山楂精降脂胶囊的质量标准研究

山楂精降脂胶囊的质量标准研究 DOC格式论文,方便您的复制修改删减 山楂精降脂胶囊的质量标准研究 (作者:___________单位: ___________邮编: ___________) 作者,朱才庆 李艳 吴迪 何南生 曾宪仪 余华 【摘要】 目的以山楂对照药材和熊果酸作为对照品,分别建立薄层色谱,TLC,鉴别和高效液相色谱,HPLC,法控制山楂精降脂胶囊的质量。方法TLC鉴别用甲苯-醋酸乙酯-甲酸,20:4:0.5,为展开剂,HPLC法采用Alltima C18色谱柱,5 μm,4.6 mm×250 mn,,用乙腈-甲醇-水-乙酸铵(70:16:14 :0.5)为流动相,检测波长220 nm,柱温25?,流速1.0 ml/min。结果TLC鉴别图谱斑点清晰,阴性无干扰,熊果酸含量1.796 8,17.968 0 μg范围内呈良好线性关系,得回归方程Y,44 820X+5 725.5,r=0.999 9,平均加样回收率及RSD分别为101.17%和1.02%。结论以熊果酸为对照品,采用TLC法和HPLC法控制山楂精降脂胶囊质量的方法简便快速、准确可靠、重复性好,专属性强。 【关键词】 山楂精降脂胶囊 薄层鉴别 高效液相色谱 熊果酸 山楂精降脂胶囊是由山楂提取物制成的中药单方制剂,是由山楂精降脂片经剂型改变而来,功能与主治为降血脂,可用于治疗高血脂症, DOC格式论文,方便您的复制修改删减 亦可作为冠心病和高血压病的辅助治疗,1,。文献报道山楂主要含黄酮类有机酸和三萜类等有效成分,其中金丝桃苷、熊果酸是山楂中黄酮和三萜类物质的主要成分,2,3,。研究表明黄酮类成分具有降压、增加冠脉血流量、降血脂、强心和抗心律失常的药理作用,而三萜类成分有降低高脂模型小鼠血脂的作用,4,7,。原标准只有理化鉴别和UV法测定总黄酮的含量,专属性不强。为了提高产品的质量可控性,以山楂对照药材及熊果酸对照品为对照,探讨TLC鉴别和HPLC法测定熊果酸含量的质量控制法。 1 器材 1.1 仪器 高效液相色谱仪(大连依利特分析仪器有限公司),P200 II型高压恒流泵,UV200 II 紫外可变波长检测仪,Rheodyne 7725i 高压六通进样阀,20 μl定量环,HW色谱工作站,南京千谱软件有限公司,,百万分之一电子天平,瑞士Mettler公司M3型,。 1.2 试药 山楂精降脂胶囊,由本实验室自制,,山楂对照药材(中国药品生物制品检定所,批号,121138-200403),熊果酸对照品,供含量测定用,中国药品生物制品检定所,批号:110742-200415,,乙腈、甲醇为色谱纯,中国医药集体上海化学试剂公司,,水为自制的重蒸水,其余试剂均为分析纯。 2 方法与结果 2.1 山楂的薄层鉴别取山楂精降脂胶囊4粒,倾出内容物,加甲醇25 ml,超声30min,滤过,滤液浓缩至2 ml,作为供试品溶液,另取山楂对照药材1 g,加70,乙醇25 ml,回流30 min,滤过,滤液 DOC格式论文,方便您的复制修改删减 蒸干,残渣加水5 ml溶解并加盐酸5 ml,6 mol/L,,水浴水解30 min,抽滤,滤液弃去,滤渣加水洗至洗涤液呈中性,滤渣连同滤纸80?干燥后,加甲醇25 ml,超声提取30 min,滤过,滤液浓缩至1 ml,作为对照药材溶液。取熊果酸对照品,加甲醇制成每1毫升含1 mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法,8,试验,吸取供试品溶液5 μl、对照药材溶液5,10 μl、对照品溶液4 μl,分别点于同一含0.2%羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上,以甲苯-醋酸乙酯-甲酸,20?4?0.5,为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10,硫酸乙醇试液,105?加热数分钟。供试品色谱中,在与对照药材、对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。见图1。 1,2,3.供试品 4.山楂对照药材 5.熊果酸对照品 6.阴性对照 图1 山楂精降脂胶囊薄层鉴别 2.2 熊果酸的含量测定 2.2.1 色谱条件 色谱柱为Alltima 5U C18,5 μm,4.6 mm×250 mn,,流动相为乙腈-甲醇-水-乙酸铵(70:16:14 :0.5),使用前用孔径为0.45 μm的有机滤膜减压过滤,超声20 min,检测波长220 nm,柱温25 ?,流速1 ml/min,进样量20 μl。 2.2.2 可行性试验 精密称取熊果酸对照品适量,置棕色量瓶中,加甲醇制成每毫升含熊果酸约400 μg的溶液,即得,作为对照品溶液。取本品20粒,倾出内容物,混合均匀,精密称取适量,约0.5 g,置50 ml具塞锥形瓶中,精密加入甲醇25 ml,称定重量,超声处理40 min,取出,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤 DOC格式论文,方便您的复制修改删减 过,取续滤液,即得,作为供试品溶液。分别取熊果酸对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液注入液相色谱仪,记录色谱图,结果见图2,4,从图2,4中可知熊果酸保留时间为15.8 min左右,阴性对照在相应的位置处无干扰峰,说明本品在上述色谱条件下熊果酸与其它组分分离较好。理论板数以熊果酸计算不低于3 000。 2.2.3 线性关系考察 精密称取熊果酸对照品22.460 mg,置25 ml容量瓶中,加甲醇溶解并定容至刻度,摇匀,即得0.8984 mg/ml的对照品溶液。分别精密量取上述对照品溶液1,2,4,6,8 ml至10 ml容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得不同浓度的对照品溶液。分别吸取上述各对照品溶液及母液各20μl注入色谱仪,测定其峰面积,以熊果酸对照品进样量为横坐标,以峰面积积分值为纵坐标,绘制标准曲线。结果表明在1.796 8,17.968 0 μg范围内进样量与峰面积积分值呈良好的线性关系,回归方程为Y=44 820X+5 725.5,r=0.999 9,n=5,。 2.2.4 样品超声时间考察 取装量差异下的内容物约0.5 g,精密称定,称取4份,分别置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇25 ml,密塞,称定重量,分别超声20,30,40,50 min,250W,,26.5?1,kHz,,放冷,再称重,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。依上方法测定,结果表明超声20,30,40,50 min的熊果酸含量分别为18.998 6,19.304 7,19.992 8,19.454 4 mg/g,可知样品超声提取40 min即可。 2.2.5 精密度实验精密吸取对照品溶液20 μl,重复进样6次,求 DOC格式论文,方便您的复制修改删减 得熊果酸峰面积积分值的相对标准偏差RSD为1.0%。 2.2.6 稳定性实验 精密吸取20 μl供试品溶液,以第1次进针为0 h,分别在0,1,2,4,8,12 h进针,测定其中熊果酸峰面积积分值,结果表明样品在12 h内稳定,RSD为1.8,。 2.2.7 重复性实验 按样品测定项下方法,取同一批号山楂精降脂胶囊样品6份, 精密称定,按供试品制备方法制备供试品溶液,照上述测试方法实验,6个实验样本平均含量为16.797 5 mg/g,RSD为2.3,,结果表明本法的重复性很好。 2.2.8 加样回收率实验取本品已知含量,同一批号,批号,20040701,样品共6份,每份约0.25 g,精密称定,精密加入一定量熊果酸溶液,照上述供试品制备方法制备供试品溶液,按含量测定方法测定熊果酸含量,见表1,。结果表明本法回收率较高,方法可行。表1 山楂精降脂胶囊的熊果酸含量测定加样回收实验结果 回收率,%,=实测量-样品中的量对照品加入量×100% 2.2.9 样品测定 按上述方法制备供试品溶液和对照品溶液,分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20 μl,依上述色谱条件测定,计算1粒,0.15 g/粒,毛冬青胶囊中原儿茶醛含量,先后测定了10批样品,每批测2次,结果见表2。依据测定的结果暂定本品每粒含山楂以熊果酸,C30H48O3,计不得少于2.3 mg。 表2 山楂精降脂胶囊样品的熊果酸含量测定结果 3 讨论 山楂精降脂胶囊是由山楂药材提取物组成的单方制剂。山楂中含有 DOC格式论文,方便您的复制修改删减 山楂酸、酒石酸、胡萝卜素、维生素B1、维生素B2、维生素C、黄酮类、内酯、糖类及苷类、有机酸、鞣质、蛋白质、脂肪、钙、磷、铁等。迄今为止,国内外学者从山楂中已分离得到槲皮素、金丝桃苷、芦丁等。原片剂标准中有两个理化鉴别和1个含量测定指标,以槲皮素为对照品,运用UV法进行总黄酮的含量测定,,理化鉴别由于专属性不强而被删去,而总黄酮含量在山楂提取物原料中已控制,制剂中再控制同一指标意义不大,且供试品处理方法繁琐,故在新制剂中未采用该法。山楂中有机酸类含有熊果酸,它有抗肿瘤、抗菌、抗病毒、保肝、降血脂等作用,选择其作为控制质量标准的指标之一,具有一定的实际意义。因此,本研究中选用熊果酸对照品和山楂对照药材为对照,新建立了制剂薄层鉴别,彩照斑点清晰,阴性无干扰,与理化鉴别相比,专属性大大增加,提高了制剂质量的可控性。结合本制剂的实际情况,通过对流动相不断摸索,采用高效液相色谱法测定制剂中熊果酸的含量,取得成功,方法简便可行,准确可靠,使制剂的质量更加可控。 【参考文献】 ,1, 中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准?中药成方制剂,第9册,S,. ,2, 石岩鹏, 丁杏苞. 山楂化学成分的研究,J,. 中草药, 2000, 31 (3) :173. DOC格式论文,方便您的复制修改删减 ,3, 孙敬勇, 杨书斌, 谢鸿霞, 等.山楂化学成分研究,J,. 中草药, 2002, 33(6):483. ,4, 罗玉梅, 王贺振. 山楂的化学成分及药理研究进展,J,. 时珍国医国药, 2004, 15(1):53. ,5, 王月刚, 陈素云. 山楂对心血管系统的药理作用研究,J,. 中医药信息, 2000, 6:29. ,6, 李贵海, 孙敬勇, 张希林,等.山楂降血脂有效成分的实验研究. 中草药, 2002, 33(1):50. ,7, 薛庆玲, 牛绍忠, 田中云. 山楂及其叶对心血管系统的作用研究进展,J,. 山东医药工业, 2000,9(3):21. ,8, 国家药典委员会.中国药典,?部,S,.北京:化学工业出版社,2005:附录?B.