【doc】质谱联用法分析尿液中7-氨基硝西泮

【doc】质谱联用法分析尿液中7-氨基硝西泮 质谱联用法分析尿液中7-氨基硝西泮 法医学杂志2007年6月第23卷第3期?199? 五氟丙酰衍生化一气相色谱/质谱联用法分析尿液中7一氨基 硝西泮 卓晓聪.谢瑜.褚建新 (1.杭州市萧山区公安分局,浙江杭州311200;2.浙江省人民检察院,浙江杭州310012) [摘要1目的用五氟丙酰衍生化一气相色谱/质谱联用法分析尿液中硝西泮的主要代谢物7一氨基硝西泮. 方法尿液经乙醚萃取后,用五氟丙酰酸酐(PFPA)进行衍生化.得到7一氨基硝西泮衍生化物的总离子流色 谱图和质谱图.结果根据7一氨基硝西泮衍生化物色谱的保留时间和质谱中主要特征离子的质荷比进行 定性分析;用7一氨基氟硝西泮做内标,以7一氨基硝西泮和内标衍生化物定量离子的色谱峰面积比与浓度 的关系进行定量分析.结论用五氟丙酰衍生化一GC/MS分析尿液中硝西泮的主要代谢物7一氨基硝西泮的 方法定性,定量灵敏准确.测定结果可应用于司法鉴定 『关键词1气相色谱一质谱联用法;五氟丙酰衍生化;尿液;硝西泮;7一氨基硝西泮 [中图分类号1DF795.1『文献标识码1A『文章编号11004—5619(2007)03—0199—02 Analysisof7-AminonitrazepaminUrinebyPentafluOrOprOpiOnylDerivatization— GasChromatography/MassSpectrometry ZHUOXiao-con~,XIEYu1,CHUJian-xin. . XiaoshanBranchofHangzhouPublicSecurityBureau,Hangzhou311200,China;2.Thepeo ple's ProcuratorateofZhejiangProvince,Hangzhou310012,China) Abstract:ObjectiveThispaperreposedanewmethodfortheanalysisof7-amnonitrazepam(7-ANIZ), themajormetaboliteofnitrazepaminurinebypentafluoropropionylderivatization-GC/MS.MethodsAfter urinesamplewereextractedwithethylether,theextractswerederivatizedwithpentafluoropropionic anhydride(PFPA),andthentotalioncurrentchromatograms(TIC)ofthederivativeswereacquired.Results Thequalitativeanalysisof7-ANIZcanbebuiltbytRandm/z;Theanalysisof7-ANIZcanbebuiltby internalstandardmethod.ConclusionTheanalyticalmethodofqualitativeandquantitativeanalysisof7一 ANIZwassensitiveandaccurate. Keywords:GC/MS;pentafluoro— propionylderivatization;urine;nitrazepam;7-amnonitrazepam 硝西泮在尿中的主要代谢物为7一氨基硝西泮 (7一amin0nitrazepam,简称7-ANIZ)?,其结构式如图1 fa1所示.硝西泮为抗焦虑药,其选择性作用于大脑边缘 系统,与中枢苯并二氮杂革受体结合,从而促进^y一氨 基丁酸的释放.促进突触传导功能,具有安定,镇静及 显着催眠作用闭,是国内常见的抗焦虑,催眠药物.也是 一 种受国际控制的镇静催眠药物网.除正常的临床应用 外.硝西泮也常被犯罪分子用于麻醉抢劫等案件中. 1实验部分 1.1试剂和材料 7一氨基硝西泮,7一氨基氟硝西泮(7-aminofluni— trazepam,简称7-AFLZ,结构式如图1(b)所示),均为 Hoffmann—LaRoche公司赠送.用甲醇配制成lO0~zg/mL 和lO~zg/mL工作液;五氟丙酰酸酐(PFPA),购自美国 Aldrich公司;pH9硼酸盐缓冲溶液:1mol/mL硼酸溶 [作者简介】卓晓聪(1981),男,湖北荆门人,助理工程师,主要 从事法医毒物分析研究,(电话)0521—82659836. 液,加lmol/L氢氧化钠溶液,调节pH至9;pill0.8碳 酸盐缓冲溶液:无水碳酸钠53.0g,碳酸氢钠42.0g,加 水至500mL:乙醚,正己烷均为分析纯试剂;实验用水 为重蒸馏水: 空白尿液:近期未服用任何药物的健康人所排泄 的新鲜尿液. H2N F 图17一氨基硝西泮(a)和7一氨基氟硝西泮(b,内标) 的化学结构式 1.2仪器及条件 气相色谱质谱联用仪:GCQf美国菲尼根公司). 色谱条件:BPX一515rex0.25mm熔融石英毛细管 柱,柱温,初温200oC保持1rain,以15~C/min升温至 ? 200? 280?,保持20min;汽化温度290?;载气He,线速度 40cm/s;不分流进样.0.75min后分流,分流比50:1. 质谱条件:EI电离源灯丝电流70A,全扫描方 式检测,扫描范围200,450amu,倍增器电压1500V. 1.3实验方法 lI3.1尿中7一ANIZ的提取 取尿液lmL于离心管中.加内标7-AFLZ适量, 加入pH9硼酸盐缓冲液0.5mL.加乙醚5mL.涡旋混合 5min,离心6min(离心半径6.5cm,2000r/min).取有机 相至具塞小锥形试管中.于40?水浴中挥发至0.5mL, 加正己烷0.2mL,再挥至0.2mL 1.3.2五氟丙酰(PFP)衍生化 在上述提取液中,加5L的五氟丙酰酸酐 (PFPA),60?下水浴加热30min,进行PFP衍生化反 应.对有机相进行GC/MS分析. 1.3I3GC/MS分析 定性分析采用全扫描方式.以保留时间和特征碎 片离子定性,定量分析采用选择离子监测方式.本实 验以7一AFLZ为内标,以7一ANIZ和7一AFLZ衍生化 物定量离子的色谱峰面积比与浓度的关系进行定量 分析. 2结果与讨论 2.1总离子流色谱图及7一ANIZ和7一AFLZ质谱图 7一ANIZ和7一AFLZ衍生化物的特征碎片离子, 定量离子和保留时间见l.它们的总离子流色谱图 见图2. 表l7-ANIZ和7-AFLZ衍生化物的特征 碎片离子,定量离子和保留时间 图2尿样添加7-ANIZ(1)和7-AFLZ(2) 衍生化物的总离子流色谱图 2.2检出限 取空白尿液lmL添加适量7-ANIZ.按1I3方法 进行测定,结果检出限LOD为2.0ng/mL(S/N=3). JournalofForensicMedicine,June2007,Vo1.23,No.3 2.3萃取条件的选择 文献l4.5j报道,尿中7一ANIZ的提取方法有液一液 萃取和固相萃取法,液一液萃取法操作简便迅速.有较 高的萃取率:固相萃取法的萃取率与液一液萃取相近, 但操作复杂,且固相萃取法的检出限与液一液萃取法 相近,表明固相萃取法并没有使得萃取液中的杂质较 液一液萃取法明显减少.故本研究采用液一液萃取法 进行尿中7一ANIZ的提取. 在GC和GC/MS方法中用于尿液和血液中苯二 氮草类药物及其代谢物的液一液萃取溶剂包括二氯甲 烷,(正己烷):(二氯甲烷)=7:3(或4:3或4:5),V(甲 苯):(二氯甲烷)=7:3,(异丁醇):(二氯甲烷)=l:9,V (甲苯):(乙酸乙酯)=9:l,(甲苯):(正己烷):(异戊醇) = 78:20:2,(甲苯或苯):(异戊醇)=98.5:1.5,乙醚,乙酸 丁酯等.其中乙醚对尿液中7一ANIZ和本文中的内标 物7一AFLZ均有较高而相近萃取率,分别为80%和 83%,且乙醚沸点低,挥发性强,浓缩和去除容易,可 在较低温度(40?)甚至室温下快速挥干,这既大大缩 短了萃取时间又避免了高温下吹干溶剂可能引起的 药物损失.另外,乙醚对尿液中苯二氮革类药物及代 谢物均有较高的提取率和较低的检出限.是尿液中苯 二氮草类药物及代谢物筛选分析的较好的提取溶剂. 因此本文选用乙醚作为液一液萃取溶剂,既可进行尿 液中7一ANIZ及内标7一AFLZ的提取.又可满足尿液 中可能含有其他苯二氮革类药物及代谢物的筛选和 分析的需要. f参考文献1 【1]GarattiniS,MussinniE,RandallLO,eta1.Thebenzo? diazepines[M].NewYork:RavenPress,1983:50-75. 【2]江明性药理学【M].北京:人民卫生出版社,1997:94- 96. 【3]联合国麻醉药品委员会.国家麻醉药品实验室使用手册 【Z].1996,ST/NAR/16:9. 【4]DrummerOH.Methodsforthemeasurementofbenzodi— azepinesinbiologicalsamplesfJ].JChromB,1998, 713:202—225. [5]姜兆林,朱昱,史晓凡.尿中常用苯并二氮蕈类药物及其 主要代谢物的GC/ECD检测法fA].2000年全国毒物和 毒品检验技术研讨会论文集【C],北京:中国人民公安大 69. 学出版社.2000.4:66— (收稿日期:2006—02—28) f本文编辑:刘伟)