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[word格式] 不同温度下精子保存液对黄颡鱼精子活力的影响

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[word格式] 不同温度下精子保存液对黄颡鱼精子活力的影响[word格式] 不同温度下精子保存液对黄颡鱼精子活力的影响 不同温度下精子保存液对黄颡鱼精子活力 的影响 ? 10?(总第149期)水利渔业2007年第27卷第1期 不同温度下精子保存液对黄颡鱼精子活力的影响 丁淑荃,万全,刘磊,边家荣,甘小顺,张汉勤 (安徽农业大学动物科技学院,安徽合肥230036;.安徽省安庆市石塘湖渔场246000) 摘要:以精子的活力为指标,对6种精子保存液在4~C和20-22~C状态下保存黄颗鱼精子的效果进行了 比较研究.结果表明:添加了葡萄糖的F保存液效果最好,精子的活力和寿命保...
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[word格式] 不同温度下精子保存液对黄颡鱼精子活力的影响 不同温度下精子保存液对黄颡鱼精子活力 的影响 ? 10?(总第149期)水利渔业2007年第27卷第1期 不同温度下精子保存液对黄颡鱼精子活力的影响 丁淑荃,万全,刘磊,边家荣,甘小顺,张汉勤 (安徽农业大学动物科技学院,安徽合肥230036;.安徽省安庆市石塘湖渔场246000) 摘要:以精子的活力为指标,对6种精子保存液在4~C和20-22~C状态下保存黄颗鱼精子的效果进行了 比较研究.结果表明:添加了葡萄糖的F保存液效果最好,精子的活力和寿命保持时间最长;在4~C条件下, 120h内可保持80%以上活力,寿命持续168h.在黄颡鱼人工繁殖中应用了5种精子保存液进行人工授精, 其中4种保存液可替代0.6%生理盐水. 关键词:黄颡鱼;精子;活力;保存液;温度 中国分类号:s961.2文献标识码:A文章编号:1003—1278(2007)Ol一0010—03 黄颡鱼(Pelteobagrusf~Ividraco)隶属鲇形目,兢科,黄 颡鱼属,其肉质细嫩,味道鲜美,没有肌间刺,已越来越受 到消费者的喜爱和欢迎.近年来,安徽省安庆,池州等地 区已经开始网箱试养和池塘养殖,但苗种的规模生产一 直未能很好解决,主要原因是雌鱼的怀卵量少,且雄鱼精 巢呈树枝状结构,催产后仍很难挤出精液,故通常做法是 杀雄鱼采精液,然后进行人工授精.大批量催产时,雌雄 鱼发情的时间很难控制同步,而且在人工授精过程中需 要杀鱼取出精巢,且将精巢研碎,时间十分仓促,造成受 精率低下,不利于规模生产,为了解决这一问题,笔者考 虑用鱼类精子的保存以解决此问题,并在不同温度 下对精子在6种不同保存液中的活力作了观察研究,以 筛选出保存效果好的精子保存液,并在苗种生产的人工 授精中应用,而国内对黄颡鱼精子保存及活力的研究尚 未见报道,现将研究情况如下. 1材料和方法 1.1亲本来源 材料鱼5月9Ft取自省级水产良种场安庆石塘湖渔 场黄颡鱼亲鱼蓄养池,亲鱼来源于长江安庆段所收集的 野生原种.在繁殖季节,选取体表无伤,无病,个体健康, 性成熟的雄鱼15尾,尾均重100,140g. 1+2保存液配制 按照鱼类精子保存的生理要求,参照有关资料…,配 制了A,F共6种精子保存液,具体配方成分见表1. 1.3黄颡鱼精子采集 采用人工催产的方法.使用的催产激素为DON和 LRH—A,两针注射,针距为20—24h.注射剂量:第1针 为DOM0.2mg+LRH—A22尾,第2针为DON1.0 , 1.2mg+LRH—A28,15尾,到达效应时间时,杀 死雄鱼.取出精巢放入碾钵中剪碎,研磨,然后放置冰箱 (4~C)备用. 1.4保存方法 收稿日期:2006—03—25 作者简介:丁淑荃,1969年生.女,安徽安庆人.实验师,主要 从事水产养殖实验教研工作. 精液分别用保存液A,F进行3,5,7倍稀释,放人保 存瓶中置于常温保存,重复1次置于冰箱4~C保存.保存 瓶为10mL可密封玻璃瓶,经洗涤,消毒,烘干. 表1精子保存液配方组成 保存液配方组成 NaC13.712g,KC11.39g,CaCI~0.144g,1gs04? A7H200.153g,NaHCO30+21g,防腐荆0.3g,蒸馏水 500mL NaC12.338g,KC11.864g,CaC120.278g,Mgso4? B7H200.203g,NaHCO32.1g,防腐荆0.3g,蒸馏水 5O0m1. 丰原医用复方(18AA)氨基酸液(250mL)加NaC10.7 g,C6Hl2c6?H2O7+25g,防腐剂0.3g C6Hl2C6?H200.0018mol/L,CaC120.006mol/L, DKC10.0018mol/L,NaHCO30.025mol/L,青霉素8O 万单位/L,链霉素100万单位/L,蒸馏水1000mL E柠檬酸钠1g,防腐剂0.3g,蒸馏水lOOmL C6Hl2C6?H202.9g,柠檬酸钠1g,NaHCO30.2g, „KC10.03g,防腐荆0.3g,蒸馏水100mL 1.5试验 在低温(4~C)和室温(20—22~C)2种保存条件下,对 6种精子保存液进行3,5,7倍的稀释后观察结果,对每种 保存液的最好效果之间进行比较以及低温与常温条件下 的效果进行比较.前12h每隔2h观察1次,然后12h 时观察1次,最后得出黄颡鱼精子活力在常温和低温条 件下随时间而变化的规律,确定最好保存液和最佳保存 时间. 1.6精子活力观察 用精子被激活后的活力(快速运动精子占总精子数 的百分比)为指标对保存效果进行.观察时先将保 存有精子的保存液取出摇匀,然后用2mL的注射器抽出1 小滴置于计数框内,在显微镜10×40倍数下观察精子,观 察到精子后立即用水激活精子,观察其运动状况并记录: “+++”表示100%精子快速运动;”++”表示80%以 上的精子快速运动;”+”表示50%精子快速运动;”+ 一 “表示30%,10%精子快速运动;”一”表示全部死亡 或少量在原地振动. 1.7精子保存液在黄颡鱼苗种生产中的应用 2007年第27卷第1期水利渔业(总第149期)?11? 5月15—23日,在安庆石塘湖渔场黄颡鱼繁殖基地,对照比较.共做4个批次约450尾亲本. 錾要1,-2结果生理盐水进行人授精.将精巢取出剪碎后放入研钵研一一? 磨,/JnA不同的保存液,然后进行干法人工授精,将受精2.1黄颡鱼精子在6种保存液中低温和常温时的活力 卵粘附在附卵板上进行流水9呼化,并和生理盐水组进行在不同保存液中精子的运动情况及寿命见表2. 表2黄颡鱼精子在不同保存液中的运动情况及寿命 2.1.1保存液A在室温(20—22?E)条件下,5倍稀释 保存中,前4h精子活力很强,被激活后几乎100%的精子 在作快速运动;在6—8h活力下降趋势不大,激活后仍有 80%以上的精子在作快速运动;10—12h精子活力下降 明显,激活后只有50%的精子在作快速运动;24h时,只 有10%一30%的精子作快速运动;48h精子基本死亡或 少量在原地振动. 低温(4?)条件下,在7倍稀释保存中,前24h精子 活力很强,被激活的精子几乎100%在作快速运动,在72 h左右,精于被激活后仍有80%在作快速运动,120h仍然 有10%一30%的精子能快速运动. 2.1.2保存液B在室温(20—22?E)条件下,5倍稀释 保存中,前6h精子活力很强,被激活后几乎100%的精子 在作快速运动;在8—12h活力下降趋势不大,激活后仍 有80%以上的精子在作快速运动;在24h左右精子活力 下降明显,激活后只有50%的精子在作快速运动;48h 时,只有10%一30%的精子作快速运动;72h精子基本死 亡或少量在原地振动. 低温(4?)条件下,7倍稀释保存中,前12h精子活 力很强,被激活的精子几乎100%在作快速运动;在24— ? 12?(总第149期)水利渔业2007年第27卷第1期 48h之问,精子被激活后仍有80%在作快速运动;72h精 子仍有10%,30%作快速运动. 2.1.3保存液c在室温(2O一22?)条件下,3,5,7倍 稀释保存效果一样.前4h精子活力很强,被激活后几乎 100%的精子在作快速运动;在6—8h活力下降趋势不 大,激活后仍有80%以上的精子在作快速运动;10—12h 精子活力下降明显,激活后只有50%的精子在作快速运 动;24h精子基本死亡或少量在原地振动. 低温(4~C)条件下,3,5,7倍稀释保存效果一样.前 6h精子活力很强,被激活的精子几乎100%在作快速运 动,在24h左右,精子被激活后仍有10%一30%在作快速 运动. 2.1.4保存液D在室温(2O一22?)条件下,5倍稀释 保存中,前12h精子活力很强,被激活后几乎100%的精 子在作快速运动;在24—72h活力下降趋势不大,激活后 仍有8O%以上的精子在作快速运动;在96—120h时,只 有10%30%的精子作快速运动;144h精子基本死亡或 少量在原地振动. 低温(4?)条件下,5倍稀释保存中,前24h精子活 力很强,被激活的精子几乎100%在作快速运动;168h精 子仍有10%一30%作快速运动. 2.1.5保存液E在室温(2O一22oC)条件下,3,5,7倍 稀释保存效果一样.前2h精子活力很强,被激活后几乎 100%的精子在作快速运动;在4—6h活力下降趋势不 大,激活后仍有80%以上的精子在作快速运动;在8—1O h精子活力下降明显.激活后只有50%的精子在作快速 运动;12h时,只有10%一30%的精子作快速运动;24h 精子基本死亡或少量在原地振动. 低温(4?)条件下,5倍稀释保存效果最佳.前24h 精子活力很强,被激活的精子几乎100%在作快速运动; 96h精子仍有10%,30%作快速运动. 2.1.6保存液F在室温(20—22?)条件下,7倍稀释 保存中,前12h精子活力很强,被激活后几乎100%的精 子在作快速运动;在24~48h活力下降趋势不大,激活后 仍有80%以上的精子在作快速运动;在72h左右精子活 力下降明显,激活后只有50%的精子在作快速运动;96h 时,只有10%一30%的精子作快速运动;120h精子基本 死亡或少量在原地振动. 低温(4?)条件下,7倍稀释保存效果最佳.前72h 精子活力很强,被激活的精子几乎100%在作快速运动; 在96,120h之间,精子被激活后仍有80%在作快速运 动. 2.2精子保存液在人工授精中的应用 石塘湖黄颡鱼人工授精的生产结果统计见表3,共孵 化出黄颡鱼苗46万尾. 表3黄颡鱼人工授精受精率统计% 3讨论 3.1保存温度及稀释比例对保存效果的影响 4~C条件下,精子几乎100%能够作快速运动,保存时 间也延长,由此可见,低温的保存效果比室温好;且稀释 倍数也有影响,以5,7倍的稀释比例为好.这6种精子 保存液的效果以F保存液的7倍稀释最好,D保存液次 之,其次为E,再其次是A和B,c效果最差.在精子保存 液F中,室温条件和4~C条件下,均以7倍稀释保存效果 最好,室温条件下,48h内80%的精子能快速运动;4~C条 件下,72h内精子100%能快速运动,120h内精子80%能 快速运动,比室温下延长72h,最长保存时间为168h. 3.2精子保存液保存效果差异 从A液和B液的结果来看,无论是室温或4~C条件 下,保存效果相近,只是精子寿命A液稍长于B液.从2 种精子保存液的成分来看,都是由NaC1,KC1,CaC12, MgC1,NaHCO组成,只是每种添加的份量有差异,保存 黄颡鱼精子效果并没有明显差异.两者的保存效果均不 佳.而连晋等运用此配方保存大银鱼精子,发现B液 的保存效果明显要优于A液,可见保存液对不同鱼类精 子的保存效果是可能存在差异的. D液和F液是保存效果较好的两组,而且都加入了 葡萄糖,这表明添加葡萄糖可延长精子的保存时间.严 安生等对鲤,团头鲂的研究结果也表明,单糖对精子的 活力有影响.但D保存液中精子活力,寿命在室温和4? 条件下差异不大,大约都为72h;而F液则差别很大,两 者相差72h.分析原因可能是两者的防腐,抗菌素不一 样,D液中加入了青霉素和链霉素,很好的抑制了革兰氏 阳性菌和阴性菌,而F液的抑菌效果则不佳,可见在室温 状态下好的抑菌效果是很重要的. c液中含有18种氨基酸,同时也加入了葡萄糖,但结 果表明在室温和低温条件下效果都很差,有效保存时间 仅8h,氨基酸液对黄颗鱼精子保存并未达到期望的延长 精子寿命的作用. 在E液中,配方最简单,只有柠檬酸钠,但结果发现 保存效果还不错,故也很适合在生产上运用. 3.3精子保存液在苗种生产中的效果和意义 从应用结果看,除保存液c外,保存液A,B,D,F在 生产中有较好的效果,且都是在室温下操作,操作时间长 的达2h,可以替代生理盐水进行人工授精操作,0.6%的 生理盐水和几种精子保存液的受精效果虽有差别,但不 是十分明显.本次生产应用在常温下操作,如生产单位 能购置冰箱或使用保温冰桶,使用A液,D液,E液,F液 配方,在精子保存72h内使用都能取得良好的效果. 参考文献: [1]连晋,雷普勋.精子保存方法在大银鱼人工繁殖中 的应用研究[J].科学养鱼,2001,(1):34. [2]严安生,等.鲤鱼与团头鲂精子生理生态特性的研 究.单糖和渗透压对精子活力的影响研究[J].淡水 渔业,1995,25(2):3—5. (责任编辑万月华)
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