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Thrombosol——一种新型血小板保存保护剂

2017-11-30 10页 doc 29KB 13阅读

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Thrombosol——一种新型血小板保存保护剂Thrombosol——一种新型血小板保存保护剂 Thrombosol——一种新型血小板保存保护 剂 ? 64? ? 综述钚? 中国输血杂志2005年z月第18卷第1期ChinJBloodTransfusion,February,2005,Vo1.18,No.1 Thrombosol——一种新型血小板保存保护剂 顾海慧钱宝华(第二军医大学长海医院输血科.上海200433) 关键词:血小板血液保存Thrombosol 中圈分类号:R331.143R457.12文献标识码:A文章编号:1004—549X(2005...
Thrombosol——一种新型血小板保存保护剂
Thrombosol——一种新型血小板保存保护剂 Thrombosol——一种新型血小板保存保护 剂 ? 64? ? 综述钚? 中国输血杂志2005年z月第18卷第1期ChinJBloodTransfusion,February,2005,Vo1.18,No.1 Thrombosol——一种新型血小板保存保护剂 顾海慧钱宝华(第二军医大学长海医院输血科.上海200433) 关键词:血小板血液保存Thrombosol 中圈分类号:R331.143R457.12文献标识码:A文章编号:1004—549X(2005)01—0064—03 输注血小板对各种原因引起的血小板减少性和/或功能 障碍性出血具有药物不可替代的治疗作用.但是目前血小 板常规22?振荡保存,由于担心细菌污染和保存损伤而仅 为5d,这导致血库血小板库存困难,l临床血小板供应不足, 提高血小板体外保存时间和质量成为输血医学的研究热点 之一.冰冻保存被认为是延长血小板保存的最佳选择之 一L1] ,冰冻保护剂最初使用非通透性大分子如聚乙烯吡咯烷 酮(PVP),聚乙二酵(PEG)等,也有应用甘油,甘露醇,羟乙 基淀粉等的报道_2],现在常规用5,6%的二甲基亚砜 (DMSO).目前国外一种新的血小板保护剂--Thromboso1. 是由第2信使调节剂(second-messengereffectors)混合组 成,通过可逆地作用于特异的活化通路抑制血小板体外激 活,稳定血小板细胞内生化,防止血小板冻存损伤,用于血小 板保存可提高血小板的体内外功能和活性.国内目前还未 有应用报道,笔者对其在血小板保存中的应用做一综述. 1ThromboSOl的历史 1990年代初,在美国国防部的资助下.Lifecell公司开始 了血细胞保存保护剂研究,开发出第1种用于血小板保存的 Thrombosol.1996年首次报道了应用Thrombosol保存液 态血小板的体外研究结果[3],1998年Thrombosol冰冻保存 血小板对血小板体外功能的作用见诸报道[,随后Currie 等【5进行了首次Thrombosol冰冻保存自身血小板健康志愿 者体内研究.Pedrazzoli等[对严重血小板减少患者进行了 回输Thrombosol冰冻保存自身血小板的实验.目前 Thrombosol冰冻保存血小板已处于临床试验阶段,用于严 重血小板减少症患者自身血小板保存. 2Thrombosol的组成,浓度与安全性 4?保存血小板时[].Thrombosol的主要成分包括: 阿米洛利(amiloride),腺苷(adenosine),硝普钠(sodiumni— troprusside),潘生丁(dipyridamole),米帕林(quinacrine)和 噻氯吡啶(tielopidine)等,由于其它适应证已在临床应用,以 PBS为溶剂,浓缩血小板中各成分的终浓度分别是阿米洛利 0.25mmol/L,腺苷0.1mmol/L.硝普钠50~mol/L,潘生丁 40~mol/L,米帕林0.2~mol/L,噻氯吡啶0.75mmol/L.冰 冻保存血小板时"],Thrombosol组成仅包括阿米洛利, 腺苷和硝普钠,以DMSO为溶剂;浓缩血小板中各成分的终 浓度是DMS02,阿米洛利0.25mmol/L,腺苷0.1mmol/ L,硝普钠50~tmol/L.5,6DMSO冰冻保存血小板回 输前多需离心洗涤去除DMSOE.应用Thrombosol冻 存血小板时DMSO浓度降至2%,安全性提高,有研究者认 为血小板可不洗涤直接输注_s],既简化血小板冰冻保存的 操作步骤,又提高血小板回收率和保存质量. 3Thrombosol的作用机制 无外部刺激时,循环中血小板在体内因子的协同作用 下,通过特异的第2信使传导通路被持续抑制.内皮细胞产 生前列环素刺激血小板单磷酸环腺苷(cAMP)产生.阻断 Ca"动员,并通过抑制磷脂酶C活性阻断蛋白激酶C活 化_6].内皮细胞来源的舒张因子可直接刺激血小板鸟苷酸 环化酶,导致血小板单磷酸环鸟苷(cGMP)合成增加.cGMP 可协同cAMP抑制血小板粘附和聚集反应_1.内皮细胞还 释放ADP酶清除循环中的ADP,减轻ADP对血小板的激 活作用,但是血小板被采集和体外保存后.内皮调节功能消 失导致血小板活化和保存损伤.Thrombosol是血小板第2 信使调节剂混合物,通过直接刺激特异的阻断血小板活化的 第2信使通路,模拟血小板内源性活化抑制机制,可逆地抑 制血小板体外激活,稳定血小板细胞内生化功能,防止血小 板保存损伤[3].其中阿米洛利是膜Na+_H交换抑制剂. 通过阻断血小板内pH下降和Ca抖动员抑制血小板体外激 活的起始步骤;cAMP和cGMP等环核苷是体内抑制血小板 活化的第2信使;腺苷和硝普钠可分别刺激体内cAMP和 cGMP产生,激活特异的第2信使活化通道.抑制血小板活 化;潘生丁是cAMP磷酸二酯酶抑制剂.通过抑制酶活性导 致血小板内cAMP聚集增加;花生四烯酸通路是血小板激 活的另一条途径;米帕林是磷脂酶A2抑制剂.通过阻断某 些脂肪分解抑制花生四烯酸产生;噻氯吡啶是ADP受体抑 制剂,作用于血小板膜抑制信号传导.研究发现血小板 22?或4?保存时.加人Thrombosol可防止cAMP水平下 降,抑制TxB2产生[.TxB2是血小板活化激动剂,加人 Thrombosol后血小板中TxB2/cAMP比值不再明显升高. 这进一步证明Thrombosol通过作用于第2信使激动剂和抑 制剂调节第2信使传导通路.抑制血小板活化,降低血小板 中国输血杂志2005年2月第18卷第1期 ChinJBloodTransfusion,February,2005,Vo1.18,No.1 保存损伤. 4Thrombosol保存血小板的体外功能研究 4.1血小板液态保存(22士2)?恒温振荡保存是当前血 库常规血小板保存方法,以PBS作为对照,比较添加 Thrombosol后对血小板体外功能的影响,结果添加Throm- bosol后血小板数显着减少.血小板代谢率明显升高.pH,乳 酸,二氧化碳,血糖和LDH等代谢指标均显着变化,利托霉 素或凝血酶诱导血小板聚集反应明显下降,实验者认为 Thrombosol的保护作用与温度密切相关,不能用于血小板 常规保存[83.确切机制还需要进一步探索,可能与阿米洛利 在22?下抑制膜Na-H交换引起血小板渗透压应激,pH 显着下降.在渗透压作用下.胞外水不断进入血小板内.导致 Thrombosol处理血小板MPV显着增加. 4?是全血和红细胞常规保存温度,可抑制细菌污染和 降低细胞代谢,但是血小板4?保存时体外存活率和功能活 性快速降低.Connor等[]研究应用Thrombosol4?保存血 小板的体外功能,发现Thrombosol4?保存9d血小板的体 外回收率和功能活性与22?常规保存5d血小板相当.血小 板数保留95,ADP和胶原诱导血小板聚集反应显着增加, P-选择素达下降.低渗性休克反应(hypotonicshockre- sponse,HSR)和形态改变度(extentofshapechange,ESC)是 2项与血小板体内功能密切相关的体外检测指标,添加 Thrombolsol4?保存9d血小板的HSR保留7O%,ESC保留6O%.而对照分别是(69士17)%和(19.2士5.0).另有 学者应用Thrombosol4?低温保存血小板也得到相似的结 果?.说明添加Thrombosol后血小板可在4?保存且可改 善血小板的体外功能,降低细菌污染机会和延长保存时间. 22?常规保存下随时间延长,浓缩血小板血浆中IL-I~, IL-6,IL-8和TNF-a浓度逐渐上升].这些细胞因子由残留 的白细胞分泌,可导致非溶血性发热反应.Currie等]研究 Thrombosol对液态保存血小板中细胞因子水平和细菌生长 的影响.发现Thrombosol可显着降低22?保存血小板中 IL-6和IL-I~水平,这可能与Thrombosol影响白细胞谢 有关,确切机制还不清除.有人认为通过阻止单核细胞在血 小板保存袋表面粘附和激活,抑制细胞因子产生,主要与阿 米洛利有关[1.低滴度葡萄球菌培养发现.Thrombosol可 抑制细菌滴度随保存时间延长而升高].应用Thrombosol 4?保存血小板的IL-I~,IL-6和TNF-a水平均显着低于常 规保存血小板.而且随保存时间延长细菌培养的滴度无显着 变化],说明应用Thrombosol4?保存血小板可抑制来源于 白细胞的细胞因子堆积和细菌生长.从而减少细胞因子相关 1检测应用 的发热反应和发生输血相关的感染.Ferrer等【 Thrombosol液态保存血小板中IL.6,IL.8,TNF-a,TGF-~I 及补体C3a,C4a也得到同样的结果.所以Thrombosol4? 保存9d血小板具有与22?常规保存5d相当的体外功能和 活性.而且保存时间较长,发生非溶血性发热反应和脓毒血 ? 65? 症的风险较低. 4.2血小板冰冻保存Currie等最先用Thrombosol冰 冻保存血小板,研究其冰冻保护作用和减少冰冻保护剂的能 力.将单采血小板一8O?冰冻保存,分别用2%DMSO,2DMSO+Thrombosol或6DMSO作为冰冻保存剂.冻存1 周后复温,检测血小板体外回收率,园盘形细胞比例,ESC, HSR,ADP和胶原诱导聚集反应及P-选择素表达,结果 Thrombosol组血小板的这些检测指标均显着优于6DM- S0或2DMS0组;认为应用Thrombosol可提高冰冻血小 板的体外功能活性和降低DMSO浓度.DMSO浓度降至 2,复温后血小板可不经洗涤而直接回输],从而消除洗涤 的不良影响和简化处理步骤.DMS()浓度<2时冰冻血小 板的体外功能会下降?". Lozano等[9]进一步研究2DMSO+Thrombosol冰冻 保存血小板的体外功能,发现与6DMSO冻存血小板相 比,血小板膜表面糖蛋白(GP?b/?a,GPIba,CD63和P. 选择素)表达无显着差异,利托菌素和凝血酶诱导血小板聚 集反应及vWF和纤维蛋白原结合也无明显区别,认为2 DMSO+Thrombosol冻存血小板的体外功能和活性与6% DMSO冻存血小板相当.2000年Lozano等[1o]发现,与常规 6DMSO冻存血小板相比,2DMSO+Thrombosol冻存 血小板的GPIIb/IlIa,GPIba,GP?和纤维蛋白原的表达 水平显着较高,而P.选择素表达,FVa和vWF水平无显着 差异.应用Thrombosol冰冻保存血小板的胶原诱导聚集反 应显着增强.灌注试验中血小板血栓形成功能也显着增加. 电镜下Thrombosol冻存血小板的形态较好,膜损害和空泡 变性较常规组明显减轻.且胞浆中a颗粒丰富.因此从冻存 血小板的体外功能和结构来看2DMSO-4-Thrombosol的 冰冻保护作用与6DMSO相当或更好.Borzini等n5]应用 血小板功能仪(PAF100TM)检测Thrombosol冰冻保存 血小板的体外功能也得到相似的结果.所以.添加Throm- bosol冰冻保存血小板可改善血小板的体外功能,降低DM- SO浓度,降低回输毒性,避免回输前洗涤的不良影响和简化 操作步骤. 5Thrombosol冻存血小板的体内功能研究 虽然Thrombosol冻存血小板的体外功能较好,但是目 前没有一项体外功能指标可直接反应冻存血小板输注后的 体内功能,所以必须进行体内实验研究.1999年Currie 等进行了首次Thrombosol冻存血小板的健康人体内实 验.采集16位健康志愿者血小板用6DMSO或Throm- bosol+2DMSO作为冰冻保护剂一8O?保存7,10d.复温 洗涤标记Cr或"In后回输,结果Thrombosol冻存血小板 的体内回收率显着高于6DMSO冻存血小板(40.2:28. 8).血小板在循环中存活时间也较高(166.3h:152.1h). 说明Thrombosol冰冻保存血小板体内循环指标优于常规 6%DMSO冰冻保存血小板. ?66?中国输血杂志2005年2月第18卷第1期ChinJBlood— Tran—sfusion.Februry!!?!:: 6Thrombosol冻存血小板的临床应用 Pedrazzoli等3给14名化疗导致严重血小板减少症患 者输注自身冰冻保存血小板.应用Thrombosol+2DMSO 作为冰冻保护剂,一8O?直接降温或一180?液氮中计算机 控制降温,结果一80~C直接降温保存血小板回输后1h平均 CCI(2.7?1.4)×10./L低于标准(7.5×10./L).而且7例 中有6例需要额外输注异体血小板;计算机控制降温冰冻保 存血小板回输后1h平均CCI(9.2?5.4)×10./L大于标 准.而且7例中仅有1例额外输异体血小板.回输前,绝大 多数患者出现发热(>38?)和/或口腔及胃肠粘膜炎.处理 后无1例出现出血征象.认为Thrombosol冰冻保存血小板 可纠正化疗导致严重血小板减少,而且一180?液氮中计算 机控制降温保存血小板效果更显着,确定是控制降温的原因 还是一180?的效果还需进一步研究.重组人血小板生成素 可促进化疗患者血小板生成.Vadhan等u用Thrombosol +2DMS0冰冻保存化疗患者的自身血小板,在患者接受 大剂量化疗出现血小板减少症状时回输.发现自身冰冻血小 板的回输效果优于新鲜异体血小板,而且随保存时间的延长 (保存6个月)回输后CCI无显着变化.患者未出现任何输血 反应.总之,Thrombosol冻存血小板回输后体内回收率和 存活时间均较6DMSO冻存血小板显着增加.用于化疗引 起血小板减少患者自身血小板冻存,治疗效果好且可降低异 体输血的不良反应.但是外科止血效果还需进一步研究. 7结语 Thrombosol作为一种新型血小板保护剂.通过抑制血 小板特异的激活通路降低血小板保存损伤,提高保存血小板 质量.应用Thrombosol低温或冰冻保存血小板的体外功能 活性与目前常规保存血小板相当或更好.Thrombosol冻存 血小板的体内循环指标优于常规保存血小板.目前已有应用 于化疗导致血小板减少患者自身血小板冻存的报道,可显着 纠正血小板减少症状,但是还未有应用在外科止血方面的报 道,应用Thrombosol冰存血小板的体内止血功能和作用机 理还需要进一步深入探讨. 1 2 3 4 参考文献 ValeriCR.Cryopreservationofhumanplateletsandbonemar— rowandperipheralbloodtotipotentialmononuclearstemcells. 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