比例法检测结核分枝杆菌药物敏感性

比例法检测结核分枝杆菌药物敏感性 以下是操作步骤及结果判读： 将待测菌液制备成10-2g/L和10-4g/L菌悬液，分别用22SWG标准接种环蘸取1环（即0.01ml）的菌液，用划线法均匀接种至对照及含药培养基表面，应注意是菌液尽可能均匀分散于培养基斜面，最终的接种量为10-4mg和10-6mg。接种后培养基置于37℃培养，4周后读菌落数，计算耐药百分比，≤1%为敏感，＞1%为耐药。 耐药率（%）=含药培养基上菌落数/对照培养基上菌落数×100% 解读：将高倍稀释的菌液即10-4g/L菌悬液接种至生长对照管，也就是不含药物的培养管；将低倍稀释的菌液即10-2g/L菌悬液接种至含药管，只接种2管，仅此而已。不是生长对照管和含药管分别接种两种浓度的菌悬液，估计LZ是这样理解的吧。因接种的2种不同浓度的菌液在浓度上相差了100倍，最后理论上两种菌的菌落数也应该相差在100倍左右，但因为加入了药物，所以如果菌是对所测药物敏感，那菌落数比例肯定是小于1/100，即耐药率<1%；如果为耐药菌，药物无法抑制菌落生长，相对的菌落数比例会大于1/100，耐药率>1%。 目前结核分枝杆菌复合群的药敏试验一线药物以比例法为金标准，是WHO制定公布的，而二线药物的金标准则以仪器法的MGIT960为金标准。但目前在国内还都以固体L-J培养基为主，MGIT960的费用高，在县级以下的地区应用显然是不现实的 每份标本只接种2只管：生长对照管和含药管，没有必要做双份的。如果是做了双份的，菌落数也不会相差太大，因为菌液是一样的，除非你的菌长了很长时间，老化或死亡的结核菌多，而活菌的数量过少；还有可能是你的培养基有问题，比如不是同一批号的，药物浓度有差别。结核菌药敏试验中菌龄是非常重要的，MGIT960的说明书中明确提出菌龄从肉眼在培养基上能观察到算起，生长不能超过14天，否则生长久了再做药敏试验就不准确了，特别是对吡嗪酰胺的药敏结果影响是非常大的。如果按照你的说法，同时做了双份的，两份结果相差很大，那就要重新再做一遍了。希望对你有所帮助。 7h10培养基调剂ph到5.5，加入12.5到800μg/ml的pza,同时设置一个未加pza的对照平板。将在7h9中培养2周的mtb约107-109cfu/ml.稀释10-2 和10-4之后接种10μl在固体培养基上。37度4周后统计10-2的菌落数计算mic。 800   10-2 400  10-2 200   10-2 100   10-2 50   10-2 25   10-2 12.5  10-2 0    10-4 OD600 = 0.1= 107 cfu /ml 计算耐药百分比，≤1%为敏感，＞1%为耐药。 耐药率（%）=含药培养基上菌落数/对照培养基上菌落数×100%