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人眼视网膜神经节细胞胚胎发育的观察

2017-12-09 11页 doc 80KB 38阅读

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人眼视网膜神经节细胞胚胎发育的观察人眼视网膜神经节细胞胚胎发育的观察 V o l. 36, N o. 1 第 36 卷 第 1 期 青 岛 大 学 医 学 院 学 报 M a rch 2000 年 3 月 2000 A C TA A CA D EM IA E M ED IC IN A E Q IN GDA O U N IV ER S ITA T IS 〃眼科学研究〃 人眼视网膜神经节细胞胚胎发育的观察 争王靖华 田 敏 王大博 李树宁 纪淑兴 () [ 摘要 ] ?目的 观察人眼视网膜神经节细胞 胚胎发育的状况, 为研究 提供形态学依据。?方法 R G...
人眼视网膜神经节细胞胚胎发育的观察
人眼视网膜神经节细胞胚胎发育的观察 V o l. 36, N o. 1 第 36 卷 第 1 期 青 岛 大 学 医 学 院 学 报 M a rch 2000 年 3 月 2000 A C TA A CA D EM IA E M ED IC IN A E Q IN GDA O U N IV ER S ITA T IS 〃眼科学研究〃 人眼视网膜神经节细胞胚胎发育的观察 争王靖华 田 敏 王大博 李树宁 纪淑兴 () [ 摘要 ] ?目的 观察人眼视网膜神经节细胞 胚胎发育的状况, 为研究 提供形态学依据。? R GC R GC 对胎龄 6, 38 周 573 眼的 R GC 进行光镜及电镜观察; 利用计算机自动图像分析系统对 20, 38 周的 R GC 进行定量 分析; 用 法定性标记凋亡细胞。?结果 电镜下胚胎 6 周 的轴突与树突已可分辨; 15 周时 层及内 ISEL R GC R GC 丛状层在视网膜周边部已形成, 后极部 层小细胞多, 周边部 层大细胞多; 胎龄 18, 22 周的 经 , R GC R GC R GC 法标记有阳性结果; 胎龄 16 周 层出现血管。?结论 来自视杯内层, 胎龄 15 周 减数, 以后极ISEL R GC R GC R GC 部小细胞多、周边部大细胞多为分布特点。 [ 关键词 ] 视网膜神经节细胞; 胎儿发育; 组织学; 人 () R 321 [ 中图分类号 ] [ 文献标识码 ] A [ 文章编号 ] 100124047 20000120001204 THE EM BRYO N IC D EVELO POM ENT O F THE HUM A N RET INAL GA NGL IO N CELL W A N G J ing h u a, T IA N M in , W A N G , , , 266003D aboe t a l D ep a r tm en t o f O p h th a lm o lo gyT h e A ff ilia ted H o sp ita l o f Q ingdao U n ive r sity M ed ica l Co llegeQ ingdao [] , A BSTRACT O bj ec t ive T o study th e em b ryo n ic deve lopm en t o f th e h um an re t ina l gang lio n ce lland to exp lo re ana tom ic . 573 6 cau se o f g laucom a to u s dam age o n R GCM e th od s T h e R GC o f eye s tak en f rom em b ryo s and fe tu s o f w eek s to fu ll te rm () () , , 20- 38 w e re stud ied by ligh t m ic ro scop e LM t ran sm issio n e lec t ro n m ic ro scop e T EM th e R GC o f w eek s w e re quan t ita t ive ly ana lized by au tom a t ic im ag ine ana ly sis sy stem and th e apop to sis o f R GC w e re labe lled by ISEL m e tho d. R esu lts A xo n and dend r ite o f R GC app ea red o n 6 th w eek. R GC laye r s and o u te r p lex ifo rm laye r w e re fo und in 15 w eek s in th e p e r ip h e r ia l re t ina. R GC s in th e po ste r io r po le o f re t ina w e re sm a ll and den se ly d ist r ibu ted, tho se in th e p e r ip h e ra l w e re b ig and sca rce. Po sit ive re 18- 22 . su lt s w e re fo und in th e R GC o f w eek s by ISEL labe ling m e tho dT h e re w e re new b loo d ve sse ls app ea r ing in R GC laye r o n th 16 . . e th w eek o f em b ryoC on c lus ion R GC o r ig ina te s f rom inne r laye r o f th e opo t ic cupA d ist ingu ish ed ce ll dec rea se o f R GC 15 . : is fo und in em b ryo o f w eek sC h a rac te r s o f R GC ’ s d ist r ibu t io n a rem o st o f th e b ig o ne s a re in th e p e r ip h e ra l re t ina and sm a ll .o ne s a re in th e po ste r io r re t ina [ KEY WO RD S ] re t ina l gang lio n ce lls; fe ta l deve lopm en t; h isto lo gy; hom in idae 随着对眼底病、青光眼研究的深入, 视网膜神经1. 2 方法 ( () 节细胞 已成为眼科界关注的焦点, 但至今几 1. 2. 1 石蜡切片 将新鲜整个眼球标本 65 例 65R GC ) 眼以质量浓度为 40gƒL 的甲醛固定, 常规石蜡包乎没有关于 发育的详细资料。本文对 的 R GC R GC 埋, 连续切片至视乳头中央, 染色, 光镜观察。其H E 胚胎 发 育 过 程 进 行 了 观 察, 旨 在 为 临 床 研 究 R GC () 中胎龄 10, 22 周胚胎 10 例 10 眼, 行视网膜神经 提供形态学依据。 现报告如下。 节细胞的凋亡标记。 1 材料和方法 ( ) 1. 2. 2 电镜切片 将新鲜眼球标本 35 例 35 眼, 自角巩膜缘处剪除前节, 在 4?下用 25ƒ戊二醛 gL 1. 1 材料来源 固定 1后取下视网膜, 置于 25ƒ戊二醛中 4?保h gL ( ) 人 胚胎眼球 100 例 100 眼 男女随机, 取自药 存。 取视乳头水平颞侧 3mm 处 1mm ×1mm 视网()物 及水囊引产所得的人胚胎, 据末次月经 、LM P 膜, 常 规 制 做 半 薄 切 片 定 位 后, 超 薄 切 片 于 2J EM 顶臀长、身长、角膜直径等综合指标计算胎龄, 胚胎 () 1200 型透射电镜 日本 公司下观察。J EOL 例数和胚胎年龄分布如下: 胎龄 5, 8 周 13 例, 9, ( 1. 2. 3 凋亡细胞的标记) 先 原位末端标记 ISEL 15 周 32 例, 16, 29 周 40 例, 30, 38 周 15 例。 另 行预处理, 然后将 TU N EL 反应液 , 按 1?10 比 l? 外, 光镜观察本科病理室胚胎眼球切片 473 例混匀后滴于组织切片覆盖组织, 36?孵育 60,m in () 例 473 眼, 胚胎数和胎龄分布如下: 胎龄 6, 10 周 结合过氧化 物 酶, 孵 育 30, 36?下, 显 色,m in DA B 46 例, 11, 24 周 257 例, 25, 38 周 170 例。 中性树脂封片, 光镜下观察。( )作者单位 青岛大学医学院附属医院眼科 青岛 266003 1. 2. 4 病理室存片的制做 眼球标本用 液 Bo u in 争作者简介 王靖华, 女, 1942 年 12 月生, 硕士, 教授, 博士生导 师 固 定, 胎龄?1 5 周的眼球常规石蜡包埋, > 1 5 周的 ( ), 连续切片至视神经中央, 标本常规火棉胶包埋义 = 9. 39, 13. 75, < 0. 05。 见 1, 2. H E tP 染色, 光镜下观察。2. 4 光镜下计数结果 1. 2. 5 40 ×40 倍光镜下胎龄 17, 20 周比 21 周, 足月各月份视网膜后 ?视网膜 R GC 层分析 ( 极部及周边部细胞数量均多, 差异有显著意义 =将胎龄 17 周, 足月胚胎视网膜全长分为 16 份, 分t ) 别取视乳头颞侧视网膜后极部及周边部各 1 份进行7. 54, 20. 07, P < 0. 05, 而 21 周, 足月各个月份 ( )1. 25, 1.87, 均>= 0. 05。 间 差异无显著意义 计数, 每个月份取 3 例 3 眼, 每个部位计数 3 P tR GC 见表 31次, 取平均值, 进行后极部和周边部 数目比较 R GC 并进行方差分析。?用 221 型 计算机V IDA SZE ISS 表 1 胎龄 17 周, 足月各个月份后极部与周边部 RGC 自动图像分析系统, 对胎龄 15 周, 足月后极部及周θ() 计数及比较 x ?s 边部视网膜的 层进行定量分析, 每个月份取R GC 胎龄 后极部 周边部 10 例 10 眼, 每个部位分析 3 次, 取平均值, 将各月 317, 20 周 62. 4? 8. 7 39. 2?11. 9 3份两个部位的细胞数量及细胞核面积分别进行配对 21, 24 周39. 8? 6. 224. 9? 5. 73 25, 28 周40. 0?11. 624. 5? 8. 7 检验。t 3 29, 32 周46. 6? 7. 524. 5? 7. 93 33, 36 周 49. 3?11. 328. 8? 8. 92 结果 3 足月 46. 3? 9. 3 21. 8? 2. 42. 1 光镜下观察结果 3 与后极部比较, t= 7. 71, 12. 72, P 均< 0. 05 胎龄 5 周视网膜分为边缘层和有 8, 9 层卵圆 表 2 胎龄 17 周, 足月各个月份后极部与周边部 RGC形细胞核的原始神经上皮层, 后极部有散在细胞向 θ() 细胞核平均大小的比较 ?x s 边缘层移动。6 周时视网膜可分为内、外神经母细胞 胎龄 后极部 周边部 层, 内层细胞核多为圆形, 外层核多为椭圆形。 7 周 317, 20 周 64. 0?15. 3 109. 0?18. 7 时内神经母细胞层玻璃体侧, 见两种细胞, 一种细胞 3 21, 24 周73. 7?11. 7121. 0?18. 53() 核大而浅染, 另一种细胞核小而深染 图 1。11 周时 25, 28 周76. 6?12. 8125. 0?13. 33 29, 32 周88. 9?16. 8141. 0?24. 0 视网膜颞侧近后极部 层明显。16 周时见 R GC R GC3 33, 36 周 94. 3?21. 1150. 0?21. 6及神经纤维层有血管出现。 20 周时周边部 层 R GC 3足月 105. 0?13. 3160. 0?18. 6 已基本形成。 28 周时视网膜各层接近成人。 3 与后极部比较, = 9. 39, 13. 75, 均< 0. 05 tP 2. 2 透射电镜观察结果 胎龄 17 周, 足月各月份后极部及周边部 表 3 RGC胎龄 6 周时 核呈椭圆形, 胞质及细胞器均 R GC θ()数量变化 ? x s 少, 有与细胞体相连的两类突起, 其中一类突起与胞 胎龄 后极部 周边部 质中均含有粗面内质网, 电子密度高; 另一类突起内 17, 20 周 600. 0?34. 7 375. 0?28. 6 ()微丝明显, 电子密度低 图 2。细胞间有膜特化的部 33 21, 24 周462. 0?32. 0276. 0?28. 5() 位 图 3, 可能为突触或其他细胞连接的早期。 7 周 33 25, 28 周446. 0?21. 0273. 0?32. 133 29, 32 周413. 0?30. 0258. 0?26. 8时细胞质及细胞器均增多, 有明显滑面内质网及高 3 3 33, 36 周 424. 0?26. 9 235. 0?28. 5 尔基体出现, 高电子密度的突起呈树枝状, 不规则, 33足月 428. 0?26. 9 278. 0?26. 2 ( ) 有 多个分支, 末端近似毛笔状 图 4, 这时的 R GC3 与 17, 20 周比较, = 7. 54, 20. 07, 均< 0. 05 tP 可见有丝分裂象。28 周时仍有细胞向内迁移。32 周 时 向内迁移现象已经消失。34 周时 胞浆R GC R GC 2. 5 凋亡现象的光镜观察及 法标记结果ISEL 中见大量平行排列的粗面内质网, 扩张的内质网池 2. 5. 1 光镜下观察结果 光镜下胎龄 10, 36 周石 () 明显 图 5。蜡切片 的染色质凝聚成块并向核周边聚集,R GC 2. 3 图像分析结果 或已皱缩成月牙形、三角形; 也可形成核碎片, 胞浆 ?胎龄 17 周, 足月时视网膜后极部与周边部浓缩, 呈嗜酸性着色, 缩小的细胞与周边细胞间形成 ( ()R GC 细胞数量差异均有显著性 t = 7. 71, 12. 72,空晕区等。 凋亡细胞呈弥漫性散在分布 图 6。 )2. 5. 2 法标记结果 凋亡细胞 片段的< 0. 05。 ?胎龄 17 周, 足月时视网膜后极部与 ISEL DN A P 周边部 平均细胞核大小比较差异均有显著意阳性信号位于细胞核内。 经实验流程后, 光镜R GC ISEL 争华3 1 期 王靖 , 田 敏, 王大博, 等 1 人眼视网膜神经节细胞胚胎发育的观察 图 1 胚胎 7 周视网膜内神经母细胞层的内侧, 见两种细胞核, 一种大而浅染、一种小而深染 ×400 图 2 胚胎 6 周 R GC 有与胞体相 连的两类突起, 一种有粗面内质网、游离核糖体, 电子密度高; 另一种无粗面内质网, 见微丝, 电子密度低 ×8 000 图 3 胚胎 6 周 R GC 细胞 间有膜特化部位 ×20 000 图 4 胚胎 7 周见 的一类突起末端呈毛笔状 ×20 000 图 5 胚胎 34 周 胞浆内见大量粗面内质网, 扩 R GC R GC 大的内质网池明显×10 000 图 6 胚胎 20 周 层中有具凋亡特征的细胞, 染色质聚集成块, 细胞浆浓缩, 呈嗜酸性染色 ×400R GC , 颜色自细胞质的两类突起。断裂点越多下观察, 阳性信号呈棕黄色, DN A 越深, 可呈深棕色和棕褐色。树突及细胞质中含有粗面内质网、游离核糖体、 高尔基体, 轴突中仅有大量线粒体、神经微丝、微管、 3 讨论 1 多聚核糖体等。本文结果显示, 细胞体的两类突起 人胎龄 5 周时, 胚胎后极部原始神经上皮层内的超微结构分别符合树突和轴突。 由此可见, R GC侧有向边缘层迁移的细胞。 6 周时这些迁移进来的 来源于视杯内层原始神经上皮层, 在其向内侧迁移 细胞组成了内神经母细胞层。 电镜下见其玻璃体侧 的同时逐步分化、成熟。胎龄 6 周时 的树突和R GC 的细胞核呈卵圆形, 核大, 胞质少, 有明显核仁, 有发 轴 突 已 可 在 电 镜 下 分 辨 清 楚。我 们 认 为 由 于R GC 向内迁移, 的 树 突 与 留 在 原 层 次 中 的 各月份后极部 细胞数多于周边部, 差异具显R GC M u lle r R GC 细 胞、无 长 突 细 胞 的 分 化、发 育 同 时 进 行, 从 而 将著性, 而且后极部平均细胞核面积小于周边部, 差异 胞体与其他两种细胞体之间的距离拉大。 胎具显著性。因此, 我们认为 染色下的深染的细胞R GC H E 龄 17 周时, 层在视网膜周边部已形成, R GC 核对 应 于 小 型 R GC , 浅 染 的 细 胞 核 则 对 应 于 大 型 这两种细胞的生理功能和病理意义有待进一 , 我们对 层细胞数量及分布情况的计数及统计 R GC R GC 分析显示, 视网膜发育过程中, 胎龄 17 周时, 后极部 步探讨。 及 周 边 部 层 的 细 胞 数 量 比 其 后 任 何 月 份 都 R GC 参考文献 多, 差异均有显著性。这表明胎龄 17 周左右 有R GC 1 张培林主编 1 神经解剖学[. 北京: 人民卫生出版社, 1997164 M 一个明显的减数过程。. P ro v is JM P a t te rn s o f ce ll dea th in th e gang lio n ce ll laye r o f th e 2 光镜下 染色切片观察到人胚胎 10, 36 周 H E [. , 1987, 259: 237h um an fe ta l re t ina J J C om p N eu rol 时, 中有少数细胞具有凋亡的形态特征, 并散R GC . 3 D ando na LSe lec t ive effec t o f exp e r im en ta l g laucom a o n axo na l 在于近神经纤维层处, 以胎龄 18, 22 周时数量较t ran spo r t by re t ina l gang lio n ce lls to th e do r sa l la te ra l gen icu la te [. , 1991, 32: 1593多。本文用 法主要检测了胎龄 18, 22 周的视 nuc leu s J I nv est Op h th a lm ol V is S ci ISEL G lo v in sk y Y. R e t ina l gang lio n ce ll lo ss in size dep enden t in 4 网膜, 见有典型的符合细胞凋亡特征的阳性细胞。因 exp e r im en ta l g laucom a [J . I nv est Op h th a lm ol V is S ci, 1991, 32: 此, 我 们 认 为 的 凋 亡 现 象 可 能 是 介 导 胚 胎R GC 484 2 150左右 数量减少的原因之一。d R GC . : [. Ko lb HN eu ro n s o f th e h um an re t inaa go lg i study J J C om p 5 3 , 6 大体分为大细胞及小细胞两种类型,R GC , 192, 318: 147N eu rol 胎龄 7 周时 层有 深染及浅染两种细胞核,石珍荣, 周惠民, 王济中, 等 1 人眼视网膜的胚胎发育 [] 1 青岛 R GC H E J 6 ( ) 医学院学报, 1987, 23 3: 7 深染核较小, 浅染核较大, 并见后极部深染核多, 周 边部浅染核多。计算机图像分析及统计学处理显示, ( )1999207212 收稿 2000201215 修回 新斯的明抢救河鱼中毒呼吸停止 1 例 于春秋孙兰芬 病人, 男, 25 岁。 因误食煮熟的河 鱼头、肝脏约 500g, 2h 后感 - 1 体麻木明显减轻, 心率 64, 律规整, 心音有力, 但咽部分泌物较 m in 四肢麻木难忍, 周身无力, 咽部有阻塞感, 舌根发硬, 语言含糊不清, 多, 给予肌注 65422 10. 12后, 因病人呼吸表浅再次给予新斯的 m gh 腹痛、恶心、呕吐胃内容物。 无明显胸闷、呼吸困难等。 既往身体健 明 1肌注, 加强疗效。近 23后病人完全恢复自主呼吸, 面及口唇 m g h - 1 - 1康。 查体: 3616?, 64, 20, 20101 精神不 ƒT P m in R m in B P k P a红润, 四肢活动自如, 解除辅助呼吸器。次日又加用新斯的明 1, 以 m g振, 神志清晰, 恐惧表情, 查体合作, 双瞳孔等大正常, 语言欠清, 颈无 - 1 巩固疗效。 观察 4, 病情无变化, 肝肾功能无异常, 痊愈出院。d 抵抗感, 双肺呼吸音清, 心率 64, 律规整, 心音有力, 各瓣膜区 m in 无杂音, 腹无压痛, 肝脾不大, 肠鸣音活跃, 上下肢肌力K 级, 肌张力 讨论 河 鱼主要含 毒, 分子式 C H N O 1 毒性稳定, 经 111738减弱, 膝腱反射减弱, 病理反射未引出。 实验室检查无异常发现。 诊 炒煮、盐腌、日晒等都不能使其破坏, 有似箭毒样毒作用, 主要使神经 断为河 鱼中毒。 入院后, 立即给予吸氧、输液, 内加维生素、糖皮质 中枢和神经末梢发生麻痹, 先是感觉, 后是运动。 毒对胃肠道黏膜 激素、肌苷、抗生素以护肝保肾、预防感染, 病情进行性加重。 入院 有刺激作用, 吸收后主要阻断运动神经肌肉接头的传导和阻滞神经 20后, 病人出现咽部阻塞感加重, 呼吸极度困难, 立即给予静推 m in 轴索除极过程的离子转运。 通常采用番木鳖碱解毒。 而新斯的明能 尼可刹米、洛贝林、安纳加等抢救无效, 病人自主呼吸停止, 瞳孔放 直接作用于运动终板 N 受体及促进运动神经末梢释放乙酰胆碱,2 - 1 大, 面色灰暗, 口唇发绀, 呼吸音消失, 心率 46, 心音低钝, m in B P对骨骼肌有较明显的选择性兴奋作用, 能对抗筒箭毒碱、三腆季胺酚 1710, 肌力 0 级, 但神志清晰, 在胸外心脏按压、人工呼吸的同 ƒk P a( ) 等竞争型 非除极型肌松药的过量中毒。 在救治河 鱼中毒缺乏番 时肌注新斯的明 1. 0. 5后给予气管插管, 改人工呼吸器辅助呼 m gh 木鳖碱的情况下, 根据药理作用, 作者大胆采用新斯的明抢救此病 吸。 2后, 又肌注新斯的明 1. 约 4后病人症状渐有好转, 心率h m gh 人, 取得理想效果。 - 156, 心音较前有力, 肌力l 级。6后再次肌注新斯的明 1, 病 m in h m g [ 关键词 ] 河 毒素; 呼吸; 新斯的明人渐出现不规则表浅的自主呼吸, 肌力恢复到? 级, 肌张力增强, 肢 18595B R [ 中图分类号 ] [ 文献标识码 ] ( ) [ 文章编号 ] 100124047 20000120004201 ( )1999204208 收稿 2000201212 修回 ( )作者单位 文登整骨医院内科 山东省文登市 264400 作者简介 于春秋, 女, 1955 年 4 月生, 副主任医师
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