成年斑马鱼石蜡连续切片的制作和苏木精_伊红染色_cropped

成年斑马鱼石蜡连续切片的制作和苏木精_伊红染色_cropped 异 无 统 计 学 意 义 的 发 生 率 更 高 人 类 原 发 性 高 血 压 病 是 环 境 和 遗 传 因 素 的( P>0.05 ) 。 。 相 互 作 用 而 发 病 的 多 因 子 遗 传 性 疾 病 据 报 道 高 血 压 , 75% [ ] 3 讨 论3 患 者 的 疾 病 发 生 与 应 激 有 关 建 立 适 宜 的 动 物 模 型 对 探 。 讨 这 些 疾 病 发 生 发 展 的 复 杂 机 制 寻 求 防 治 疾 病 的 有 效 途 , 慢 性 应 激 动 物 模 型 是 对 应 激 反 应 相 关 性 疾 病 机 制 研、径 具 有 深 远 的 重 要 意 义 。 究 和 防 治 的 重 要 手 段 应 具 备 与 人 类 应 激 性 疾 病 的 相 似 , 性 可 重 复 性 应 激 刺 激 造 成 动 物 心 理 紧 张 状 态 心 理 上 的 、。, 改 变 进 一 步 影 响 生 理 功 能 引 起 所 谓预 警 反 应 是 以 交 感 ; “” 参 考 文 献神 经 肾 上 腺 系 统 为 中 心 的 一 系 列 反 应 导 致 应 激 性 高 血 压 ; 应 激 研 究 综 述 信 阳 师 范 学 院 学 报王 明 辉 张 淑 熙 . . , 1. 疾 病 的 发 生 形 成应 激 性 高 血 压 动 模 型 其 机 制 与 人 类 , “”。 哲 学 社 会 科 学 版 ( ) , 2003 , 23 : 59,61. 原 发 性 高 血 压 发 病 机 制 更 接 近 本 实 验 采 用 的 电 击 或 电 击 。吕 俊 华 钟 玲实 验 性 抑 郁 症 动 物 模 型 的 评 价中 国 病 , . . 结 合 噪 声 信 号 作 为 条 件 刺 激 使 应 激 心 理 成 分 大 大 增 加 , , 2. 理 生 理 杂 志 , 2001 , 17 : 916,919. 易 化 动 物 的 心 理 反 应 造 成 动 物 高 血 压 结 果 表 明 我 , 。 : ( 1 ) 郭 金 龙应 激 医 学 研 究 进 展实 用 医 学 院 杂 志 . . , 2003 , 们 采 用 的 实 验 性 应 激 源 低 频 低 压 交 电 电 击 足 底 或 足 底 电 、20 : 151,152. 3. 击 结 合 噪 声 的 复 合 刺 激 诱 导 高 血 压 动 物 模 型 是 有 效 的 而, 收 稿 日 期 ( : 2005-05-20 ) 复 合 应 激 源 比 单 一 应 激 源 诱 发 高 压 大 鼠且 方 法 简 易 ; ( 2 ) 成年斑马鱼石蜡连续切片的制作和 苏木精伊红染色 - *袁广明 胡黎平 李 燕 陈大堤 谢富康 中山大学基础医学实验教学中心广州 ( , 510089 ) 目 的伊 红 摘 要 介 绍 斑 马 鱼 石 蜡 连 续 切 片 的 制 作 和 苏 木 精染 色 的 方 法 方 法 利 用 【】- ( HE ) 。 Thermo Shandon 组 织 处 理 机 型 石 蜡 包 埋 机 型 切 片 机 Excelsior 、Thermo Shandon Histocentre 2 、Thermo Shandon Finesse 325 、Thermo Shandon 全 自 动 染 片 机 和 全 自 动 封 片 机 制 作 成 年 斑 马 鱼 石 蜡 连 续 切 片 并 进 行 染 色 结Varistain Gemini Thermo Shandon Consul HE 。 果利 用 上 述 方 法 获 得 清 晰 的 成 年 斑 马 鱼 石 蜡 连 续 染 色 切 片 结 论 斑 马 鱼 石 蜡 连 续 切 片 的 制 作 和 染 色 与 哺 乳HE 。 HE 类 动 物 组 织 切 片 和 染 色 在 操 作 和 某 些 工 作 参 数 上 有 所 不 同 。 关 键 词 斑 马 鱼 石 蜡 切 片 苏 木 精伊 红 染 色【】 ; ; - 斑 马 鱼 模 式 生 物 的 地 位 已 在 国 际 上 被 普如 下 氯 化 铝 盐 酸 甲 酸 蒸 馏 水 ( Danio rerio) 8 g, 10 ml , 6.5 ml , 100 : 遍 认 可 被 广 泛 应 用 于 开 展 发 育 生 物 学 基 因 组 蛋 白 组 学 , 、、ml 。 及 功 能 组 学 研 究 近 来 斑 马 鱼 也 逐 渐 在 我 国 个 别 实 验 室 。 , 主 要 设 备组 织 处 理 机 Thermo Shandon Excelsior ; 1.1.3 [ ] 1,3登 陆 我 们 摸 索 出 了 成 年 斑 马 鱼 石 蜡 连 续 切 片 的 制 作 。 型 石 蜡 包 埋 机 Thermo Shandon Histocentre 2 ; Thermo 和 苏 木 精伊 红 染 色 的 实 验 方 法 兹 将 有 关 体 会 总 结 - ( HE ) , 型 切 片 机 Shandon Finesse 325 ; Thermo Shandon Varistain 成 文 供 国 内 有 兴 趣 开 展 斑 马 鱼 研 究 的 同 行 参 考 , 。 全 自 动 染 片 机 全 自 动 封 片 Gemini ; Thermo Shandon Consul 机 。 材料与1 成 年 斑 马 鱼 石 蜡 连 续 切 片 的 制 作1.1 实 验 动 物成 年 斑 马 鱼 为 市 售 野 生 型 斑 马 鱼 体 1.1.1 ( 长 大 于 3 cm) 。 主 要 试 剂无 水 乙 醇 二 甲 苯 甲 醛 伊 红 1.2.1 ; ; ; ( 0.5% ) 和 苏 木 素 染 料 公 司 石 蜡 液 脱 钙 液 配 方( Sigma ) ; ; Plank ( ) , 基 金 项 目 中 山 大 学 年 实 验 室 开 放 基 金 项 目 资 助: 2005 斑 马 鱼 分 段 示 意 图图 1 通 讯 作 者 : : * E-mail frankxie2000@yahoo.com 乙 醇 乙 醇 蒸 馏 水 苏 木 素 80% , 5 min ; 70% , 5 min ; , 3 min ; , 制 作 方 法将 成 年 斑 马 鱼 禁 食 后 完1.1.4 12 h 流 水 盐 酸 酒 精 流 水 蒸 馏 水 5 min ; , 2 min ; , 10 s ; , 40 min ; , 整平展地浸泡 于 甲 醛 溶 液 中 于 冰 箱 固10% , 4? 乙 醇 乙 醇 伊 红 3 min ; , 4 min ; 80% , 2 min ; 90% , 2 min ; 95% 定 后如图 示将整条鱼横切成头胸腹12 h , 1 、、 乙 醇 乙 醇 乙 醇 , 2 min ; 100% ( ? ) , 3 min ; 100% ( ? ) , 3 臀尾四段、。 二 甲 苯 二 甲 苯 二 甲 苯 min ; ( ?) , 5 min ; ( ?) , 5 min ; ( ?) , 头 段 将 头 段 于 甲 醛 溶 液 室 温 固 定 后 脱 钙 : 10% 24 h 全 自 动 封 片 机 常 规 封 再 用 5 min 。 Thermo Shandon Consul 液 自 来 水 冲 洗 用 ( Plank ) 1 d , 1 d 。 Thermo Shandon 片 图 ( 2 、3 ) 。 组 织 处 理 机 按 下 列 条 件 进 行 脱 水 透 明 浸 蜡 Excelsior 、 、 : 乙 醇 乙 醇 乙 醇 75% 、30?, 30 min ; 90% 、30?, 10 min ; 95% 、 乙 醇 乙 醇 30?, 10 min ; 100% ( ? ) 、30?, 10 min ; 100% 结 果2 通 过 摸 索 我 们 染 出 了 清 晰 的 斑 马 鱼 连 续 切 片 , HE ( 4 乙 醇 二 甲 苯( ?) 、30?, 10 min ; 100% ( ?) 、30?, 5 min ; 示 成 年 斑 马 鱼 头 部 组 织 染 色 切 片 可 辨 别图 μm) 。 2 HE , 二 甲 苯 二 甲 苯 ( ?) 、30?, 5 min ; ( ?) 、30?, 5 min ; ( ?) 、 玻 璃 体 眼 底 各 层 结 构 以 及 脑 组 织 等 重 要 结 构 图 示 成、。 3 石 蜡 石 蜡 30?, 5 min ; ( ? ) 、60?, 20 min ; ( ? ) 、60?, 10 年 斑 马 鱼 内 脏 组 织 染 色 切 片 可 见 消 化 道 上 皮HE , 绒 ( 石 蜡随 后 用 ( ? ) 、60?, 10 min 。 Thermo Shandon min ; 毛 胰 腺 外 分 泌 部 胰 岛 肝 脏 等 组 织 和 器 官 ) 、、、。型 石 蜡 包 埋 机 进 行 常 规 包 埋 继 而 用 Histocentre 2 。Thermo 型 切 片 机 切 片 厚 度 胸 腹 段 臀 Shandon Finesse 325 , 4 μm。、 讨 论3 段 尾 段 除 不 需 要 脱 钙 外 其 它 处 理 条 件 同 头 部 、, 。 成 体 斑 马 鱼 连 续 切 片 的 制 作 体 会3.1 采成 年 斑 马 鱼 连 续 石 蜡 组 织 切 片 的 染 色 步 骤1.2 HE 要 染 出 高 质 量 的 斑 马 鱼 连 续 切 片 关 键 在HE ( 4 μm) , 用 全 自 动 染 片 机 按 下 列Thermo Shandon Varistain Gemini 于 切 片 的 制 作 过 程 在 进 行 整 条 鱼 的 连 续 石 蜡 切 片 前 首 。 , 条 件 进 行 脱 蜡 水 化 染 色 脱 水 透 明 二 甲 苯 、、HE 、、: ( ?) , 先 要 保 证 固 定 过 程 中 鱼 体 的 平 展 避 免 鱼 体 弯 曲 以 方 便 , , 乙 醇 二 甲 苯15 min ; ( ? ) , 15 min ; 100% ( ? ) , 15 min ; 后 续 的 操 作 在 进 行 分 段 处 理 时 要 选 择 鱼 体 自 然 的 体 表 。 , 标 志 进 行 定 位 本 实 验 的 三 个 横 切 位 置 选 择 在 鱼 鳃 盖 骨 后 乙 醇 乙 醇 乙 醇 。100% ( ?) , 5 min ; 95% , 5 min ; 90% , 5 min ; 缘 的 切 线 点 背 鳍 与 身 体 的 远 端 交 点 以 及 鱼 体 和 鱼 尾 的 移 、 行 点 从 而 将 鱼 体 分 为 头 胸 腹 臀 尾 四 段 图 其 中 , 、、、( 1 ) 。 , 头 部 由 于 外 围 含 骨 质 较 高 内 部 组 织 松 软 所 以 在 切 片 前 、, 必 须 脱 钙 鱼 头 脱 钙 后 冲 水 必 须 充 分 否 则 会 影 响 染 色 。 , 。 由 于 我 们 要 做 的 是 连 续 切 片 要 求 每 张 切 片 结4 μm , 构 必 须 完 整 与 陆 生 哺 乳 类 动 物 相 比 斑 马 鱼 体 小 内 部 脏。, 、器 结 构 集 中 尤 其 是 胸 腹 部 包 括 心 肝 脾 鳔 肾 胰 腺 , , 、、、、、、 消 化 道 胆 囊 等 组 织 和 器 官 切 片 时 极 易 碎 裂 考 虑 到 肝 、, 。 、 脾 的 细 胞 体 小 密 集 纤 维 成 分 少 血 管 丰 富 而 质 脆 的 特 、、、 点 我 们 在 脱 水 透 明 浸 蜡 的 处 理 过 程 中 以 肝 脾 为 基 准 , 、、、, 不 断 调 节 各 步 骤 的 时 间 摸 索 出 一 套 可 以 进 行 连 续 切 片 的 , 处 理 方 法 。 另 外 在 裱 片 时 为 了 保 持 切 片 之 间 的 连 续 性 我 们 在 , , 已 包 埋 的 蜡 块 右 上 角 作 一 个 三 角 形 切 口 以 作 标 记 以 保 证 , 图 中 黑 箭 头 示 玻 璃 体 白 箭 头 示 眼 底 弯 箭 头 示 脑 组 织 , , 裱 片 的 方 向 保 持 一 致 。 图 成 年 斑 马 鱼 头 部 组 织 染 色 切 片 2 HE ×50 斑 马 鱼 连 续 切 片 染 色 的 操 作 体 会3.2 HE 为 了 确 保 染 色 质 量 要 特 别 注 意 三 点 其 一 每 次 染 片 , 。, 前 必 须 将 苏 木 素 和 伊 红 过 滤 将 沉 淀 物 和 杂 质 除 去 其 , , ; 二 二 甲 苯 酒 精 尽 可 能 新 鲜 特 别 是 伊 红 后 的 , 、, 80% 、90% 酒 精 必 须 是 新 鲜 配 制 否 则 影 响 切 片 的 清 晰 度 其 三 盐 酸 , ; , 酒 精 分 色 要 以 脾 淋 巴 结 等 嗜 碱 性 细 胞 较 多 的 组 织 分 色 为 、 准 同 时 兼 顾 其 他 组 织 通 过 比 较 我 们 所 染 切 片 的 质 量 , 。 , , [ ] 4与 有 关 文 献 报 道 的 图 片 相 比 毫 不 逊 色 值 得 强 调 的 是 。 , 我 们 所 作 的 是 连 续 切 片 4 μm 。 植 物 , 2004 , 3 : 16,17. , Solnica-Krezel L, Malicki J , et al. Mutations 4. Pack M 吴 玉 萍 熊 茜 张 广 献 等 斑 马 鱼 基 因 工 程 的 研 究 进 2. , , , . affecting development of zebrafish digestive organs. 展 遗 传 学 报 Development, 1996 , 123 : 321,328.. , 2004 , 31 : 1167,1174. 收 稿 日 期 ( : 2005-11-22 ) 王 跃 祥 , 钟 涛 , 宋 后 燕 斑 马 鱼 发 育 遗 传 学 研 究 进 展 3. . . 国 外 医 学遗 传 学 分 册 . , 2004 , 27 : 220,223. 断面解剖标本制作工具的改进 韩淑云 王守安 张德贵 张凤志 钟震亚 佳木斯大学基础医学院解剖实验室佳木斯 ( , 154007 ) 随 着 现 代 科 学 技 术 的 飞 速 发 展 医 学 领 域 里 的 检 查 , 和 诊 断 技 术 得 到 迅 速 发 展 特 别 是 磁 共 振 。 CT、( MRI ) 、 超 声 和 断 面 扫 描 四 大 医 学 影 像 技 术 的 出 现 使 疾 病 的 诊 , 断 率 得 到 极 大 的 提 高 作 为 其 形 态 学 基 础 的 断 面 解 剖 学 。 已 成 为 人 体 解 剖 学 的 一 个 重 要 组 成 部 分 掌 握 正 常 人 体 , 各 部 的 断 面 结 构 对 于 医 学 影 像 临 床 医 学 院 等 专 业 学 生 、[ , ] 1 2 显 得 尤 为 重 要 在 断 面 解 剖 学 的 教 学 科 研 中 离 不 开 。 解 剖 标 本 因 此 制 作 适 合 教 学 和 科 研 需 要 的 断 面 标 本 , , 是 解 剖 技 术 工 作 者 的 共 同 目 标 然 而 俗 语 道 工 欲 善 其 。, : 事 必 先 利 其 器 为 身 作 更 好 的 断 面 标 本 就 应 该 有 更 为 , 。, 适 宜 的 制 作 工 具 所 以 我 们 与 大 学 物 资 设 备 处 维 修 中 心 , 协 作 对 带 锯 机 等 制 作 工 具 进 行 了 完 善 现 就 几 点 体 会 , , 介 绍 如 下 。 图 自 制 的 标 本 进 给 器1 耐 酸 耐 碱 耐 腐 蚀 能 力 强 根 据 有 机 玻 璃 特 性 可 顺 利 地 、、。 , 完善带锯机及其配套设备1 制 作 出 各 种 理 想 的 标 本 盒 。 制 作 有 机 玻 璃 标 本 盒 的 基 本 过 程 包 括 切 割 取 材 弯 : 、我 校 于 年 年 底 购 买 了 一 台 普 通 木 工 带 锯 机 在2000 , 曲 成 型 磨 削 平 整 接 口 粘 合 抛 光 打 磨 等 过 程 以 往 我 们 、、、。 锯 切 时 经 常 有 锯 口 不 走 直 线 的 现 象 尤 其 锯 切 坚 硬 的 骨 质 , 裁 切 有 机 玻 璃 盒 常 用 电 动 盘 锯 切 割 速 度 要 求 较 高 太 快 , , 时 偏 斜 更 为 明 显 后 在 大 学 机 械 工 程 学 院 加 工 厂 下 料 车 间 , 易 卡 锯 太 慢 则 可 使 锯 片 受 热 变 软 以 致 锯 切 面 不 直 所 以 、, 师 傅 的 启 示 下 考 虑 上 述 现 象 发 生 可 能 与 带 锯 机 锯 条 硬 度 , 我 们 将 原 有 的 钢 锯 片 改 装 成 砂 轮 片 使 以 上 问 题 得 到 很 好 , 不 够 有 关 后 用 材 质 更 好 钢 条 在 校 办 工 厂 自 制 了 新 型 的 带 , 解 决 在 操 作 台 两 端 分 别 加 上 标 尺 使 切 割 尺 寸 得 以 保 证 , , 。 锯 机 锯 条 更 换 后 以 后 问 题 就 迎 刃 而 解 了 同 时 又 在 一 定 , , 同 时 我 们 还 将 直 槽 电 炉 设 计 成对 合 型上 下 均 受 热 , ““( ) , 程 度 上 减 少 了 锯 耗 与 此 同 时 为 了 使 制 作 出 来 的 断 面 标 。 , 提 高 了 受 热 效 果 以 便 更 好 地 弯 折 与 压 型 , 。 本 更 均 匀 我 们 还 自 制 了 标 本 进 样 器 尸 体 经 钢 丝 固 定 通 , , , 粘 合 面 磨 削 平 整 是 制 作 有 机 玻 璃 标 本 盒 操 作 要 求 较 过 手 摇 螺 杆 控 制 前 进 距 离 使 切 片 厚 度 更 为 精 确 在 很 大 , , 关 键 的 工 序 以 前 使 用 的 木 工 锉 木 工 刨 砂 布 等 不 但 费 程 度 上 克 服 了 手 工 固 定 和 机 器 振 动 所 带 来 的 层 面 厚 薄 不 。 、、均 锯 口 偏 斜 等 缺 欠 当 前 已 用 于 切 割 低 温 冻 结 尸 体 制 作 时 费 力 而 且 磨 口 也 不 平 整 而 砂 轮 机 平 磨 机 的 砂 轮 和 、。, , , 、出 了 一 批 厚 度 的 断 面 标 本 厚 薄 均 匀 度 断 面 光 洁 度1 cm , 、 砂 布 打 磨 需 要 给 以 一 定 外 力 才 能 完 成 磨 削 工 序 受 力 的, , 等 都 能 符 合 要 求 图 ( 1 ) 。 其 可 直 接 影 响 平 整 的 效大 小 及 均 一 与 否 是 问 题 的 关 键 , 果 而 且 平 磨 机 的 铸 铁 平 面 一 旦 磨 损 更 换 也 很 困 难 为 此 , , 改进有机玻璃盒制作工具2 我 们 用 旧 落 地 钻 进 行 改 装 使 铸 铁 平 面 固 定 并 在 其 上 方 , , 加 上 旋 转 砂 轮 片 通 过 砂 轮 片 旋 转 使 接 口 磨 平 更 精 确 光 , 、 采 用 有 机 玻 璃 盒制 作 精 美 的 断 面 影 像 解 剖 学 标 本 ,滑 。 装 对 增 强 标 本 的 结 构 显 示 和 外 形 美 观 有 很 大 的 作 用 并 , , 能 经 久 耐 用 长 久 保 存 有 机 玻 璃 平 板 是 甲 基 丙 烯 酸 甲 酯 , 。 摸索缝口连结的技巧3 单 体 聚 合 的 典 型 产 品 具 有 一 系 列 优 异 的 理 化 特 性 光 学 , , 性 能 透 光 率 为 有 较 高 的 机 械 强 度 及 热 塑 加 工 性 能 92% , , 有 机 玻 璃 标 本 盒 接 合 缝 的 连 接 方 法 有 溶 接 法 粘 接、