血糖影响因素及血糖测定

血糖影响因素及血糖测定 血糖影响因素及血糖的测定 浙江中医药大学生命科学学院 生化教研室 【实验目的】 学习体内哪些激素对血糖浓度有影响。 学习和掌握葡萄糖氧化酶法测血糖的原理 和操作方法 。 【实验原理】 人和动物血糖浓度受神经、激素的调节，维持相 对稳定。胰岛素和肾上腺素是调节血糖浓度的两 种重要激素，前者使血糖浓度降低，后者使血糖 浓度升高。 葡萄糖可由葡萄糖氧化酶氧化成葡萄糖酸，并产 生过氧化氢，后者在过氧化物酶的作用下，能与 苯酚及,,氨基安替比林作用产生红色醌化合 物。醌的产量与葡萄糖量成正比。与葡萄糖 溶液比较，可计算得到血浆葡萄糖浓度。 【实验试剂与器材】 速效胰岛素、盐酸肾上腺素、抗凝剂 (草酸钠或草酸钾、肝素钠、柠檬酸三 钠) 禁食四小时以上兔子两只 葡萄糖试剂盒(,,、,,、标准液) 酶标板、板条、微量进样器、注射器、 烧杯 酶标仪、生化培养箱 【实验步骤】一(注射激素前后血浆样品制备 (1)动物准备: 正常家兔两只实验前禁食4小时以上称体重.记录并标 号。 ?取血: 在耳缘静脉处进行，用酒精棉擦拭兔耳，使血管扩 张，用棉花擦干，用针筒采血或于取血处涂薄层凡士 林， ml约需2mg草酸钠)内然后用刀片割破耳缘静脉，将血液收集于草酸钠 抗凝管(每 边接边摇以防凝 固，取约5ml，用普通离心机2000rpm离心10分钟，取 上清分装备用，编号为兔血清?、?;?注射激素后再取血: 将一家兔皮下注射胰岛素1单位/kg体重另一只家兔 皮下注射肾上腺素0.4mg/kg体重.分别记录在注射时间.注 射肾上腺素20分钟胰岛素30分钟后按上述方法或颈静脉 取血各取5ml于抗凝管内用普通 分 钟，取上清分装备用，编号为兔血清?、?二. 血浆样品离心机2000rpm离心10 萄葡糖测定 ?工作试剂配置: 取一支试管，加入R1 4.5ml与R2 0.5ml混合。 ?取酶标板一块，板条一条，加入板框中，设定空白管 A1，标准管A2.A3，测定管A4.A5，A6.A7，A8.A9， A10.A11(做两管取平均值，可减少实验误差) 混匀，37?保温15min，以空白管调零， 505nm波长处测定各管吸光度值。 计算 血糖含量A样/A标×标准溶液浓度 加入物 A1 A2 A3 A4 A5 A6 A7 A8 A9 A10 A11 (ul)葡萄糖标准 3 3 液 蒸馏水 3兔血浆? 3 3 ? 3 3 ? 3 3 ? 3 3工作试剂 300 300 300 300 300 300 300 300 300 300 300 混匀置于37?孵育箱，反应10min后，在酶 标仪上进行比色测定，测定波长为492nm， 用空白管A1调零，读取标准管及测定管吸 光度。 【结果与计算】 血浆葡萄糖浓度 测定管吸光度平均值 ×标准管葡萄糖浓 度5.55mmol/L 标准管吸光度平均值 【讨论】一( 血糖的来源: 1(碳水化合物的消化和单糖的吸收:机体进食后，食物 淀粉在唾液淀粉酶、胰酶、小肠黏膜分泌的二糖酶作 用下水解成单糖。经过载体主动转运入十二指肠和空 肠壁内，并扩散入血。 2(糖原的分解:在饥饿时，肝储存的糖原在葡萄糖-6-磷 酸酶作用下，分解成葡萄糖入血，是空腹血糖的直接 来源也是维持血糖浓度恒定的重要机制。 3(糖异生:空腹时，体内的非糖物质如氨基酸、乳酸和 甘油可经肝脏的糖异生作用生成葡萄糖，参与血糖的 恒定。二、血糖的去路:1(有氧氧化2(合成糖原3(转换成甘油三酯、蛋白质或氨基酸等非糖物质。4(当血糖浓度高于肾糖阈时，从尿排出。三、血糖的调节:1(降血糖的激素主要是胰岛素，另有胰岛素样生长因子2(升血糖激素有胰高血糖素、肾上腺素、生长激素和皮质 醇。四、测定的临床意义: 1(生理性高血糖:摄入高糖食物后，或情绪紧张肾上腺分泌 增加时 2(病理性高血糖: (1)糖尿病 (2)内分泌腺功能障碍 (3)颅内压增高 (4)脱水引起高血糖 3(生理性低血糖:见于饥饿和剧烈运动 4(病理性低血糖:(1)胰岛B细胞增生和胰岛B细 胞瘤等， 胰岛素分泌过多。 (2)对抗胰岛素的激素分泌不足。 (3)严重肝病患 者，储存糖原功能及糖异生等功能低 下。