规定当头孢西丁纸片 抑菌环直径?19mm时.可判断苯唑西林耐药.向临 床为MRSA株.而不是报告头孢两丁耐药的金 黄色葡萄球菌.抑菌环直径?20mm时,可判断苯唑 两林敏感.本结果中.头孢两丁纸片扩散法测得 MRSA的抑菌环直径为6,19mm.抑菌环直径6mm 的占76.9%.7,17mm的占19.8%:MSSA的抑菌环 直径均较大.25—33mm占96.2%,头孢西丁的耐药 折点可正确区分MRSA和MSSA头孢两丁纸片扩 散法检测MRSA的特异性和敏感性分别为100.0% 和98.9%.与国外报道【l3】的特异性99%,100%,敏 感性100%相近.而苯唑西林纸片扩散法的特异性 和敏感性分别为95.4%和91.3%.因此头孢西丁纸 片扩散法可以提高测定MRSA的特异性和敏感性. 可替代苯唑西林用于临床实验室对MRSA的常规 检测. 头孢西丁属第2代头霉素.对B一内酰胺酶稳 定.头孢西丁抑菌区域与金黄色葡萄球菌存在 mecA基因之间的高度相关性.可能是由于头孢西 丁与PBP2a及其它各种PBPs相互作用的结果t31头 孢两丁纸片扩散法检测MRSA抑菌环直径没有中 介值,可直接判断敏感或耐药.使结果判读更容易, 更便捷:而苯唑西林纸片扩散法当抑菌环直径在 ll,12mm时判断为中介.需要加做苯唑西林琼脂 筛选试验.或检测mecA基因,PBP2a以证实是否为 MRSAt4j.本试验中.5株苯唑两林纸片扩散法检测为 中介的菌株.经PBP2a检测结果证实.3株为MR— sA.2株为MSSA.而头孢两丁纸片扩散法与PBP2a 的检测结果相符.微生物学家们为了解决苯唑两林 检测MRSA不足.常需用延长孵育时间和改变孵育 温度,以及提供特殊的表型培养基等条件来提高检 测的特异性和/或敏感性.而头孢西丁纸片扩散法 最大的好处在于不需要特殊的培养物,培养基.也 不必改变孵育时间和温度.从而降低成本和减轻工 作量,同时可以提高检测MRSA的可靠性. 本结果中.4株头孢西丁纸片扩散法为MRSA. 而苯唑两林纸片扩散法为MSSA的菌株.是否与 MRSA的异质性表达或低水平耐药有关.有待进一 步证实.MRSA异质性菌株大多数对低浓度B一内 酰胺类抗生素敏感.临床分离株大多数在常规生长 条件下常显示耐药的异质性.而低水(下转第548页) ? 548? CD4和CD8的总称为T3(CD3).冈此CD4或CD8 无论那一个发生的数量变化均会影响CD3和 CD4/CD8比值发生变化,对疾病诊断,药物治疗,预 后有重要意义【61 本研究结果显示,除了少数病例有CD8, CD4/CD8比值增多以外.绝大多数的恶性肿瘤病人 的CD3,CD4活性均较正常人明显减低.而且随着 疾病的恶化,其预后呈负相关.部分恶性肿瘤患者 的CD8相对减少或增高不明显,而CD3,CD4减少 非常明显.CD4/CD8比值减少者.其治疗效果更 差18].对6l例恶性肿瘤患者连续多次{贝4定CD3. CD4,均呈极度减低.分别为9%15%:而CD4/CD8 比值明显减低为0.6—0.9,患者经过治疗.8天内死 亡.此结果表明恶性肿瘤患者其免疫功能下降.并 且产生大量免疫抑制因子.使得T一辅助细胞和NK 细胞减少.而CD4/CD8比值下降可能是细胞毒性药 物对这些免疫活性细胞直接杀伤所致.相反.若经 治疗后CD3,CD4回升,CD8,CD4/CD8恢复正常者. 均有较长的缓解期和良好的预后效果刚.CD4, CD8,CD4/CD8比值可作为临床判断患者状态的一 个敏感指标.对临床治疗具有重要意义18] 而对良性肿瘤的T_淋巴细胞亚群.绝大多数 iangxiJ.MedLabSci.December2005.Vol23.No6 均在正常范围内.提示免疫功能基本正常. 总之.T一淋巴细胞亚群对恶性肿瘤以及其他疾 病的诊断及鉴别诊断,指导用药,疗效观察,判断预 后有重要价值,成为常规诊断的观测指标191.对恶性 肿瘤的转归也有重要意义 参考文献 【lJ朱平,刘继华,林宁品,等.有三种免疫球蛋白分泌的多发性骨髓 痛细胞的克隆起源[JJ.巾华m液学杂志,2001,Il:579. I2J于益芝,雪涛.肿瘤的共刺激分子基凶疗法研究进展[JJ.国外医 学:肿瘤学分册,1996,l:33. 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(上接第556页)平耐药(边缘耐药)菌株的特点是MIC 在敏感折点的附近.苯唑西林纸片扩散法对这二类 菌株的测定常常表现为敏感结果.有研究证明t2.3】. 头孢西丁纸片扩散法可用于检测各种表型耐药的 MRSA(敏感性100.0%).尤其检测低水平耐药的 MRSA,其敏感性亦达100,0%.而苯唑西林纸片扩散 法检测低水平耐药的MRSA敏感性只有88.5%因 此苯唑西林纸片扩散法检测MRSA有一定程度的 漏检而造成假阴性.另外3株头孢西丁纸片扩散法 为MSSA,而苯唑西林纸片扩散法为MRSA.可能是 由于产生大量的p一内酰胺酶和/或PBPs(特别是 PBP4)的过度表达而造成假阳性.这两类耐药菌仅 耐受较低浓度的甲氧西林.加大抗生素浓度或使用 p一内酰胺酶抑制剂可解除耐药,冈此头孢西丁纸 片扩散法可以减少非mecA基因介导的似MRSA 使临床医生对这些感染的治疗更有针对性.并且对 合理,慎用万古霉素.延缓耐万古霉素金黄色葡萄 球菌(VRSA)的产生具有重要意义 综上所述,头孢西丁比苯唑西林更适合于检测 MRSA,并能提高检测MRSA的特异性和敏感性,是 临床首选检测MRSA的一种可靠的表型检测方法. 并且可为临床医师选择抗感染化疗药物提供合理 的用药依据. 参考文献 I1JBrown,D.F,Detectionofmethieillin/oxaeillinresistanceinstaphylo- Cocci….JournalofAntimierobialChemotherapy.2001,48,Supp1.SI, 65,7O. 【2】I.Skov,R.Smyth,M.Clausen,eta1.Evaluationofaeefoxitin3Ogdisc onIso—Sensitestagarfordetectionofmethieillin-resistantStaphylo- COCCUSallreusIJJ.JoumalofAntimicrobialCheomtherapy.2003,52: 2O4,207. 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