RP—HPLC法测定胃痛平胶囊中原阿片碱的含量

RP—HPLC法测定胃痛平胶囊中原阿片碱的含量 RP—HPLC法测定胃痛平胶囊中原阿片碱 的含量 ? 40? 湖北中医学院学报 JournalofHubeiUniversityofChineseMedicine 2009年6月第11卷第3期 June.2009.Vo1.11,No.3 RP—I-IPLC法测定胃痛平胶囊中原阿片碱的含量 董海荣,李俊芳,李君 (承德颈复康药业集团有限公司,河北承德067000) 摘要:目的采用高效液相色谱法测定胃痛平胶囊中原阿片碱含量.方法采用InertsilODS一3C..5p.m(150ramX 4.6mm)柱,以甲醇一水一三乙胺(60:40:0.2)为流动相,流速为1mL/min,检测波长为290nm.结果原阿片碱在 0.09081~g一0.9081~g与峰面积线性关系良好,r=0.99993(n=6),平均回收率为97.33%,RSD为1.25%.结论该方法 操作简便,精密度好,结果准确可靠. 关键词:反相高效液相色谱法;胃痛平胶囊;原阿片碱;含量测定 中图分类号:R284.1文献标识码:A文章编号:1008—987X(2009)03—0O4O一02 ContentDeterminationofProtopineinWeitongpingCapsulesbyRP—-HPLC (ChengdeJingfukangPharmacyGroup,Chengde,067000,HebeiProvince,China) Abstract:ObjectiveTodetermineprotopineinWeitongpingcapsulesbyRP—HPLC.MethodsUsingIne~sflODS一3Cl85ttm(150mm× 4.6mm)column,Methanol—water—triethylamine(60:40:0.2)aftmobilephase.Theflowratewas1m L?rain一(一1),thedetectionwave. 1engthwas290nm.ResultsThecalibrationcurvewaslinearintherangeof0.0908-0.908~gforprotopine (r=0.99993).Theaveragerecovery (n=9)was97.33%,andRSDWasI.25%.ConelusionThemethodisrapid,accurateandreliable. Keywords:RP—HPLC;WeitongpingCapsules;Protopine;ContentDetermination 胃痛平胶囊是承德颈复康药业集团有限公司生产的国药准 字号产品,具有缓急止痛的功效.用于慢性胃炎,胃溃疡,十二 指肠溃疡及胃肠痉挛引起的疼痛.白屈菜?-2为本品处方中的 主药,其主要有效成分为生物碱类,白屈菜碱和原阿片碱为白 屈菜的代表性成分,其中白屈菜碱研究较少,其含量测定方法文 献报道不多,笔者也曾反复试验摸索胃痛平胶囊中白屈菜碱含 量测定方法,但结果均不理想.由于原阿片碱药理活性较广,研 究较为深入,因此,本实验以原阿片碱含量为指标采用高效液相 色谱法对其测定,结果准确,可靠,可作为本品的质量控制方法. 1仪器与试药 岛津LC一10A型高效液相色谱仪(岛津LC一10AT泵:SPD — MIOA紫外检测器;CLASS—LC5.03色谱工作站). 原阿片碱对照品购自中国药品生物制品检定所,批号: 110853—200201;甲醇为色谱纯;水为二次蒸馏水;其它试剂均为 分析纯;胃痛平胶囊为承德颈复康药业集团有限公司生产. 2方法与结果 2.1色谱条件 色谱柱:InertsilODS一3Cl85p,m(150ram×4.6mm,5O.m);流 动相:甲醇一水一三乙胺(60:40:0.2);流速:1mL/min,检测波 长:290nm;进样量;10.在上述色谱条件下原阿片碱峰的保留 时间约为13min,理论塔板数按原阿片碱峰计算不低于3000. 2.2对照品溶液的制备 取原阿片碱对照品适量,精密称定,加甲醇制成每lmL含 35p.g的溶液,即得. 2.3供试品溶液的制备 取本品,研细,混匀,取约1g,精密称定,置具塞锥形瓶内,精 密加入浓氨2mL,使充分润湿,再精密加入三氯甲烷50mL,密塞, 称定重量,振摇2min,放置过夜,超声处理(功率250W,频率 25kI-Iz)30min,放冷,称定重量,用三氯甲烷补足减失的重量,摇 匀,过滤,精密量取续滤液25mL,蒸干,残渣用乙醇转移至5mL 量瓶中并稀释至刻度,摇匀,用微孔滤膜(0.45tan)滤过,取滤 液,即得. 2.4线性关系考察 精密称取阿片碱对照品9.08rag,置100mL量瓶中,加甲醇溶 解至刻度,摇匀,作为对照品储备液.精密吸取此液lmL,2mL, 作者简介:董海荣(1968一),女,承德颈复康药业集团有限公司高级工程师 2009年6月第11卷第3期 June.2009.Vo1.11,No.3 湖北中医学院学报 JournalofHubeiUnive~ityofChineseMedicine?41? 4mL,6mL,8mL,10mL分别置10mL量瓶中,加甲醇至刻度,摇 匀.分别吸取10,L注入液相色谱仪中,测定峰面积.以原阿片 碱进样量(g)为横坐标,峰面积积分值为纵坐标进行线性回归, 得回归方程为Y=1465793.03x+2613.05,相关系数r=0.99993 (n=6).结果表明原阿片碱进样量在0.090804~一0.9080t~g与 峰面积呈良好的线性关系. 2.5空白试验 以胃痛胶囊配方去除白屈菜药材,按照胃痛平胶囊制剂工 艺制成阴性样品,再按样品溶液的制备方法制成空白溶液,在与 样品测定的相同色谱条件下测定.结果阴性样品在原阿片碱峰 相同保留时间未见色谱峰,表明阴性样品无干扰,见图1. l 0246810l214 A 05l0l52O253O35 B 一 05l0l52O253035 C 图1原阿片碱对照品(A),胃痛平胶囊(B) 和白屈菜的阴性对照(C)的HPLC图 2.6精密度试验 分别精密吸取41I~g/mL原阿片碱对照品溶液及批号为 060501的供试品溶液各lO,连续进样6次,测定峰面积,结果 原阿片碱峰面积的RSD分别为0.72%,0.65%. 2.7稳定性试验 取同一份供试品溶液分别在0h,1h,2h,4h,6h,8h,12h,24h 精密吸取101xL进样测定,记录原阿片碱峰面积,结果其RSD为 0.82%,表明供试品溶液在24h内稳定. 2.8重复性试验 取批号为060501的样品,制备供试品溶液,进样测定,计算 得原阿片碱质量,其RSD为1.1%. 2.9回收率试验 取批号为060501的样品约0.5g,精密称定9份,分别加入 5mL浓度分别为0.02912mg/mL,0.0366mg/mL,0.0437mg/mL的 阿片碱对照品溶液各3份,制备供试品溶液,进样测定,结果平均 回收率为97.33%,RSD为1.25%. 2.10测定结果 取原阿片碱对照品溶液和胃痛平胶囊供试品溶液各101~L 进样测定,采用外标法计算原阿片碱的含量,测定结果见表1. 表1胃痛平胶囊中原阿片碱的测定结果(n=3) 3讨论 3.1流动相的选择 本实验选用乙腈一三乙胺醋酸溶液(每1000mL水中加人冰 醋酸30mL,三乙胺8mL)(18:82)以及不同比例的甲醇一水一 三乙胺作流动相进行试验,经比较以甲醇一水一三乙胺(60:40: 0.2)作流动相,样品中原阿片碱可获得良好的分离效果,原阿片 碱与杂质分离符合要求.理论塔板数按原阿片碱峰计算不低 于3000. 3.2溶媒及提取时间,提取方式的选择 分别用不同体积分数的甲醇,乙醇,二氯甲烷一乙醇(1:1) 和浓氯水润湿后三氯甲烷作溶媒对样品进行提取方法的摸索. 经测定,以浓氨水润湿后三氯甲烷作为提取溶剂,处理样品最 佳.通过对加热回流提取和超声提取比较,发现用浓氨水使样 品充分润湿后加入三氯甲烷浸泡过渡后超声处理30min,已将样 品中原阿片碱提取完全. 3.3结论 本研究所用方法操作简便,重复性好,结果准确.对3批胃 痛平胶囊中原阿片碱含量的测定结果表明:其含量基本稳定,此 方法可作为该产品的含量控制方法. 参考文献: [1]中国药典第一部[S].1977,附录VID. [2]张晓峰,王环.HPLC法测定锐通注射液中白屈菜碱和原阿片碱含 量[J].青海医药杂志,2001,31(2):36—37. [3]顾孝红,唐平,靳祖英.反相高效液相色谱法测定夏天无中原阿片 碱的含量【J].时珍国医国药,2002,13(10):608—609. (收稿日期:2008—06—1O编辑:郑晓屏)