阿司匹林含量测定

阿司匹林含量测定 摘要:阿司匹林是一种常见的非甾体解热镇痛药，现在也用于心血管疾病的治疗，由于其历史悠久，所以至今已经有许多对于阿司匹林含量的测定，例如酸碱滴定法，紫外分光光度法，高效液相色谱法等。2010版中中国药典中主要记载的方法主要有直接滴定法和高效液相色谱法。 关键词:阿司匹林，含量，体内，体外 正文: 一. 阿司匹林原料药的含量测定: 1. 体外: 1.1 直接滴定法: 取阿司匹林原料药约0.4g，精密称定，加入中性乙醇(对酚酞指示液显中性) 酚酞指示剂，用氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)20ml振摇，完全溶解后，加3滴 直接滴定。氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)的滴定度T为18.02mg/ml，即每1ml的氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)相当于18.02mg的C9H8O4。滴定至溶液从无色变成淡粉红色即为滴定终点。记录滴定液的消耗量V。 含量(%)=(V*T/W)*100% = (V*18.02/(0.4*1000))*100% 1.2 水解后剩余滴定法:[1] 取阿司匹林原料药约1.5g，精密称定，加氢氧化钠滴定液(0.5mol/L)50.0ml混合，缓缓煮沸10分钟，放冷，加酚酞指示剂，用硫酸滴定液(0.25mol/L)滴定，并将滴定结果用空白试验校正。每1ml的氢氧化钠滴定液(0.5mol/L)相当于45.04mg的C9H8O4。 含量(%)=(V0—V)*F*T/W*100% =(V0—V)*F*18.02/(0.4*1000)*100% (V0为空白实验消耗的硫酸滴定液的体积(ml);V为样品测定时消耗硫酸滴定液的体积(ml);W为阿司匹林样品的取样量(g);F为硫酸滴定液的浓度的校正因素;T为氢氧化钠滴定液的滴定度。) 1.3 HPLC法测定阿司匹林原料药含量 以C18柱(150mm*4.6mm，5µm)为色谱柱，0.2%庚烷磺酸钠—乙腈(85:15)(用冰醋酸调PH至3.4)为流动相;检测波长为280nm;柱温30?;流速; 1.0ml/min ;理论塔板数按阿司匹林峰计算应不低于3000。 取阿司匹林样品30mg精密称定，置于50ml的容量瓶中，用稀释液(乙腈——甲酸(99:1))溶解超声并稀释至刻度，混合均匀。精密量取10µl，注入液相色谱仪中，记录色谱图;另称取阿司匹林对照品约25mg，精密称定，置于50ml容量瓶中，用稀释液溶解并稀释至刻度，混合均匀。精密量取10µl，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，即得: C=A*Co*D/Ao C为样品浓度(mg/ml);A和Ao分别为样品和对照品溶液的峰面积;D为稀释倍数(ml)。 二. 阿司匹林制剂的含量测定 1. 体内: 1.1 HPLC-MS/MS法[3] 色谱条件:色谱柱为C18柱(4.6mm*100mm，5µm);流动相0.05%甲酸的乙腈溶液-10mmol/L甲酸铵溶液(PH3.5)(40:60);流速1.5ml/min(分流比为1:9);柱温40?;进样量10µl。 质谱条件:扫描方式选择多反应监测(MRM)，离子化方式选择电喷雾(ESI) ASA(阿司匹林)、AS、4-ABS(内标物)的母/离子源;电离模式选择负离子;。 子离子对的质荷比(m/z)分别为;178.9?136.8,136.9?92.8和162.9?118.9. 标准品和样品的制备:取含氟化钠5mg/ml的空白人血浆，加入ASA标准溶 、50、100、250、500、1000、4000和10000mg/ml的液制成质量浓度分别为25 系列标准血浆溶液，以及质量浓度为75、750和7500ng/买来的质控样品。制作标准曲线。 血浆样品处理:取血浆样品在室温下条件下解冻并混合均匀，吸取200µl，移至1.5ml离心管中，分别加入1mol/L盐酸溶液50µl和内标溶液200ul，混合均匀， ，振摇1分钟，离心(13000r/min)5分钟后，取上层清液加入乙酸乙酯600µl 用氮气吹干，加入流动相300µl溶解，取10µl进行进样，记录色谱图，得到样品的峰面积，将峰面积带入标准曲线中得到样品浓度。 2. 体外: 2.1两步滴定法测定阿司匹林片的含量: 取阿司匹林片样品10片，精密称定，研磨细，精密称取片粉适量(约相当于阿司匹林0.3g)，放在锥形瓶中，加入中性乙醇20ml，振摇，使阿司匹林充分溶 解，加入3滴酚酞指示剂，用氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)滴定至溶液呈粉红色。 在上述供试品溶液中，精密加入氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)40ml，在水浴上边振摇边加热15min后，迅速放冷至室温，用硫酸迪斯尼工业(0.05mol/L)滴定，并将滴定结果用空白试验进行校正。每1ml的氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)相当于18.02mg的C9H8O4。 标示量%=(V0-V)*F*T*W平/(W*标示量)*100% V0为空白实验消耗的硫酸滴定液的体积(ml);V为样品测定时消耗的硫酸滴定液的体积(ml);F为硫酸滴定液的浓度校正因子;T为氢氧化钠滴定液的滴定度(mg/ml);W为供试品片粉的取样量(g);W平为供试品的平均片重(g);标示量为片剂的规格(mg/片)。 2.11 HPLC法测定阿司匹林片的含量[4] 色谱条件:ODS Cl8 Hypersil(150 mm*4(6mm，5 m)色谱柱，以水一乙腈一磷酸(76:24:0.5)为流动相;检测波长为276 nm;流速1.3 ml/min;进样量20µl;理论板数不低于10 000。 溶液的制备:供试品制备精密量取样品适量置50 ml容量瓶中，加流动相适量，超声使其溶解，用流动相稀释至刻度(得到200µg/ml的溶液)，备用。 对照品的制备:精密称取阿司匹林对照品100mg于50 ml容量瓶中，加流动 g/ml的溶液)+-，备相适量，超声使其溶解，用流动相稀释至刻度(得2 000µ 用。 空白溶液制备除阿司匹林外，精取处方量的辅料，配置空白样品溶液。按供试品制备方法制备对照品溶液。通过外标法计算样品浓度。 C=A*Co*D/Ao C为样品浓度(mg/mL);A和Ao分别为样品和对照品溶液的峰面积;D为稀释倍数(ml)。 2.2 HPLC法测定阿司匹林肠溶片的含量[5] C l8(4.6 mm*250 mm，5 µm);流动相:甲色谱柱:Agilent Eclipse XDB— 醇-1,冰醋酸溶液(43:57);检测波长:276 nm;流速:1 ml/min;柱温:30?;进样量:20µl;理论板数按阿司匹林峰计算不低于5 000。 对照品溶液的制备:取阿司匹林对照品25 mg，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品贮备液;精密量取对照品贮备液10 ml。置100 ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。 取本品10片，除去包衣，混合均匀，研细，精密称取适量(约相当于阿司匹 林0.2 g)，置100 ml量瓶中，加甲醇溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，再精密量取5 ml，置200 ml量瓶中，加流动相溶液稀释至刻度，摇匀，用0.45 m的微孔滤膜滤过。取续滤液即得。 2.21 RP—HPLC法测定阿司匹林肠溶片中阿司匹林的含量[6] 色谱条件:阿司匹林肠溶片中阿司匹林的测定:色谱柱:菲罗门Gemini C18柱(250×4(6mm，5µm);流动相:甲醇一水一冰醋酸(40:60:6，盐酸调节PH=2(5);检测波长:280nm;流速:1.0ml/min;柱温:40?;进样量20µl;理论塔板数按阿司匹林色谱峰计算应不低于2000。 对照品溶液的制备:精密称取阿司匹林对照品45.07mg，置25ml容量瓶中，加乙腈超声溶解并稀释至刻度，摇匀制得浓度为1.80mg/ml的对照品贮备液。 供试品溶液的制备:取本品20片，烘干至恒重后精密称定,研细，精密称取粉末适量(约相当于阿司匹林25mg)，置25ml量瓶中，加入适量乙腈，超声处理10min溶解，加乙腈定容，摇匀，用0.22µm滤膜过滤，取续滤液，即得阿司匹林供试品溶液。进样量20µl，注入HPLC，得色谱图，用外标法计算含量。如2.11 2.22 分光光度法测定阿司匹林肠溶片的含量 标准溶液系列和样品溶液的配制分别取0.5g/ml乙酰水杨酸标准溶液0.00ml(空白溶液)，0.50ml，1.00ml，1.50ml，2.00ml和阿司匹林样品溶液 1.00ml置于25ml的容量瓶中，分别加入7%盐酸羟胺乙醇液 1.00ml，2 mol/L NaOH 1.00ml，放置3分钟，再分别加入 4mol/L HC1和1O% FeC13各1.00ml，加水至刻度，摇匀。 标准曲线的绘制标准溶液系列和样品溶液放置10分钟后，用空白溶液做对照，在520nm处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，标准溶液浓度为横坐标作图，绘制出标准曲线表 样品的测定和结果通过测定样品的吸光度，从标准曲线上，找出阿司匹林样品稀释溶液的浓度为0.020g/ml，原阿司匹林样品溶液的浓度: 0.020g/L*25(稀释倍数)=0.50g/L 阿司匹林药片的含量=(0.50g/L) /(20片/L)=25mg/片 2.3 HPLC法测定阿司匹林栓剂中阿司匹林含量 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-四氢呋喃-冰醋酸-水(20: 5 : 5: 70)为流动相;检测波长为276nm。理论板数按阿司匹林峰计算不低于3000，阿司匹林峰与水杨酸峰的分离度应符合。 取本品5 粒， 精密称定， 置小烧杯中， 在4 0 ~50?C水浴上微温熔融，在不断搅拌下冷却至室温，精密称取适量(约相当于阿司匹林0.1 g ) , 置50ml 量瓶中， 加1%冰醋酸的甲醇溶液适量， 在40~50?C水浴中振摇使阿司匹林充分溶解，放冷后用1%冰醋酸的甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，置冰浴中冷却1小时， 取出， 迅速滤过， 取续滤液作为供试品贮备液。精密量取供试品贮备液5ml, 置100ml 量瓶中， 用1%冰醋酸的甲醇溶液稀释至刻度， 摇匀， 精密量取10ul， 注人液相色谱仪， 记录色谱图; 另取阿司匹林对照品， 精密称定， 加1 % 冰醋酸的甲醇溶液振摇使溶解并定量稀释制成每l m l 中约含0.1mg的溶液， 同法测定， 按外标法以峰面积计算，即得。 A=C*Ao/Co 2.4 HPLC法测定阿司匹林胶囊中阿司匹林含量 色谱条件同HPLC法测定阿司匹林栓剂，取装量差异项下内容物， 研细， 精密称取适量(约相当于阿司匹林10mg),置100ml量瓶中，按上法操作。 2.5 百分吸收系数法测定阿司匹林注射液 精密称取阿司匹林注射液适量，置于100ml容量瓶中，用无水乙醇定容溶解，精密量取2ml置于100ml容量瓶中定容，用紫外分光光度计在276nm下测定吸光度: A= E1%cm×C×L C% = A / E1%cm 样品% = A / E1%cm ×F/W (F = 稀释倍数和浓度换算因子 W = 取样量) 2.6 荧光光谱法测定阿司匹林注射液含量 精密称取阿司匹林对照品适量，置于100ml容量瓶中，用无水乙醇定容溶解，精密量取2ml置于100ml容量瓶中定容;精密称取阿司匹林注射液适量，置于100ml容量瓶中，用无水乙醇定容溶解，精密量取2ml置于100ml容量瓶中定容。取一定量对照品和样品分别用荧光光度计进行测量 C=(Rx-Rxb)/(Rr-Rrb)*C0 (CC为供试品溶液、对照品溶液的浓度，R供试品溶液荧光强度，R供和 0XXb试品溶液试剂空白的荧光强度，R对照品溶液的荧光强度，R为对照品溶液的试rrb 剂的空白荧光强度) 2.7 近红外法测定阿司匹林含量 精密称取不同比例的精氨酸阿司匹林与蔗糖酯共10份，分别混合均匀，用压片机压片，得到含量不同的10种片剂，每种片剂压制100片。从每种100片中随机选取10片，用红外检测器进行测定，每片正反面各测1次，取平均光谱 做为样品光谱。扫描区间在4000-11000/cm，分辨率为8cm/cm。光谱数据采用加性散射校正预处理，来消除药片表面不同引起的误差，得测量值，计算阿司匹林含量。 结语: 阿司匹林作为一种经典的解热镇痛药已经存在了100多年，其测定方法也是多种多样，现在多采用高效液相色谱法对其进行含量测定，因为高效液相色谱法具有高效，准确，敏感度高等特点，随着高效液相色谱法技术的进一步发展，高效液相色谱法在含量测定方法中将占有越来越重要的地位。 [1]杭太俊.《药物分析》 人民卫生出版社，2011.8，第七版:212~221. 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