[word格式] 高效液相色谱法测定人血清中卡马西平及环氧化卡马西平浓度
高效液相色谱法测定人血清中卡马西平及
环氧化卡马西平浓度
?
592?安徽医药AnhuiMedicalandPharmaceuticalJournal2005Aug;9(8)
高效液相色谱法测定人血清中卡马西平及环氧化卡马西平浓度
李顺炜,毛名扬,李国忠
(安徽省铜陵市人民医院药剂科,安徽铜陵244000)
摘要:目的建立测定人血清中卡马西平及其代谢物10,11一环氧化卡马西平浓度的方法.方法采用高效液相色谱法,血样用乙
醚提取,以艾司唑仑为内标,色谱柱为KromasilCi8柱(150m/n×4.6mm,5lxm),流动相为乙腈-水(1:2),检测波长215nm,流速1.2
ml?min,.结果血清中卡马西平,环氧化卡马西平线性范围分别为1.0—20.0mg?L(r:0.9999),0.1—5.0mg?L(r:
0.9994),平均回收率接近100%,日内,日问RSD均小于5%.结论本法快速,简便,准确,适用于临床常规监测需要.
关键词:卡马西平;环氧化卡马西平;血药浓度;高效液相色谱法
DeterminationofCarbamazepine,Carbamazepine-10,11-epoxide
inserumbyHPLC
LIShun—wei,MAOMing—yang,LIGuo—zhong
(DeptofPharmacy,TheTonglingPeople’SHo~ital,Tongling244000,China)
Abstract:AimTodeterminecarbamazepine,carbamazepine一
10,11-epoxideinserumbyhighperformanceliquidchromatography
(HPLC).MethodsSerumsamplewasextractedwith5mlaether,Estazolamwasselectedasaninternalstandard,AnUVdetector
(215nm)andKromasilCl8column(150mm×4.6mm,5lxm)wereused.Themobilephaseconsistedofacetonitrile—water(1:2).The
flowratewas1.2ml?min,.ResultsThelinearrangeofcarbamazepineandca
20.0mg?L.. rbamazepine-10.11-epoxidewere1.0—
(r:0.9999),0.1,
5.0mg?L(r:0.9994),.Themeanrecoverywerenearly100%,.Therelativestandarddeviation(RSD)ofin-
ter—dayandintra—dayforcarbamazepineandearbamazepine-10,11-epoxidewerelessthan5%.ConclusionThemethodisaccurate,
sensitiveandmoresuitableforclinicalroutinemonitoring.
Keywords:earbamazepine;earbamazepine一10,11一
epoxide;serllmconcentration;HPLC
表4加样回收试验
表5两种方法测得的脱水穿心莲内酯含量结果
收率.结果见表4.
2.1O脱水穿心莲内酯含量测定对比实验按穿心莲胶囊法
定质量标准项下脱水穿心莲内酯含量测定方法一双波长
薄层扫描法,用不同薄层板对同一样品进行测定,结果见表
5.同时照上述2.6高效液相方法测定此批样品,结果见表
5.比较上述两者方法的结果,两种方法G值均小于1.71,表
明检测数据均无无异常值;F=Si2/S2:81>F(‘P:5—
1:4,’P2=5—1:4,F=6.39),表明S和S精密度有显着差
异.使用双波长薄层扫描法测定穿心莲胶囊中脱水穿心莲内
酯含量,相对标准差(10.12%),大于使用高效液相色谱法测
定穿心莲胶囊中脱水穿心莲内酯含量的相对标准差
(1.09%).也就是说测定穿心莲胶囊中的脱水穿心莲内酯
含量,使用高效液相色谱法好于双波长薄层扫描法.
3讨论
脱水穿心莲内酯和穿心莲内酯是穿心莲主要有效成分.
现行的穿心莲胶囊质量标准有2种:一种是部颁标准;另一
种是局颁标准[21.目前这个标准共存,只是根据各企业报批
执行的标准不同而不同,也就是说,同样是一个产品,有的企
业执行部颁标准,有的企业执行局颁标准,比较混乱.对于两
种标准,在含量控制指标上不同,部颁标准以脱水穿心莲内酯
为含量测定指标,采用双波长薄层扫描法;局颁标准以穿心莲
内酯为含量测定指标,采用高效液相法.如果本品同时使用
高效液相法测定两种有效成分的含量,既满足部颁标准的脱
水穿心莲内酯含量测定指标要求,又符合局颁标准的穿心莲
内酯含量测定指标要求,从而能对产品质量进行双重成分含
量的控制.
参考文献:
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标准标准中药成方制剂第二十册[s],WS3一B一3933—98.
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(收稿日期:2005—05—08)
安徽医药AnhuiMedicalandPharmaceuticalJournal2005Aug;9(8)’593?
卡马西平(Carbaruazepine,CBZ)是临床常用的抗癫痫药,
但用药个体差异大,需对其血药浓度常规监测’.目前研究
表明,CBZ共有30余种代谢物,其中10,11一环氧化卡马西平
(Carbaruazepine一10,11一epoxide,CBZE)为主要代谢物,具有和
CBZ相似的抗癫痫活性和毒性作用,且应川CBZ后发生的一
些毒副作用与CBZE相关,故对其含量测定具有重要意
义.同Henri定CBZ及CBZE的国内文献报道”较少,国外
报道则多采用LC/MS,LC/MS/MS方法.本文建了高
效液相色谱法同时测定人血清中CBZ和CBZE的浓度,办法
简便,适于血药浓度常规监测.
1仪器与试药
1.1仪器Et本分光公司JASCO1500系列高效液相色谱
仪,包括PU一1580型输液泵,uV一1575型紫外检测器,CK—
Chroru色谱工作站6.1版软件.
1.2试药CBZ对照品(中国药品生物带lj品检定所,批号
0142-9503);CBZE对照品(SIGMAUSA,批号043K7035,含量
>98%);内标艾司唑仑(Estazolaru,EZ)对照品(国家麻醉药
品实验室,批号1219—9201);乙腈为色谱纯(美国TEDIA),
乙醚为无水乙醚重蒸,实验用水为亚沸重蒸馏水.
2方法与结果
2.1色谱条件色谱柱:KroruasilC仟(150ruru×4.6
IllIn,5p.ru);流动相:乙腈一水(1:2,V/V);流速:1.2
ml?ruin,;柱温:室温;检测波长215nnl;灵敏度0.02Aufs.
2.2样品处理取血清样品200I.zl,加入内标适量,混匀,
加乙醚5rul,旋涡混和3ruin,静置分层,吸取上清液至具塞试
管中,置300(;水浴中氮气挥干有机相,残渣用流动相lO01xl溶
解,取20l进样
2.3色谱行为在本实验条件下,内标与药物的色谱峰分
离良好,血清内源性物质峰无干扰.CBZE的保留时间为
3.767ruin,CBZ的保留时间为7.250ruin,内标的保留时间为
8633,色谱图见图1:
图1色谱图
,.空白血清;B.标准血清;C.病人血样;1.CBZE;2.CBZ;3.内标
2.4标准曲线将CBZ,CBZE储备液分别用空白血清稀释
成浓度分别为1.0,4.0,8.0,12.0,20.0rug?L及01,0.5,
1.0,2.0,5.0mg?L的系列标准血清液,按2.2项方法处
理,进样201.zl,记录色谱图,分别以CBZ和CBZE峰面积与内
标峰面积之比(Y)对浓度(X)进行回归分析,得回归方程,
CBZ:Y=0.1127X+0.00O4,r=0.9999;CBZE:Y=0.1296
x+0.0548,r=0.99947CBZ及CBZE分别在1.0,20.0,
0.1,5.0mg?L浓度范围内呈良好线性相关,其最低检测
浓度分别为0.1,0.0lmg?L(S/N>/3)
2.s精密度及回收率考察分别取CBZ1.0,8.0,20.0
rug?L及CBZE0.1,2.0,5.0rug?L的低,中,高三个浓度
的标准血清液各5份,按2.2项方法操作,Et内做完得Et内
RSD%:同法连续测定5d,得日l可RSD%回收方法同Et问
精密度试验另以流动相分别配制上述低,中,高三个浓度的
CBZ,CBZE溶液,不经提取直接进相同量的样品,进行峰面积
比较,计算提取回收率.结果兀尢表1.
表1CBZ,CBZE精密度,回收率考察结果(n=5)
2.6临床应用用本文建立的方法测定l0份癫痫患儿血
清CBZ及CBZE的浓度,结果几尢表2.
表2临床应用结果
3讨论
CBZ具有强紫外吸收,而CBZE由于10,11位双键打开
形成环氧化物,其紫外吸收相对较弱,因而检测波长宜以
CBZE为主.经紫外检测器在线光谱扫描,215111/1处CBZE,
CBZ及内标均有强吸收,故选择215111/1为检测波长.
从生物样品中萃取CBZ,CBZE可选用乙酸乙酯,二氯甲
烷/乙醚(1:3)等,本文采用乙醚直接提取.乙醚与二氯
甲烷/乙醚的提取率相当,较乙酸乙酯高.乙醚具有比重轻,
沸点低的优点,涡混提取后无须离心,稍许静置即可分层,在
室温条件也很容易挥干,因此血样预处理简单,快捷,也有利
于CBZE的稳定.内标选择有采用硝西泮,氯唑沙宗及D
卡马西平等.临床上硝西泮常与抗癫痫药伍用,以其为
内标似不妥.以CBZ其他代谢物为内标,较难获得.本文采
用艾司唑仑,价廉,易得,保留时间适中,较理想.
本文采用了乙腈一水(1:2)流动相系统,避免了乙腈一
磷酸盐缓冲液系统中存在的磷酸盐可能对仪器寿命影响,并
克服了甲醇一水系统及乙腈一甲醇一水系统存在的低波长处
基线不稳的缺点,系统组成简单,应用方便.
临床应用结果初步表明,CBZ在体内的氧化代谢存在较
大差异,相关影响因素有待进一步研究.
参考文献:
[1]MartinJ.Brodie,MarcA.Dichter.AntiepilepticDrugs[J].NEngl
JMed,1996,334(7):168.
?
594?安徽医药AnhuiMedicalandPharmaceuticalJournal2005Aug;9(8)
紫外分光光度法测定1%盐酸丁卡因注射液的含量
李凤华,张克俊
(安徽省和县人民医院,安徽和县238200)
摘要:目的探讨紫外可见分光光度法测定1%盐酸丁卡因
注射液含量的可行性.方法采用中国药典(二部)1995年
版附录紫外分光光度法测定.结果在312am波长处,其含
量测定平均回收率为97.96%,RSD为0.27%.结论该法
快速简便,结果准确可靠,适于测定1%盐酸丁卡因注射液的
含量.
关键词:紫外分光光度法;盐酸丁卡因;注射液;含量
1%盐酸丁卡因注射液是我院制剂室常配制剂,中国医院
制剂
第一版是采用永停滴定法测定含量.永停滴定
法测定1%盐酸丁卡因注射液含量费时费力不方便,滴定终
点掌握困难,我们采用紫外分光光度法测定盐酸丁卡因注射
液的含量,快速方便结果可靠,报道如下.
1仪器与试药
752一C紫外可见分光光度计(上海第三分析仪器厂),
DF一377B电光分析天平(江苏常熟衡器厂),盐酸丁卡因(北
京市燕京制药厂,批号001203),1%盐酸丁卡因注射液(本院
自制,批号010510,010608).
2方法与结果
2.1标准溶液的配制精密称取105~C干燥至恒重的盐酸
丁卡因0.1g置100ml量瓶中,加蒸馏水至刻度,摇匀,备用.
2.2测定波长的选择精密吸取上述标准溶液0.5ml置
100ml量瓶中,加蒸馏水到刻度,摇匀,以蒸馏水为空白,取样
从200,400am之间每隔20am测量1次溶液的吸收值,在
有吸收峰的波段再以间隔2am测定一些点,记录不同波长下
的吸收度测定值,结果在312am波长处有最大吸收,与文献
报道基本一致,故选择312nm为测定波长.
2.3标准曲线的测定精密吸取上述标准溶液10.0ml于
100ml量瓶中,加蒸馏水至刻度,摇匀,精密吸取以上稀释液
1.0,2.0,4.0,6.0,8.0,10.0m1分别于6个100ml量瓶中,加
蒸馏水至刻度,摇匀,以蒸馏水为空白,分别取样于312am波
长处测定各自的吸收值.经线性回归得回归方程A=n0770C
+0.0765,r=0.9987(n=6),线性范围1.0,10.0mg?L,.
2.4回收率测定精密称取盐酸丁卡因0.5,1.0,1.5g分
别于100ml量瓶中,用蒸馏水分别稀释至2.0,4.0,6.0
mg?L的溶液,以蒸馏水为空白,分别取样在312am波长
处按紫外分光光度法测定各自的吸收值.代入回归方程计算
含量,并汁算回收率,结果见表1.
2.5精密度和重复性试验精密称取盐酸丁卡因适量,用蒸
馏水分别稀释成2.0,4.0,6.0mg?L的溶液.日内差于同
一
天内分别重复测定4次;日间差为同一样品连续3d每天
测定一次,结果见表2.
2.6样品含量测定取本院自制的1%盐酸丁卡因注射液,
分别精密吸取适量,用蒸馏水稀释至4.0mg?L,,以蒸馏水
为空白,在312nm波长处,按紫外分光光度法测定各样品稀
释液的吸收值,代入回归方程,计算其含量,结果见表3.
3讨论
实验结果表明,紫外分光光度法测定1%盐酸丁卡因注
射液的含量可行,浓度适用范围为1.0,10.0mg?L,.该法
简便,快速,结果可靠,适于医院药检室对该制剂的质量控制.
表1盐酸丁卡因回收率测定
浓度/mg?L日内差(RSD/%)日问差(RSD/%)
参考文献:
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