[word格式] 不同温度下精子保存液对黄颡鱼精子活力的影响
不同温度下精子保存液对黄颡鱼精子活力
的影响
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10?(总第149期)水利渔业2007年第27卷第1期
不同温度下精子保存液对黄颡鱼精子活力的影响
丁淑荃,万全,刘磊,边家荣,甘小顺,张汉勤
(安徽农业大学动物科技学院,安徽合肥230036;.安徽省安庆市石塘湖渔场246000)
摘要:以精子的活力为指标,对6种精子保存液在4~C和20-22~C状态下保存黄颗鱼精子的效果进行了
比较研究.结果表明:添加了葡萄糖的F保存液效果最好,精子的活力和寿命保持时间最长;在4~C条件下,
120h内可保持80%以上活力,寿命持续168h.在黄颡鱼人工繁殖中应用了5种精子保存液进行人工授精,
其中4种保存液可替代0.6%生理盐水.
关键词:黄颡鱼;精子;活力;保存液;温度
中国分类号:s961.2文献标识码:A文章编号:1003—1278(2007)Ol一0010—03
黄颡鱼(Pelteobagrusf~Ividraco)隶属鲇形目,兢科,黄
颡鱼属,其肉质细嫩,味道鲜美,没有肌间刺,已越来越受
到消费者的喜爱和欢迎.近年来,安徽省安庆,池州等地
区已经开始网箱试养和池塘养殖,但苗种的规模生产一
直未能很好解决,主要原因是雌鱼的怀卵量少,且雄鱼精
巢呈树枝状结构,催产后仍很难挤出精液,故通常做法是
杀雄鱼采精液,然后进行人工授精.大批量催产时,雌雄
鱼发情的时间很难控制同步,而且在人工授精过程中需
要杀鱼取出精巢,且将精巢研碎,时间十分仓促,造成受
精率低下,不利于规模生产,为了解决这一问题,笔者考
虑用鱼类精子的保存
以解决此问题,并在不同温度
下对精子在6种不同保存液中的活力作了观察研究,以
筛选出保存效果好的精子保存液,并在苗种生产的人工
授精中应用,而国内对黄颡鱼精子保存及活力的研究尚
未见报道,现将研究情况
如下.
1材料和方法
1.1亲本来源
材料鱼5月9Ft取自省级水产良种场安庆石塘湖渔
场黄颡鱼亲鱼蓄养池,亲鱼来源于长江安庆段所收集的
野生原种.在繁殖季节,选取体表无伤,无病,个体健康,
性成熟的雄鱼15尾,尾均重100,140g.
1+2保存液配制
按照鱼类精子保存的生理要求,参照有关资料…,配
制了A,F共6种精子保存液,具体配方成分见表1.
1.3黄颡鱼精子采集
采用人工催产的方法.使用的催产激素为DON和
LRH—A,两针注射,针距为20—24h.注射剂量:第1针
为DOM0.2mg+LRH—A22尾,第2针为DON1.0
,
1.2mg+LRH—A28,15尾,到达效应时间时,杀
死雄鱼.取出精巢放入碾钵中剪碎,研磨,然后放置冰箱
(4~C)备用.
1.4保存方法
收稿日期:2006—03—25
作者简介:丁淑荃,1969年生.女,安徽安庆人.实验师,主要
从事水产养殖实验教研工作.
精液分别用保存液A,F进行3,5,7倍稀释,放人保
存瓶中置于常温保存,重复1次置于冰箱4~C保存.保存
瓶为10mL可密封玻璃瓶,经洗涤,消毒,烘干.
表1精子保存液配方组成
保存液配方组成
NaC13.712g,KC11.39g,CaCI~0.144g,1gs04?
A7H200.153g,NaHCO30+21g,防腐荆0.3g,蒸馏水
500mL
NaC12.338g,KC11.864g,CaC120.278g,Mgso4?
B7H200.203g,NaHCO32.1g,防腐荆0.3g,蒸馏水
5O0m1.
丰原医用复方(18AA)氨基酸液(250mL)加NaC10.7
g,C6Hl2c6?H2O7+25g,防腐剂0.3g
C6Hl2C6?H200.0018mol/L,CaC120.006mol/L,
DKC10.0018mol/L,NaHCO30.025mol/L,青霉素8O
万单位/L,链霉素100万单位/L,蒸馏水1000mL
E柠檬酸钠1g,防腐剂0.3g,蒸馏水lOOmL
C6Hl2C6?H202.9g,柠檬酸钠1g,NaHCO30.2g,
„KC10.03g,防腐荆0.3g,蒸馏水100mL
1.5试验
在低温(4~C)和室温(20—22~C)2种保存条件下,对
6种精子保存液进行3,5,7倍的稀释后观察结果,对每种
保存液的最好效果之间进行比较以及低温与常温条件下
的效果进行比较.前12h每隔2h观察1次,然后12h
时观察1次,最后得出黄颡鱼精子活力在常温和低温条
件下随时间而变化的规律,确定最好保存液和最佳保存
时间.
1.6精子活力观察
用精子被激活后的活力(快速运动精子占总精子数
的百分比)为指标对保存效果进行
.观察时先将保
存有精子的保存液取出摇匀,然后用2mL的注射器抽出1
小滴置于计数框内,在显微镜10×40倍数下观察精子,观
察到精子后立即用水激活精子,观察其运动状况并记录:
“+++”表示100%精子快速运动;”++”表示80%以
上的精子快速运动;”+”表示50%精子快速运动;”+
一
“表示30%,10%精子快速运动;”一”表示全部死亡
或少量在原地振动.
1.7精子保存液在黄颡鱼苗种生产中的应用
2007年第27卷第1期水利渔业(总第149期)?11?
5月15—23日,在安庆石塘湖渔场黄颡鱼繁殖基地,对照比较.共做4个批次约450尾亲本.
錾要1,-2结果生理盐水进行人授精.将精巢取出剪碎后放入研钵研一一?
磨,/JnA不同的保存液,然后进行干法人工授精,将受精2.1黄颡鱼精子在6种保存液中低温和常温时的活力
卵粘附在附卵板上进行流水9呼化,并和生理盐水组进行在不同保存液中精子的运动情况及寿命见表2.
表2黄颡鱼精子在不同保存液中的运动情况及寿命
2.1.1保存液A在室温(20—22?E)条件下,5倍稀释
保存中,前4h精子活力很强,被激活后几乎100%的精子
在作快速运动;在6—8h活力下降趋势不大,激活后仍有
80%以上的精子在作快速运动;10—12h精子活力下降
明显,激活后只有50%的精子在作快速运动;24h时,只
有10%一30%的精子作快速运动;48h精子基本死亡或
少量在原地振动.
低温(4?)条件下,在7倍稀释保存中,前24h精子
活力很强,被激活的精子几乎100%在作快速运动,在72
h左右,精于被激活后仍有80%在作快速运动,120h仍然
有10%一30%的精子能快速运动.
2.1.2保存液B在室温(20—22?E)条件下,5倍稀释
保存中,前6h精子活力很强,被激活后几乎100%的精子
在作快速运动;在8—12h活力下降趋势不大,激活后仍
有80%以上的精子在作快速运动;在24h左右精子活力
下降明显,激活后只有50%的精子在作快速运动;48h
时,只有10%一30%的精子作快速运动;72h精子基本死
亡或少量在原地振动.
低温(4?)条件下,7倍稀释保存中,前12h精子活
力很强,被激活的精子几乎100%在作快速运动;在24—
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12?(总第149期)水利渔业2007年第27卷第1期
48h之问,精子被激活后仍有80%在作快速运动;72h精
子仍有10%,30%作快速运动.
2.1.3保存液c在室温(2O一22?)条件下,3,5,7倍
稀释保存效果一样.前4h精子活力很强,被激活后几乎
100%的精子在作快速运动;在6—8h活力下降趋势不
大,激活后仍有80%以上的精子在作快速运动;10—12h
精子活力下降明显,激活后只有50%的精子在作快速运
动;24h精子基本死亡或少量在原地振动.
低温(4~C)条件下,3,5,7倍稀释保存效果一样.前
6h精子活力很强,被激活的精子几乎100%在作快速运
动,在24h左右,精子被激活后仍有10%一30%在作快速
运动.
2.1.4保存液D在室温(2O一22?)条件下,5倍稀释
保存中,前12h精子活力很强,被激活后几乎100%的精
子在作快速运动;在24—72h活力下降趋势不大,激活后
仍有8O%以上的精子在作快速运动;在96—120h时,只
有10%30%的精子作快速运动;144h精子基本死亡或
少量在原地振动.
低温(4?)条件下,5倍稀释保存中,前24h精子活
力很强,被激活的精子几乎100%在作快速运动;168h精
子仍有10%一30%作快速运动.
2.1.5保存液E在室温(2O一22oC)条件下,3,5,7倍
稀释保存效果一样.前2h精子活力很强,被激活后几乎
100%的精子在作快速运动;在4—6h活力下降趋势不
大,激活后仍有80%以上的精子在作快速运动;在8—1O
h精子活力下降明显.激活后只有50%的精子在作快速
运动;12h时,只有10%一30%的精子作快速运动;24h
精子基本死亡或少量在原地振动.
低温(4?)条件下,5倍稀释保存效果最佳.前24h
精子活力很强,被激活的精子几乎100%在作快速运动;
96h精子仍有10%,30%作快速运动.
2.1.6保存液F在室温(20—22?)条件下,7倍稀释
保存中,前12h精子活力很强,被激活后几乎100%的精
子在作快速运动;在24~48h活力下降趋势不大,激活后
仍有80%以上的精子在作快速运动;在72h左右精子活
力下降明显,激活后只有50%的精子在作快速运动;96h
时,只有10%一30%的精子作快速运动;120h精子基本
死亡或少量在原地振动.
低温(4?)条件下,7倍稀释保存效果最佳.前72h
精子活力很强,被激活的精子几乎100%在作快速运动;
在96,120h之间,精子被激活后仍有80%在作快速运
动.
2.2精子保存液在人工授精中的应用
石塘湖黄颡鱼人工授精的生产结果统计见表3,共孵
化出黄颡鱼苗46万尾.
表3黄颡鱼人工授精受精率统计%
3讨论
3.1保存温度及稀释比例对保存效果的影响
4~C条件下,精子几乎100%能够作快速运动,保存时
间也延长,由此可见,低温的保存效果比室温好;且稀释
倍数也有影响,以5,7倍的稀释比例为好.这6种精子
保存液的效果以F保存液的7倍稀释最好,D保存液次
之,其次为E,再其次是A和B,c效果最差.在精子保存
液F中,室温条件和4~C条件下,均以7倍稀释保存效果
最好,室温条件下,48h内80%的精子能快速运动;4~C条
件下,72h内精子100%能快速运动,120h内精子80%能
快速运动,比室温下延长72h,最长保存时间为168h.
3.2精子保存液保存效果差异
从A液和B液的结果来看,无论是室温或4~C条件
下,保存效果相近,只是精子寿命A液稍长于B液.从2
种精子保存液的成分来看,都是由NaC1,KC1,CaC12,
MgC1,NaHCO组成,只是每种添加的份量有差异,保存
黄颡鱼精子效果并没有明显差异.两者的保存效果均不
佳.而连晋等运用此配方保存大银鱼精子,发现B液
的保存效果明显要优于A液,可见保存液对不同鱼类精
子的保存效果是可能存在差异的.
D液和F液是保存效果较好的两组,而且都加入了
葡萄糖,这表明添加葡萄糖可延长精子的保存时间.严
安生等对鲤,团头鲂的研究结果也表明,单糖对精子的
活力有影响.但D保存液中精子活力,寿命在室温和4?
条件下差异不大,大约都为72h;而F液则差别很大,两
者相差72h.分析原因可能是两者的防腐,抗菌素不一
样,D液中加入了青霉素和链霉素,很好的抑制了革兰氏
阳性菌和阴性菌,而F液的抑菌效果则不佳,可见在室温
状态下好的抑菌效果是很重要的.
c液中含有18种氨基酸,同时也加入了葡萄糖,但结
果表明在室温和低温条件下效果都很差,有效保存时间
仅8h,氨基酸液对黄颗鱼精子保存并未达到期望的延长
精子寿命的作用.
在E液中,配方最简单,只有柠檬酸钠,但结果发现
保存效果还不错,故也很适合在生产上运用.
3.3精子保存液在苗种生产中的效果和意义
从应用结果看,除保存液c外,保存液A,B,D,F在
生产中有较好的效果,且都是在室温下操作,操作时间长
的达2h,可以替代生理盐水进行人工授精操作,0.6%的
生理盐水和几种精子保存液的受精效果虽有差别,但不
是十分明显.本次生产应用在常温下操作,如生产单位
能购置冰箱或使用保温冰桶,使用A液,D液,E液,F液
配方,在精子保存72h内使用都能取得良好的效果.
参考文献:
[1]连晋,雷普勋.精子保存方法在大银鱼人工繁殖中
的应用研究[J].科学养鱼,2001,(1):34.
[2]严安生,等.鲤鱼与团头鲂精子生理生态特性的研
究.单糖和渗透压对精子活力的影响研究[J].淡水
渔业,1995,25(2):3—5.
(责任编辑万月华)