体外受精-胚胎移植中卵子及胚胎质量对生化妊娠的影响

体外受精-胚胎移植中卵子及胚胎质量对生化妊娠的影响 体外受精-胚胎移植中卵子及胚胎质量对生 化妊娠的影响 . 2496.广东医兰2010,平10月第31卷第19期 GuangdongMedicalJournalOct.2010,Vo1.31,No.19 oneserumlevelsduringthefollicularphaseofthemenstrualcycle originatefromthecrosstalkbetweentheovariesandtheadrenal codex[J].HumReprod,2002,17(4):933—939. [8]ELDARGEVAT,MARGALIOTHEJ,BROOKSB,eta1.The originofserumprogesteroneduringthefollicularphaseof menotropin—stimulatedcycles[Jj.HumReprod,1998,13(1): 9一l4. [9]TANGY,GONGF,LING,eta1.Early"follicularprogesterone concentrationsandinvitrofertilizationpregnancyoutcomes[J] FenilSteril,2007,87(4):991—994. [10]SIMSJA,SELTMANHJ,MUASHERSJ.Earlyfollicularriseof serumprogesteroneconcentrationinresponsetoaflare—upeffect ofgonadotrophin——releasinghormoneagonistimpairsfollicularre? cruitmentforin—vitrofertilization[J].HamReprod,1994,9 体外受精一胚胎移植中卵子及胚胎质量对 生化妊娠的影响 林蕾,全松,陈雷宁,李红 广东省佛山市妇幼保健院产科(528000);2南方医科大学南方医院妇产科生殖医学 中心(广州510515) 【摘要】目的探讨体外受精一胚胎移植(IVF—ET)治疗中卵子,胚胎质量对生化妊 娠的影响.回 顾性分析南方医院生殖中心行IVF—ET治疗过程中发生生化妊娠的94例(生化 妊娠组)和获得单胚胎种植单胎 妊娠分娩的】77例患者(对照组)的临床资料,对两纽的卵子和胚胎质量进行比较.结果生化妊娠组患者年龄 t>35岁患者的比例高于对照组(P<0.05);获卵数及成熟卵子数低于对照组(P<0.05);两组获卵率差异无统计 学意义(P>0.05),但成熟卵子率生化妊娠组明显低于对照组(P<0.05);生化妊娠组出现胞浆颗粒化,极体碎 裂,卵周隙增大的卵子及出现滑面内质网等异常形态的卵子率明显高于对照组,而正常形态卵子率低于对照组. 但两组获得的优质胚胎数和移植胚胎质量评分比较差异无统计学意义.结论IVF—ET中卵子质量下降影响胚 胎质量,是生化妊娠发生的重要原因,改善卵子,胚胎质量可能是降低IVF—ET生化妊娠发生率,提高IVF临床妊 娠率的有效手段. 【关键词】体外受精一胚胎移植;生化妊娠;卵子质量;胚胎质量 随着体外受精一胚胎移植(IVF—ET)技术的发展 和成熟,其妊娠率得到了很大的提高,IVF—ET作为治 疗不孕症的一个有效手段已得到了广泛的应用.但近 年来,多数生殖中心的IVF成功率徘徊在40%左右,其 中不少为生化妊娠.文献报道生化妊娠在IVF中发生 率为12%,30%…,生化妊娠发生的原因目前尚不清 楚,本文旨在分析IVF—ET治疗中卵子和胚胎质量对 生化妊娠周期的影响,探讨与生化妊娠相关的因素以 提高抱婴率. 1资料与方法 1.1一般资料回顾性分析2003年1月至2008年4 月在南方医院生殖中心行IVF—ET治疗过程中首次发 生生化妊娠的患者的临床资料.共105个生化妊娠周 期,其中11例患者在随后的冷冻胚胎移植周期获得临 床妊娠,其余94例患者归为"生化妊娠组".同时按 1:2比例随机选取同期IVF—ET治疗获得单胚胎种植 ~2006--2009在南方医科大学攻读硕士学位 ?通信作者 单胎足月妊娠的患者177个周期作为对照组. 1.2控制性超促排卵降调方案采用黄体中期 长方案,拮抗剂方案,短方案或者直接促排卵方案.促 性腺激素(Gn)行控制性促排卵,启动剂量的大小基于 对患者卵巢储备的判断,B超监测卵泡发育,根据患者 具体情况调整Gn剂量,当3个卵泡直径达16mm以上 时注射绒毛促性腺激素(HCG)5000,10000IU,于注 射HCG后34,36h取卵.根据男方精液情况选择 IVF或ICSI授精. 1.3卵子质量评估对符合ICSI适应证者在取卵后 4,6h去除颗粒细胞以暴露卵子,观察卵子形态以评 估其成熟度.同时观察M?期卵子胞浆内外有无异常 形态出现,将胞质颗粒细小,分布均一,无发黑,胞浆内 无坏死区,空泡,折光小体(reticulumincidence,RB), 滑面内质网(smoothendoplasmicreticulum,SER)等内 容物,第一极体光滑,完整,呈圆形或椭圆形,透明带及 卵周隙正常的成熟卵子定义为正常形态卵子. 1.4胚胎形态观察与评分于授精16,20h观察所 有卵子的授精情况及胚胎原核期形态.第3天观察卵 一一,一一一一一一一一一,一一一一一一一一,一,一一一一一一,一一一 一一一一一一一一一一一一,,一 广东医学2010年l0月第31卷第19期 GuangdongMedicalJournalOct.2010,Vo1.31,No.19 裂期胚胎形态,将卯裂球数为7,8,碎片比例?20%, 卵裂球无大小差异的胚胎定义为优质胚胎;将碎片比 例<5%,卵裂球无大小差异的胚胎定义为I级胚胎; 根据参考文献[4]的研究结果对所移植的胚胎进行原 核期和D3卵裂期综合评分. 1.5胚胎移植,黄体支持和随访胚胎培养3d后移 植,移植后给予黄体酮40mg/d或联合戊酚雌二醇 6mg/d支持黄体功能.胚胎移植后14d测定血清B— HCG,B—HCG超过参考值的2倍为阳性,阳性者在移 植后第28天行阴道B超检查,若阴道B超未见孕囊且 复查血清B—HCG升高不明显或下降者,为生化妊 娠;探及单个孕囊并见胎心搏动者为单胚胎种植单 胎妊娠,由专人随访直至胎儿娩出. 1.6统计学方法用SPSS13.0统计软件,率的比较 采用)c检验,设双测检验. 2结果 2.1一般情况比较生化妊娠组与对照组患者的一 般情况见l,因两组女方平均年龄比较P值接近 0.05,将患者按年龄分为3组.生化妊娠组年龄?35 岁的患者构成比明显高于对照组(Z=一2.802,P: 0.005).生化妊娠组不孕原因主要为女方因素,共64 例(68.1%),男方因素11例(11.7%),男女双方因素 19例(20.2%).其中合并子宫内膜异位症的患者有 13例(13.8%),合并PCOS的有7例(7.4%).同一对 夫妇可同时合并有多个不孕因素.原发与继发不孕所 占比例分别为36.2%和63.8%.两组间不孕原因差 异无统计学意义(P>0.05). 表1两组年龄和一般情况比较 ? 2497? 2.2两组卵子质量比较获卵数,成熟卵子数,生化 妊娠组明显少于对照组,获卵率组间差异无统计学意 义,但成熟M?卵子率生化妊娠组明显低于对照组,比 较差异有统计学意义(P<0.05).生化妊娠组中有28 个周期行ICSI或IVF+ICSI授精,共有222个卵子行 ICSI.对照组有70个周期行ICSI或IVF+ICSI授精,共 有586个卵子行IcsI.生化妊娠组正常形态卵子率明显 低于对照组,极体异常率,卵周隙异常率,颗粒异常率, SER出现率明显高于对照组(P<0.05).见表2. 表2两组卵子质量比较 2.3两组胚胎质量比较生化妊娠组移植胚胎数多 于对照组(P<0.05),而优质胚胎获得率,移植胚胎质 量评分等比较两组间差异无统计学意义(P>0.05). 见表3. 表3两组胚胎质量比较 3讨论 卵子质量和胚胎质量是影响IVF—ET结局的重要 因素,是胚胎着床和胚胎进一步发育的必要条件.IVF 周期中所获得的卵子的质量则受到女性患者的年龄, 超促排卵方案及卵子生长的微环境等因素的影响. 3.1卵子质量与生化妊娠的关系本研究发现生化 妊娠组的获卵数和M?期成熟卵子数较对照组少,获 卵率两组间差异无统计学意义,但生化妊娠组成熟 M?卵子率明显降低.生化妊娠组的女方平均年龄为 (32.5?4.6)岁,对照组为(31.2?4.1)岁,差异无统 计学意义(Z=一I.934,P=0.053).然而,将患者按 . 2498.广东医学2010年10月第31卷第19期 GuangdongMedicalJournalOct.2010,Vo1.31,No.19 年龄分组后发现,生化妊娠组年龄i>35岁患者的构成 比明显高于对照组,分别为36.2%和21.5%,比较差 异有统计学意义(Z=一2.802,P=0.005).年龄越大 胚胎质量越差已无争议,目前认为高龄妇女妊娠率降 低的主要原因是卵子质量的改变,年龄与卵细胞染色 体非整倍体发生率呈正相关.关于女性年龄与其卵细 胞非整倍体相关性的原因尚不清楚,可能与高龄女性 卵细胞线粒体,纺锤体老化和同源染色体不分离,姐妹 染色单体的过早分离有关.行ICSI前,需用透明质 酸酶去除卵母细胞周围的颗粒细胞,卵丘细胞,冠细 胞,暴露裸露的卵子,此时可行卵子的形态学观察.目 前最常用的无创的卵子质量评估方法主要是以形态学 特征为的.对行ICSI的卵子形态的观察发现,生 化妊娠组出现胞浆颗粒化,极体碎裂,卵周隙增大的卵 子及出现SER等异常形态的卵子率明显高于对照组. YAKIN等研究发现异常形态卵子发育而来的胚胎 囊胚形成率明显降低.而VANBLERKOM等对异常 形态卵子进行染色体分析,发现其非整倍体比例升高, 推测这些异常形态出现于卵子发育和成熟的过程中, 可能是减数分裂和能量代谢异常的结果,与卵子质量 有关.生化妊娠组成熟卵子率和正常形态卵子率降 低,提示卵子质量下降是生化妊娠发生的重要原因. 卵子质量下降主要体现在细胞成熟度降低,异常形态 的卵子出现率增高,进而导致胚胎质量降低. 3.2胚胎质量与生化妊娠的关系胚胎质量的 方法很多,目前临床上主要是通过胚胎的形态学表现 来评价胚胎质量.IVF—ET通常选择取卵后第3天即 卯裂期的胚胎进行移植.早期已有学者分别建立了原 核期,卵裂期的胚胎质量评分.近年来,又有学者提出 原核期与卵裂期综合评分,综合考虑了原核期和卵 裂期胚胎形态及发育阶段的影响,改良了胚胎质量评 分标准.本研究中评价胚胎质量的指标如正常受精 率,卵裂率,优质胚胎形成率,生化妊娠组与对照组之 问均差异无统计学意义(P>0.05).总体胚胎的质量 与实际移植胚胎的质量并不总是一致的,实际移植胚 胎的质量才是决定着床率的关键.因此,本研究中,对 移植胚胎进行了原核期和D3卵裂期形态综合评分,结 果显示生化妊娠组与对照组移植胚胎的原核期和D3 卵裂期形态综合评分比较差异无统计学意义.生化妊 娠组与对照组至少移植1个I级胚胎率,也差异无统 汁学意义.通过胚胎形态学表现来评价胚胎质量未发 现明显差异,但胚胎着床能力及妊娠结局却完全不同, 说明着床前胚胎在形态上和发育潜能方面存在很大差 异.因此,如何评价胚胎发育潜能选择优质胚胎移植 是改善胚胎着床率,降低多胎妊娠率的关键环节.胚 胎发育潜能受多方面的影响,不能将形态学指标作为 选择移植胚胎的唯一指标.从先前两组卵子质量比较 的差异推测,其卵子衍生的胚胎的质量差异可能是影 响妊娠结局的重要原因.许多研究已证实胚胎染色体 异常(主要是非整倍体)是反映胚胎质量的主要内容, 胚胎形态学表现并不能完全反映胚胎的染色体状态, 也不能很好地预测胚胎发育潜能.形态学表现为优质 胚胎的染色体异常发生率也高达25%i9]. 生化妊娠主要是因胚胎着床过程已经开始但未能 完成,其发生机制目前仍不清楚.本研究认为卵子 质量下降是生化妊娠发生的重要原因,卵子质量直接 影响胚胎质量,从而影响妊娠的结局.植入前遗传学 筛查(preimplantationgeneticscreening,PGS)可保证染 色体正常的卵子用于授精或植入整倍体的胚胎.改善 卵子,胚胎质量以及PGS的应用可能是降低IVF—ET 生化妊娠发生率的有效手段,授精前对卵子形态的准 确评价也可以作为胚胎移植时选择胚胎的依据.当 然,要明确导致IVF—ET治疗后生化妊娠发生的确切 原因,降低其发生率,还需要进一步研究和探索. 参考文献 [1]SIMONC,LANDERASJ,ZUZUARREGU1JL,eta1.Ear1)' pregnancylossesininvitrofertilizationandoocytedonation[J]. 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