【doc】雌二醇及植物雌激素α-玉米赤霉醇致去卵巢大鼠子宫增大作用的比较

【doc】雌二醇及植物雌激素α-玉米赤霉醇致去卵巢大鼠子宫增大作用的比较 雌二醇及植物雌激素α-玉米赤霉醇致去卵 巢大鼠子宫增大作用的比较 2005年2月 第26卷第1期 首都医科大学 JournalofCapitalUniversityofMedicalSciences Feb.2005 VO1.26NO.1 1711.雌二醇及植物雌激素.玉米赤 霉醇致去卵巢大鼠子宫增大作用的比较 首都医科大学病理生理学教研室王雯杨慧王红霞张立克 提要:为观察植物雌激素a一玉米赤霉醇(zAL)对去卵巢大鼠子宫增大的影响,并对其与雌二醇的作用进行比较分析, 建立大鼠去卵巢模型,分别补充170一雌二醇(E2)或ZAL(1mg/kg,3d注射1次,共35d).用放射免疫法测定大鼠血浆雌 二醇质量浓度;分离子宫,计算子宫质量(g)/体质量()的比值,制作子宫病理切片.发现:去卵巢+补充17p一雌二醇组的 血浆雌二醇质量浓度较单纯去卵巢组明显升高,去卵巢+补充zAL组的血浆雌二醇质量浓度明显低于去卵巢+补充170一 雌二醇组;zAL对子宫增大的影响很弱(子宫质量(g)/体质量(kg)=0.66),明显低于170一雌二醇[子宫质量(g)/体质量 (kg)=1.96];镜下见170一雌二醇组大鼠子宫内膜出现显着囊性增生,而zAL组未见增生性病变.以上结果表明zAL对子 宫的刺激很小,明显优于17D一雌二醇,可能作为一种选择性雌激素受体调节剂而发挥作用. 关键词:植物雌激素;a一玉米赤霉醇;17D一雌二醇;去卵巢大鼠;子宫 中图分类号:Q492.5 激素替代治疗(hormonereplacementtherapy, HRT)具有减轻更年期症状,防止骨质疏松,心血 管疾病及老年性痴呆等作用,但长期应用可能 提高子宫内膜癌和乳腺癌的发病率l3,;因此,人 们将注意力投向了有效而安全可靠的雌激素替代 物——植物雌激素.a一玉米赤霉醇(a—zearalanol. zAL)是天然内源性植物激素玉米赤霉烯酮 (zearalenone,ZEN)的还原产物.ZEN广泛存在于 豆类,谷物等多种植物中,可促进动植物的生长发 育.zAL比ZEN更安全有效,其效价为ZEN的3 倍.目前,美国,加拿大等国已将zAL用作动物生 长促进剂.在医学领域有关它的研究才刚刚起步, 初步的实验研究发现_5j,它具有与雌二醇类似的 抗动脉粥样硬化及抑制组织因子分泌等作用,可产 生心血管保护效应.本工作旨在观察ZAL对去卵 巢大鼠子宫增大的影响,并与雌二醇的作用进行比 较分析. 1材料和方法 1.1主要试剂 1713一雌二醇(Sigma公司),a一玉米赤霉醇(中国 医学科学院基础医学研究所病理生理室戴顺龄教 授惠赠),雌二醇放射免疫测定试剂盒(天津九鼎医 学生物工程有限公司). 1.2实验动物及分组 36只健康雌性Wistar大鼠(12周龄,体质量 (250?10)g,由首都医科大学实验动物科学部提 供,清洁级,合格证号SCXK11—00—0012),分为4 收稿日期:2004.06.11*首都医科大学病理学教研室 十北京市优秀人才培养专项经费(2004ZDO501817)资助项目 组(每组均为9只):?假手术对照组(sham);?去 卵巢(OVX)组;?去卵巢+补充1713一雌二醇组 (OVX4-E2):去卵巢14d后肌注17t?一雌二醇(1 mg/kg,3d注射1次,共35d);?去卵巢+补充Ct一 玉米赤霉醇组(OVX4-zAL):去卵巢14d后肌注 a一玉米赤霉醇(1mg/kg,3d注射1次,共35d). 1.3大鼠去卵巢模型 大鼠称质量,经戊巴比妥钠(45mg/kg)腹腔 麻醉后,参考施新猷等_7j的方法,在无菌条件下进 行双侧卵巢切除手术.自腹正中做长约2cm切 口,先找到膀胱,其下即为粉红色,呈双角形的子 宫.分别分离左右侧子宫周围的脂肪组织,沿输卵 管找到卵巢(直径约0.5cm,呈伞状),在输卵管峡 部结扎输卵管,将卵巢切除,关腹.术后肌注青霉 素8万U以抗感染. OVX术后14d开始补充外源性雌激素(E,或 zAL)共35d.实验期间大鼠始终健康,未见不良 反应. 1.4样品采集 实验结束后大鼠同前麻醉,3.8%柠檬酸钠抗 凝,颈总动脉采血,立即以4?3000g离心10 min,分离血浆备用.同时分离子宫附近的脂肪组 织,将子宫剪下,AR2130/C型电子天平准确称取 子宫质量,计算子宫质量(g)/体质量(kg)的比值. 将子宫标本置于10%甲醛液中固定,常规石蜡包 埋切片,经HE染色制作子宫病理切片. 1.5血浆雌二醇质量浓度测定 按照试剂盒说明,采用典型的双抗体放射免疫 52 首都医科大学第26卷 法测定大鼠血浆雌二醇质量浓度.分别将各 200肚L待测血浆及I标记的雌二醇衍生物与雌 二醇抗体充分混匀后37?温育90min,待抗原抗 体反应达到平衡后,加入1000L驴抗兔第2抗 体,使游离部分与结合部分分离.充分混匀,3600 g离心20min,弃上清,用7一计数器测量沉淀部分 的放射性强度(次/min).测出每份标本双管放射 性强度并计算出平均数.根据雌二醇标准品质量 浓度(ng/L)及其相应的放射性强度(Bq)绘制标 准曲线(相关系数0.98,回归系数203),查出待测 血浆中雌二醇质量浓度.质量控制:雌二醇组内及 组间变异系数(coefficientofvariation,CV)分别为 8.0%,7.7%. 1.6统计学方法 实验数据以均数?标准差(?S)表示,用 SPSS软件进行统计学分析,多组间比较采用单因 素方差分析(one—wayAN0VA).用Student—New— man—Keuls法进行两两比较,P<0.05为差异有统 计学意义. 2结果 2.1大鼠血浆雌二醇质量浓度的变化 各组大鼠血浆雌二醇质量浓度的变化见图1. 与对照组相比,去卵巢组大鼠血浆雌二醇质量浓度 明显下降(P<0.05);而去卵巢+补充1713一雌二醇 组血浆雌二醇则较单纯去卵巢组明显升高(P< 0.01).去卵巢+补充zAL组血浆雌二醇质量浓 度与单纯去卵巢组相比差异无统计学意义,但明显 低于去卵巢+补充1713一雌二醇组(P<0.O1). 7O 6O 5O 4O 邑 \^3O 2O 10 O sham0VX0VX+E2OVX+ZAL 图1大鼠血浆雌二醇质量浓度 Fig1Concentrationofestradiolinratplasma n9foreachgroup;aP<0.05"USshamgroup:bP< 0.O1"USOVXgroup;cP<0.O1"USOVX+E2group. 2.217p?雌二醇和a.玉米赤霉醇对大鼠子宫增生 的影响 各组大鼠子宫质量(g)/体质量(kg)比值的变 化见图2.去卵巢后,大鼠子宫明显缩小(子宫质 量(g)/体质量(kg)=0.45),不及对照组(子宫质量 (g)/体质量(kg)=1.67)的30%;补充1713一雌二醇 和ZAL,子宫虽均较去卵巢组增大,但ZAL对子宫 增大的影响很弱(子宫质量(g)/体质量()= 0.66),明显低于1713一雌二醇(子宫质量(g)/体质量 (kg)=1.96),仅为后者的33%(P<0.01). e 己 三 OOVXOVX +E!OVX+ZAL 图2大鼠子宫质量(g)/体质量(kg)比值的变化 Fig2Ratioofuterusweighttobodyweightineachgroup n=9foreachgroup:aP<0.01"USshamgroup;bP<0.05 "USOVXgroup;cP<0.01"USOVX+E2group 图3为显微镜下所见子宫病理变化.单纯去 卵巢大鼠子宫内膜明显萎缩,补充1713一雌二醇组大 鼠子宫内膜出现显着增生,而补充zAL组未见增 生性病变存在. 3讨论 本实验通过切除大鼠双侧卵巢复制去卵巢动 物模型,去卵巢2周后,开始补充外源性雌激素,35 d后取血测血浆雌二醇质量浓度.结果显示,ClVX 组大鼠血浆雌二醇质量浓度明显低于对照组,表明 内源性雌激素水平已显着降低;OVX+E,组血浆 雌二醇较OVX组明显升高,补充a一玉米赤霉醇后 血浆雌二醇水平与OVX组相比无显着差别,但明 显低于OVX+E2组.以上结果表明本实验动物 模型复制成功. 各种原因所致的雌激素水平反复或持续增高 可引起子宫增大,子宫内膜增生.轻度增生称为囊 性增生,中度增生称为腺瘤样增生.一般把子宫内 膜腺瘤样不典型增生视为重要的癌前病变.通过 活检材料的回顾性观察J,发现多数子宫内膜癌 病例在发现前6,13年前就有子宫内膜息肉或囊 性增生性病变存在,在癌发现前1,5年有腺瘤样 增生性病变的经历.我们在实验中观察到,zAL 作为植物雌激素,确实能使去卵巢大鼠子宫增大, 但增大的程度明显小于17B一雌二醇,仅为后者的 笫l期土盂等:l7雌二醇及植物雌激素C*-乇米弥霉醇致土卵巢大鼠子宫增大怍 J=11的比较53 图3大鼠子宫病理变化 Fig3Paihologicalchangesofratuterw~ Ashah:;BOVXCOVX十:f】OVX—ZAI;411 33%.甚趸小于对照组病理观察与大傩观察一 致,镜下见17口雌二醇缩大鼠子宫内膜出现显着增 生,而ZAL组未地增生性病变存在 以上实验结果表明zAL时子宫的刺激很小. 明显优于178雌?醇:前期研究叫发现,在心血 管保护方面,ZAL具有与l73一雌二醇类似的效应, 均可以抗动脉粥样硬化和抑制组织因子分泌:本 实验中ZAI刺激子宫的不良反应明显低子l70一雌 二醇,表明它有一定的临床应用前景推测ZAL 在某些方而具有与l7S一雌二醇不同的药理学特性, 可能作为一种选择性雌激素受体橱节剂(selective— lvestrogenreceptormodulator.SERM)而发挥作 用,但是还需要进?步进行受体测定来验证上述 设想 参考文献 1~hwertz1]W,PenckoferSSexdi{ferenc雌andthe effems0fxrmcnOnhem;~taslsandV~'ular reactivityHrILung.2叭】1,30(6):401,426 2CollinsIC1inicaIcardiova.~uIai-studi~lfhormone replacementLherapyAmICardio.2002,90【sup Pl】:3(】F,3417 3LoheRABenefitsandrisksofestrogenr~placemem therapyAmJC)b~letGynecoI[995,l73(3):982, 989 4ReidRLProgesdnsinhormonreplacememthera :ImvaclOilendometria[andhreasICalqC~2rJ S0(;C,2000.2219):677,68I 513aiS.I)uar~J.LuY.talAnephytoestrogen 口一zearalano[markedlyinhihitsprogres.sionofathem— genstsinowerio:tamizedc}Kes1e们lfedrabh~tsJ.Viol (llCardio1.2002.34?A0】 6工盘,束J瑾,租救玉l7雌二醇及..玉米卉霉酵 对人脐静脉内皮细胞组载因于表达的影响基础 医学临床,2[]04.24(1):56,59 7施新猷班代医学实验动物学北京:人民军医出 版社,2000380,38l 8~tzerFR.Hormonale~alua【_0nofearlypregnancy Feral[Steril.1980.34(1):【,13 9l坂岛宗,组【病理学图谱陆进,译.上海:上海 画报出版社.1997207,214