溪黄草多糖含量测定与活性研究

溪黄草多糖含量测定与活性研究 溪黄草多糖含量测定与活性研究 【摘要】 目的研究溪黄草多糖含量及其对羟自由基的清除作用和抑 菌作用。从溪黄草中提取精制多糖，测定出溪黄草多糖对葡萄糖 的换算因子，用蒽酮 硫酸法比色测定计算多糖的含量;采用Fenton 反应体系为模型，研究多糖对羟自由基的抑制作用;采用滤纸片法研 究多糖的体外抑菌作用。结果溪黄草多糖含量为4.18%，重现性、稳 定性和回收率较好;活性测试结果表明溪黄草多糖对羟自由基有较好 的清除作用，对金黄色葡萄球菌和枯草杆菌有一定的抑菌效果。结论 溪黄草多糖含量测定方法简单可行，具有一定清除自由基和抑菌活 性。 【关键词】 溪黄草;多糖;含量测定;羟自由基;抑菌作用 Abstract:ObjectiveTo study the content of polysaccharide from Rabdosia serra (Maxim.) Hara and its effect on hydroxyl free radical and anti bacteriostatic effect. MethodsPolysaccharide was extracted from Rabdosia serra (Maxim.) Hara, and its content was measured by way of anthronesulphuric acid. Its inhibitory effect on hydroxyl free radical was studied by Fenton reaction system as a model. Its anti bacteriostatic effect was also studied.ResultsThe research showed that polysaccharide content of Rabdosia serra (Maxim.) Hara reached 4.18%. It had inhibitory effect on hydroxyl free radical， staphylococcus aureus and B. subtili. ConclusionThe method of measuring polysaccharide content is simple and reliable. The polysaccharide has some activities. Key words:Rabdosia serra (Maxim.) Hara; Polysaccharide; Content determination; Hydroxyl free radical; Anti bacteriostatic effect 溪黄草Rabdosia serra (Maxim.) Hara为 唇形科香茶菜属植物，是一种多年生小草本。具有清热袪湿、凉血散 淤之功效，民间用于治疗急性肝炎、急性胆囊炎、跌打淤肿等症,1,。 多糖是一类免疫活性物质，具有抗菌、抗病毒、抗寄生虫、抗肿瘤、 抗辐射、抗衰老等作用,2,5,。目前对溪黄草多糖的研究未见报道。 本文建立石油醚去脂 80%乙醇去杂 热水提取 氯仿、正丁醇去蛋白质 活性炭去色素 乙醇沉淀的提取工艺，从溪黄草中提取多糖，测得溪黄草多糖对葡萄糖的换算因子，用蒽酮 硫酸比色法测定并计算出溪黄草多糖含量，根据实验条件研究了其对羟自由基的清除作用和体外抑菌作用，期望为肇庆山区中药材的综合开发利用提供一些参考。 1 器材 1.1 仪器DJ 10A倾倒式粉碎机、A2004N和FA2004N电子天平、RE 52AA旋转式蒸发器、HH-4型数显恒温水浴锅、低温冰柜、脂肪抽出装置、电热恒温真空干燥箱、752分光光度计、UVProbe 2550型紫外可见光光度计、电热手提压力蒸气消毒器、水式热恒温培养箱。 1.2 材料溪黄草购于肇庆中药材市场;大肠杆菌(Escherichia coil)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、金黄色葡萄球菌(Stapphy locacus aureus)、黑曲霉(Aspergillus niger)、酵母菌(Yeast fungus)均由肇庆学院生物学系微生物室提供。(细菌于牛肉膏蛋白胨培养基上活化(37?，24 h);霉菌于查氏培养基上活化(28?，48 h);酵母菌于无菌水中活化(28?，4 h)。 1.3 试剂蒽酮、浓硫酸、硫脲、水杨酸、过氧化氢、硫酸亚铁、无水乙醇、丙醇、石油醚、乙醚、氯仿、正丁醇等为国产纯。 2 方法与结果 2.1 溪黄草多糖的提取与精制称取溪黄草粉末60 g，置脂肪抽出装置中，加入石油醚(60,90?)250 ml，回流脱脂。滤渣挥干溶剂后，加入80%乙醇回流提取2次(1.5 h/次)。将滤渣挥干溶剂后加蒸馏水400 ml，回流提取1 h。取滤液，滤渣再加蒸馏水300 ml提1次，将两次所得滤液合并，减压浓缩至一定体积。加入氯仿 正丁醇液(4?1)轻摇，静置取多次，除去蛋白质。水溶液中加入适量活性碳60?保温30 min，过滤，滤液冷却后加入乙醇，使乙醇浓度达85%，放置4?冰箱中过夜。抽滤，沉淀依次用95%乙醇、丙醇、乙醚各洗3次，真空干燥至恒重，即得精制溪黄草多糖，密封保存备用。 2.2 样品中溪黄草多糖含量测定 2.2.1 溶液的配制精密称取105?干燥至恒重的葡萄糖标准品0.200 0 g，置100 ml容量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度;摇匀，制成2.00 0 mg/ml的标准溶液，然后分别移取0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 ml标准溶液。置于10 ml容量瓶中，以蒸馏水定容至刻度，摇匀、配成系列标准溶 液。 2.2.2 蒽酮 硫酸试液的配制称取0.200 0 g蒽酮和1.00 0 g硫脲，加入100 ml浓硫酸，置于棕色瓶中，混合摇匀至暗处备用(现配现用)。 2.2.3 标准曲线的绘制分别准确移取系列标准溶液1 ml于具塞试管中(各平行3份)，以1 ml蒸馏水作空白，各加入5 ml蒽酮试剂(立即摇匀，置冰水浴中)，加完后一起沸水浴8 min，取出流水冷却，室温静置10 min，于620 nm处测定吸光值，以吸光值(A)对葡萄糖浓度(C)作回归处理，得回归方程:A=3.359C,0.011 19，r=0.999 8。