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[知识]API 20E 肠杆菌和其它革兰氏阴性杆菌鉴定系统

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[知识]API 20E 肠杆菌和其它革兰氏阴性杆菌鉴定系统[知识]API 20E 肠杆菌和其它革兰氏阴性杆菌鉴定系统 API 20E 肠杆菌和其它革兰氏阴性杆菌鉴定系统 API 20E 肠杆菌和其它革兰氏阴性杆菌鉴定系统-技术支持-上海长源科学技术有限公司 当前位置:首页>>技术支持>> API 20E 肠杆菌和其它革兰氏阴性杆菌鉴定系统 API 20E 肠杆菌和其它革兰氏阴性杆菌鉴定系统 文章出处:长源科技 发布时间:2005-08-10 API 20 E是肠杆菌科和其它G-杆菌的标准鉴定系统,包括23个标准化微型生化测试和鉴定资料库。可鉴定菌谱名录,请参考鉴定表。 原...
[知识]API 20E 肠杆菌和其它革兰氏阴性杆菌鉴定系统
[知识]API 20E 肠杆菌和其它革兰氏阴性杆菌鉴定系统 API 20E 肠杆菌和其它革兰氏阴性杆菌鉴定系统 API 20E 肠杆菌和其它革兰氏阴性杆菌鉴定系统-技术支持-上海长源科学技术有限公司 当前位置:首页>>技术支持>> API 20E 肠杆菌和其它革兰氏阴性杆菌鉴定系统 API 20E 肠杆菌和其它革兰氏阴性杆菌鉴定系统 文章出处:长源科技 发布时间:2005-08-10 API 20 E是肠杆菌科和其它G-杆菌的鉴定系统,包括23个标准化微型生化测试和鉴定资料库。可鉴定菌谱名录,请参考鉴定表。 原理 API 20 E试验条是由20个含干燥底物的小管所组成。这些测定管用细菌悬浮液接种。培养一定时间後,通过代谢作用产生颜色的变化,或是加入试剂後变色而观察其结果。 根据说明表判读反应,参照分析图索引和APILAB Plus软件得到鉴定结果。 试剂 一个ref. 20100(25测试)试剂盒包括: ,25条API 20 E试验条; ,25个培养盒; ,25张报告单 ,1个封口夹 ,1份API 20E操作说明 一个ref. 20160(100测试)试剂盒包括: ,100条API 20 E试验条 ,100个培养盒 ,100张报告单 ,1个封口来 ,1份API 20 E说明书 附加试剂(不包括在试剂盒内) ,NaCl 0.85% 悬浮液, 5 ml (Ref. 20230)或Suspension Medium县浮液,5 ml (Ref. 20150) ,API 20 E试剂盒 (Ref. 20120) (TDA,IND,VP 1,VP 2,NIT 1,NIT 2 和OX)或单一附加试剂: TDA (Ref. 70400) JAMES(Ref. 70540) VP 1(Ref. 70420) VP 2 (Ref. 70430) NIT 1 (Ref. 70440) NIT 2 (Ref. 70450) OX (Ref. 70460) ,Zn试剂 (Ref. 70380) ,石腊油 (Ref. 70100) ,API专用一次性加样管 (Ref. 70250) ,API LAB PLUS鉴定结果分析软件 ,附加试剂安瓿架 (Ref. 70200) 必要时,需要以下附加试剂 API OF Medium (Ref. 50110) ,测定其发酵型或氧化型代谢 作用; API M Medium (Ref. 51020) ,测定兼性厌氧细菌 的运动性。 所需一般实验室设备 ,培养箱(35~37?) ,冰箱 ,本生煤气喷灯或酒精灯 ,记号笔 培养基和试剂成份 NaCl 0.85% 培养基5ml or悬浮基物5ml NaCl 8.5g 无离子水 1000ml 无离子水 TDA试剂 5ml Fecl3 3.4g H2O 加至 100ml JAMES试剂 5ml J 2183化合物 (保密) 0.5g HCl 1N 加至100ml S24/25: 避免接触皮肤和眼.如与眼接触, 必须立即用水冲洗至少10分钟。如与皮肤接触,用肥皂洗和用水冲 洗。 IND试剂 5ml 对二苯氨基苯甲醛 5g HCL 9.25g H2O 15.75ml 异戊醇 75ml 危害 R10: 可燃 R20: 吸入伤害 S24/25:避免皮肤和眼接触 VP 1试剂 5ml KOH 40g H2O 100ml 有毒性 R35: 引起严重伤害. S2:避免儿童接触. S26:如接触眼睛,立即冲洗,做医疗处置. S27:.立即拿走沾染的衣物 S37/39: 戴手套,保护眼/脸 VP 2试剂 5ml a-奈酚 6g 乙醇 100ml 高度易燃 S7: 严密容器存放 S16: 远离火源,不能吸烟. NIT 1试剂 5ml 对氨基苯磺酸 0.4g 乙酸 30g H2O 70ml 具腐蚀性 R34:引起灼伤 S2:避免儿童接触 S23:避免吸入蒸气 S26:若与眼接触,即用水冲洗,并治疗处置. NIT 2试剂 5ml N, N-二甲基- 奈酶胺 0.6g 乙酸 30g H2O 70ml 具腐蚀性 R34:引起灼伤 S2:避免儿童接触 S23:不能吸入蒸气 S26:若与眼接触,即用水冲,并治疗处理. OX试剂 5ml 四甲基-对-苯撑二胺 1g 异戊醇 100ml 危害 R10:易燃. R20:吸入伤害. S24/25: 避免接触皮肤和眼 Zn试剂 10g 锌粉 易燃 R15: 若接触水可产生依然气体 R17: 在空气中可自燃 S7/8: 保存干燥密封的容器 S43: 若引起火, 使用粉末灭火器'不得使用水. 试验条的储存 试验条采用铝袋包装并附有干燥剂。在开启铝袋後,请使用封口夹(试剂盒已含有)封口,以保证试条的干燥。开启铝袋後,在2-8?环境下,试验条可享有10个月的有效期(或包装盒上的有效期,以较短时间为准)。 附加试剂的储存 附加试剂应储於黑暗2-8?环境下(除TDA, VP 1 及NIT 1可储於2-30?及Zn可储於8-30?)直至有效期。 当安瓿瓶打开後,所有试剂只有一个月有效期(或包装盒上的有效期,以较短时间为准)。 请小心记录开启安瓿的时间。 OX和JAMES试剂对光非常敏感:请用箔纸包裹里,只在使用时才从冰箱中取出,同时应避免长时间放至放室温中。 附加试剂的使用 在使用前,所有附加试剂需达到室温(20-30?) 1. API 20 E试剂盒: ,压下安瓿瓶盖直至和安瓿瓶尖接触。 ,垂直握住安瓿,用大拇指施加压力於瓶盖斜面以推断安瓿尖。 ,将安瓿瓶倒置,并保持垂直。 ,小心拧松瓶盖以滴出试剂。 2. TDA, VP 1, VP 2, NIT 1, NIT 2 和OX附加试剂(附有滴头的安瓿) ,根据"警告及留意"一栏所列打开一安瓿试剂。 ,滴出一滴试剂後小心盖上安瓿。 ,根据"试剂的储藏"一栏,储存试剂。 3. JAMES附加试剂(不附有滴头的安瓿) ,根据"警告及留意"一栏所列方法打开一安瓿JAMES附加试剂溶液。 ,使用干燥加样枪将全部溶瓶加入含有冻干成份的滴瓶中。 ,将滴头插入滴瓶。 ,小心关紧瓶盖。 ,摇动滴瓶。 ,等待5-10分钟直至所有有效成份溶解。 ,使用试剂後,拧紧瓶盖,根据"试剂的储藏"一栏,储存试剂。 4. Zn附加试剂 ,打开小瓶 ,取大约2-3mg Zn粉未,使用小刮铲将粉未加入反应小管. ,使用试剂後,拧紧瓶盖,根据"试剂的储藏"一栏,储存试剂。 警告及留意事项 只供体外诊断用。 合格检验科工作人员应采用无菌操作方法并防范带传染性物质。 不应用口吸取标本或试剂。 不应使用过期试剂。 由冰箱取出後,所有试剂需达室温(20-30?C)方能使用。 小心开启安瓿瓶: ,用手垂直握住安瓿瓶(白色瓶盖向上) ,尽量将瓶盖压下 ,用大拇指顶住瓶盖上斜面部份 ,向外施加压力直至瓶盖内瓶尖断裂 *无滴头安瓿:小心移开瓶盖 *附滴头安瓿:垂直倒置安瓿瓶,挤压瓶盖将所有试剂加入滴瓶 所有加样後产品应视之带有污染性,需小心处理。 所有病人标本和细菌培养均可能带有污染性,应跟据国际标准处理(NCCLS M29-72: CDC Manual Biosafety in Microbiological & Biomedical Laboraties, 1993) 在完成、判读後,所有标本,污染物及试条必须高温高压消毒,烧成灰或在丢弃前浸於消毒水内杀菌。 最後鉴定的结果需由合格微生物学家肯定,同时需考虑病史、标本来源、菌落及显微镜下生长形态、其他测试结果,例如药敏结果。 使用说明 所有细菌培养及标本需视为带有传染性,只有合格检验师方能操作无菌技术及遵守有关细菌操作注意事项(NCCLS M29-72, Protection of Laboratory Worers from Infections Diseases, Tranmitted by Blood, Body flumids, & Tissue - 2nd Edition; Tentative Guidelines及Biosefety in Microbiological & Biomedical Laboratories.HHS Publication No. CCDC) 93-8395, 3rd Edition (May 1993). 或本地。) 试验条的准备 准备一个培养盒(盘和盖子),倒入约5ml水於盘的蜂窝小凹中,造成一个湿室。 记菌株资料於盘的边沿部分。 从包装中取出试验条放到盘中。 进行Oxidase氧化酶检测: -在玻片上放上张滤纸片。 -在滤纸上滴一滴水。 -取一个菌落涂在滤纸上。 -加一滴OX试剂 -如於1至2分钟内呈现深紫色,则为阳性反应。 反应结果应记录於结果报告单上成为第21个测试。 注意:API 20 E鉴定菌谱不包括苛养菌,需采用特别步骤排除需特别营养/培养步骤的菌株。 接种物的制备 ,根据"警告及留意"一栏所列方法打开一安瓿NaCl 0.85% (5ml)或Suspension Medium (5ml)或使用无杂质无菌5ml盐水/蒸馏水。 ,以接种针从分离物的平板上挑取已分纯单个菌落至悬浮基物中。 ,仔细研匀以达到均一的细菌悬液 注意:大多数弧菌均嗜盐,如怀疑菌株为弧菌,请使用NaCl 0.85%(5ml) medium 悬浮液。 试验条的接种 用吸管将细菌悬液充满檬酸CIT、VP各GEL管; 其它管仅充满管部(不是杯部); ADH、LDC、URE、ODC和H2S,则用矿物油覆盖; 盖上盖子,孵育於35~37? 18~24小时。 於周未孵育:API 20 E的生化反应需於孵育18-24小时後判读,如无法进行试条需於温箱取出并置於2-8?直至可以进行判读。 判读试条 在35~37?培养18~24小时後,参考说 明表判读其结果; 记录由自发代谢作用而产生的结果於报告单上; 如果葡萄糖是阳性并且/或3个或3个以上测定是阳性的话:加试剂观察结果; -VP测定:各加1滴VP1和VP2试剂,至少等待10分钟,浅粉或红色表明阳性结果,记录於报告单。如浅粉红色在10至 12分钟内出现,判断结果为阴性。 -TDA测定:加一滴TDA试剂,深褐色为阳性反应,记录於报告单上。 -IDN测定:加一滴James试剂。反应立即发生:粉红色出现在整个反应应管者为阳性,记录於报告单上。或加一滴吲哚 试剂,等2分钟,出现红色环表明为阳性反应。 -NO2测定:各加一滴Nit 1 和Nit 2试剂於葡萄糖管内,待2~3分钟後,红色表示阳性,阴性反应(黄色)可能由於还 原至N2(有时还有气泡):加2-3mg锌粉到葡萄糖管,5分钟後,如果管保持黄色表示N2阳性记录於报告 单。如果测 定变粉红,这明是阴性;硝酸盐仍留管内,被锌粉还原。 此测试能有效帮助对革兰氏阴性,氧化酶阳性杆菌的鉴定。 注意:Nitrate还原及Indole测试需在最後进行,因为以上反应会产生氧体,影响其他反应判读。在加入有关试剂後,请小心勿调换培养盒。 如果萄萄糖是阴性,并且阳性测定的数目少於2个或等於2个,先不加试剂: -接种2个API OF培养基证葡萄糖的代谢类型; -划一个MacConkey平板; -接种1个API M培养基测定运动性或用显微镜直接观察; -重新培养24小时; -如上述那样加入试剂; -记录试验条和补充试验的结果於告单,参考说明表。 鉴定 ,用分析图形检索或APILAB Plus软件:所得反应的类型必须以数字化形式记录在报告单,每3个测定为一组,每个以1、2和4标明,在每组中,阳性反应以相应的数字相加,由API 20 E的20个测定可得一个7位数。氧化酶反应构其第21个反应,如阳性则为4。 有时,7位数检索编码还不足以区分菌株,需要进行一些补充试验: -NO3盐还原到亚硝酸盐(NO2); -亚硝酸盐还原到氮(N2); -运动性(MOB); -在MacConkey(McC)培养基上的生长; -葡萄糖氧化型(OF-O); -葡萄糖发酵型(OF-F)。 根据相同的原理,将相应的反应编码,则得到一个9个位数的编码。 举例: 5315173-57日勾维肠杆菌 查照分析图形索引和API LAB软件,查照/输入编号後,可得以下信息: -被鉴定出的种名; -鉴定百分数,T索引是由模式(典型)图形而得; -如有与鉴定相反的测定结果,一般可看该种的阳性反应%; -鉴定质量的评价; 废物处理 使用後,所有的安瓿,试验条和培养盒在处置之前都必须高压灭菌,烧成灰或浸泡於杀菌剂中。 局限性 ,API 20E鉴定系统能准确鉴定在鉴 定范围(请查阅鉴定表)内的菌种,但不能用於鉴定/排除鉴定范围 外的菌种。 ,由於API技术和传统技术的不同, 有可能出现不同生化反应结果。 ,所有沙门氏菌/沙雷氏菌鉴定需血 清鉴定确认。 质量控制 培养基、试验条和试剂在生产的不同阶段 都已进行严格的系统性质量控制。对愿意进行自我质量控制者,推荐 以标准菌株,所得结果如下: ONPGADHLDCODCCITH2SURETDAINDVPGELGLUMANINOSORRHASACMELAMYARANO2N2 1+-V-V-----+----------- 2++-++----+-++-+++++++- 3---+V+++--V+----V---+- 4+-+-+-V-V-V-++++++++++- 5+-++----+--++-++-+-++- 1. Stenotrophomonas maltophilia (嗜麦芽糖寡养单胞菌) ATCC51331 2.Enterobacter cloacae (阴沟肠杆 菌) ATCC13047 3.Proteus mirabilis (奇异变形杆 菌) ATCC35659 4.Klebsiella pneumoniae ssp pneumoniae (肺炎克雷伯菌) ATCC35657 5.Escherichia coli (大肠埃希氏菌) ATCC25922 ATCC: American Type Culture Collection, 12301 Parklawn Drive, Rockville, Maryland 20852, USA. Profile obtained after 24-48 hours of incubation for the strain ATCC 51331, using cultures grown on Trypcase Soy agar + blood Profile obtain after 18-24 hours of incubation for the other strains, using cultures grown on Trypcase Soy agar + blood Bacterial suspension prepared in NaCl 0.85% Medium API 20 E 生化反应表 试验底物反应/酶结 果 阴性阳性 ONPG邻硝基苯-半乳糖苷 b-半乳糖苷酶 无色黄(1) ADH精氨酸 精氨酸双水介酶 黄色 红/橙色(2) LDC 赖氨酸 赖氨酸脱羧酶 黄色 橙色 ODC 鸟氨酸 鸟氨酶脱羧 黄色 红/橙色(2) CIT 柠檬酸钠 柠檬酸利用 淡绿/黄 兰绿/兰(3) H2S 硫代硫酸钠 H2S产生 无色/微灰 黑色沉淀/细线 URE 脲素 脲酶 黄色 红/橙色 TDA 色氨酸 色氨酸脱氨酶 (TDA/立即) 黄色 深褐 IND 色氨酸 吲哚产生 (James试剂/立即或IND吲哚/2分钟) James 无色 淡绿/黄 IND 黄色 James 粉红 IND 红色环 VP 丙酮酸盐 3-羟基丁酮产生 乙酰甲基甲醇(VP 1 + 2 / 10分钟) 无色 粉红/红色 GEL Kohn明胶 明胶酶 黑色素不扩散 黑色素扩散 GLU 葡萄糖 发酵/氧化(4) 兰/兰绿 黄色 MAN 甘露醇 发酵/氧化(4) 兰/兰绿 黄色 INO 肌醇 发酵/氧化(4) 兰/兰绿 黄色 SOR 山梨醇 发酵/氧化(4) 兰/兰绿 黄色 RHA 鼠李糖 发酵/氧化(4) 兰/兰绿 黄色 SAC 蔗糖 发酵/氧化(4) 兰/兰绿 黄色 MEL密二糖 发酵/氧化(4) 兰/兰绿 黄色 AMY 苦杏仁苷 发酵/氧化(4) 兰/兰绿 黄色 ARA 阿拉伯糖 发酵/氧化(4) 兰/兰绿 黄色 OX 在滤纸上 细胞色素氧化酶 (OX / 1 - 2分钟) 无色 红色 NO3 - NO2 葡萄糖管 NO2产生还原到N2 (Nit 1+2 / 2-3分钟) 黄色紫色 (Zn / 5分钟) 红色 黄色 MOB API M或显微观察 运动性 不运动 运动 MaC MacConkey培养基 生长 无 有 OF-F OF-O 葡萄糖 (API OF) 发酵: 石腊油覆盖 氧化: 和空气接触 绿 绿 黄 黄 (1) 淡黄可考虑为阳性。 (2) 培养18-24小时後,橙色应判断为阴性。 (3) 在顶部判读(需氧)。 (4) 发酵始於管的下部,氧化始於管的上部。 (5) 10分钟後如出现淡粉红应判断为阴性。 [返回顶部?phorum Proxy list] [推荐好友]
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