皮肤创伤在胚胎内外愈合过程中基因差异表达

皮肤创伤在胚胎内外愈合过程中基因差异达 皮肤创伤在胚胎内外愈合过程中基因差异 表达 l252 程激活了凝血纤溶系统,提示血栓前状态的存在,而术前使用 阿司匹林预处理的A组,术后升高的幅度明显小于术前不用 阿司匹林的B组,表明阿司匹林可以抑制血小板的激活,明显 减轻凝血和纤溶系统的激活,有预防血栓形成的作用.此外, 本研究还显示术前及术后1个月,两组患者血液D.二聚体水 平差异均无统计学意义(P>O.05),故BFCA术后血栓前状态 的持续时间以及服用阿司匹林的最佳天数,尚有待进一步研 究. 本研究也显示D.二聚体的变化与手术持续时间呈正相 关,与放电时间,累积放电能量,平均温度无关,与其他学者的 研究结果一致.6J.其原因可能是操作时间延长,心内膜的损 伤(特别是对于反复多部位消融的患者)容易激活凝血系统, 促进心内膜微血栓的形成.另外,导管和血管鞘在血液系统 停留较对照组时间延长,也会激活凝血系统,促进血栓形成, 所以尽量缩短手术时间是预防血栓形成的关键. 参考文献 [1]ZhouL.KeaneD,ReedG,etai.Thromhoemholiccomplication0f ?临床研究 GuangxiMedicalJournaZ.Sep.2009.Vo1.31.No.9 cardiacradifa'equencycatheterablationareview0fthereportedinci. dance,pathogenesisandcurrentresearchdirection[J].JCsrdiovas~ EI.~enuphysiol,1999.10(4):611—620. [2】中国生物医学工程学会,心脏起搏与心电生理学会导管消融学 组,<中国心脏起搏与心电生理杂志)编辑部.射频导管消融治 疗快速性心律失常指南(修订版)【J].中国心脏起搏与心电生 理杂志,2002,16(2):81—95. [3]GoliVD,PrasadR,HamiltonK,eta1.TransesophagealcI10caldio- graphicevaluationformuralthn~usfollowingradiofrequencycath? eterablationofaccessorypathways[J].PACE,1991,14(11pt2): 1992—1997. [4]王振义.血栓前状态[J].中华血液学杂志,1991,12(9): 477—478. [5]刘蔼如.交联纤维蛋白及其降解产物[J].中华血液学杂志, 1993,14(10):545—546. [6]MichaelR,EpsteinMD,LauraD.eta1.Emboliccomplicationsassoci- atedwithr曩di0qI|encycatheterablation[J】.AmJCardial.1996, 77(8):655—658. (收稿日期:2O09—06—15修回日期:2009—07—17) 皮肤刨伤在胚胎内外愈合过程中基因差异表达? 段红梅吴志远江黎明 (1广东省佛山市顺德区北窖医院,佛山市528311;2广东医学院附属医院整形外科研究所,湛江市524001) 【摘要1目的探讨不同皮肤在胚胎内外愈合过程中基因表达变化的特征及其生物学意义.方法建立动物模型,收集胎 兔及成兔皮肤创伤后愈合组织.用基因芯片技术检测胎兔及成兔皮肤创伤后愈合组织的基因表达变化规律.结果基因芯片高 通量地揭示了胎兔皮肤刨伤后愈合组织的基因表达变化信息,差异表达基因有1l3个,其中下调28个,上调85个,涉及十大类 基因.结论胎兔及成兔皮肤创伤后愈合组织的基因图谱存在差别,这些基因的异常表达可能参与胎儿皮肤疲痕愈合及成人皮 肤瘢痕愈合的形成过程. 【关键词】兔;胚胎皮肤;基因芯片;基因表达 【中图分类号】R322.99【文献标识码】A【文章编号】02534304(2009)09-1252-02 人们对皮肤的认识已深入到分子领域,成人皮肤受到创 伤后,愈合过程伴有瘢痕形成,而胎儿皮肤伤口则无瘢痕愈 合….虽有大量的基础和临床实验研究,胎儿无瘢痕愈合分 子机制始终是未解之谜】.随着胎儿无瘢痕愈合分子机制的 深入研究,寻找胎儿与成人皮肤内在特性研究瘢痕产生的根 源及相关调控基因显得十分必要.本研究通过建立动物模 型,采用基因芯片技术研究胎兔及成兔皮肤基因表达变化的 特征,探寻皮肤内在特性,研究瘢痕产生的根源及相关调控基 因,实现在皮肤创伤修复和组织再生及瘢痕形成的基因水平 调控中寻找到直接干预手段. 1材料与方法 1.1标本来源及收集建立动物模型,取孕22d的成兔3 只,在麻醉下暴露孕兔背部,顺行背部长轴做一切口,长约 4.0cm,切透皮肤全层,用5-0丝线原位对合缝合;然后将孕兔 行剖腹术.按同样方法,取1只胎兔行手术,做同样长度的切 口.继续饲养8d,取原孕30d的成兔,切取胎兔及孕兔原手 术处皮肤愈合后相同面积皮肤及瘢痕组织.共获3组标本. 本次实验均采用背部相同部位皮肤标本,采用两两比较和聚 类方法.' 1.2总RNA抽提和测定按Chomczynski等提出的一步 ?基金项目:广东省社会发展领域科技项目(2004:19.);广东省医学科研基金 (B2O蝴);广东省湛江市科技攻关项g(2o0512) 广番医学2009年9月第3l卷第9期 法,分别抽提胎兔及成兔愈合后皮肤及瘢痕组织的总RNA,用 Lied沉淀法纯化后紫外分析及电泳检测显示获得了高质量的 纯净总RNA. 1.3mRNA分离纯化按照OlisotexmRNAspirI_o0I哪pr咖o0l 分离纯化?A,紫外分析其质量. 1.4芯片制备美国SuperArray公司提供含14784基因芯片. 用通用引物进行PER扩增,PCR引物长度为I一3000bp,靶基 因以0.5/在硅烷化玻片上点样,点样后玻片晾干备用. 1.5表达谱探针刺备参照Schena【.方法标记cDNA探针 并纯化.用Cy3-dTUP标记胎兔愈合后皮肤组织cDNA, cy5-dTUP~记成兔愈合后皮肤瘢痕组织. 1.6杂交与扫描及结果的分析将基因芯片与制备探针杂 交后,扫描Cy3.Cy5两种荧光信号的强度和比值.用专用软件 分析,差异表达的标准为基因表达变化在2倍以上为阳性. 2结果 2.1总RNA抽提结果各标本提取的总RNAA250/A280值 达1.817,I.928,电泳结果证实所抽提的总RNA的纯度符合 实验要求. 2.2生物信息学分析以Ratio<5.0和Ratio>2.0作为基 因下调和上调的比较标准(95%的可信区间内),比较了胎兔 及成兔愈合后皮肤及瘢痕组织基因差异表达.3组间均出现 的差异表达基因有113个,其中下调28个,上调85个. 按专用处理软件的生物信息学分析涉及l0大类基因:原 癌和癌基因(13个),细胞骨架和运动相关(16个),细胞信号 和传递蛋白相关(23个),代谢相关(13个),蛋白合成翻译 (6个),离子通道和运输(1个),细胞周期蛋白(5个),DNA 结合转录(6个),细胞凋亡(1个),其他(29个).通过对数据 结果的聚类分析.胎兔皮肤参与蛋白翻译,能量合成和DNA 复制的基因表达较活跃,如DNA聚合酶,苹果酸酶,烯醇酶, 髓过氧化物酶,A11P酶和许多与细胞外基质特定转录蛋白有 关的各种转录因子,转化酶合成酶等相关基因呈高表达;成兔 皮肤组织凋亡相关基因,蛋白合成翻译及原癌基因和抑癌基 因表达异常. 3讨论 增生性瘢痕的形成是由于皮肤创伤后的愈合过程中,成 1253 纤维细胞过度增殖和胶原纤维过度增生的结果.成人皮肤 受到创伤后,愈合过程中伴有瘢痕形成,而胎儿皮肤伤口愈合 后不遗留瘢痕组织.创伤皮肤愈合的过程包括损伤及炎症反 应,细胞外基质堆积,胶原过度沉积及瘢痕的改建3个基因过 程.许多因素如各种炎性细胞(尤其是成纤维细胞),细胞因 子,细胞生长因子,蛋白酶,多糖等均参与了瘢痕的形成.而 且,其相互间的关系,作用机制仍没有清晰的了解.因此,许 多年以来,瘢痕的治疗是仍未攻克的难题.虽然经过长期,大 量的研究,目前积累的资料仍然零碎而不系统.本实验通过 建立动物模型,筛选出的差异表达基因全面反映了皮肤伤愈 合的过程中炎性细胞(尤其是成纤维细胞)的分裂增殖,细胞 信号转导,细胞凋亡,细胞骨架支,受体,蛋白翻译合成,代谢 等各方面的变化.我们可以看到,随着芯片扫描例数的增加, 最终集中到数量不多的基因上.这些基因或许就是重要或关 键的相关基因,对它们在分子与蛋白水平的重新研究,将会得 到新的结论;为进一步寻找相关特异调控基因,实现基因水 平调控皮肤创伤修复和组织再生及瘢痕形成中寻找到直接的 预防和干预手段,进而为研究皮肤无瘢痕愈合的机制打下基 础. 参考文献 【1]BurringtonJD.Woundhealinginfetallamb[J].JPediatrStag. 1971.6(6):523—528. [2】程飕.付小兵,盛志勇,等.胎儿,成人正常皮肤EGFR与FG- FR-2表达的研究[J].中华整形外科杂志,2003.19(2):91-94. [3】ChomcznyskiP,SaechiN.Single-stepmethodofRNAisolationby aciddiniumthioeyanate?phunol-.ehlor~onn咖6?【J].Anal Bioehem.1987.162(1):l56—159. [4]SchenaM,ShalonD,BelierR.etlI.Parallelhumangenomeanaly. sis:microarray?basedexpressionmonitoring0fl000genes[J】.PIDc NanAcMScoUSA,1996,93(20):10614一10619. [5]吴志远,罗少军,江黎明.隐丹参酮对兔耳增生性瘢痕组织的影 响[J].广西医学,2008,30(7):l012一l013. [6]王珍祥,吴军,李世荣.增生性瘢痕与正常皮肤差异基因的筛 选[J].中华医学美学美容杂志.2004,lO(3):155—157. (收稿日期:2009—06—17修回日期:2009—07—14) ?关于文稿中图表的要求 文稿中表一律采用三线表格(有合计或统计学数据时在其上方加一横线),表内数据保留的小数位数要相同.线条图请用白 纸墨绘或电脑绘制,高宽比例约为5:7左右.照片图要清晰,对比度好.图中需要标注的符号(包括箭头)请另用纸标注,背面注 明图号及位置.若刊用人像,应征得本人的同意,或遮盖其能被辨认出系何人的部分.大体标本照片在图内需有标尺标记.病 理照片要求注明染色方法和放大倍数.图表中如有引自他刊者,应注明出处.