实验八血糖的测定

实验八血糖的测定 实验 血糖的测定(葡萄糖氧化酶法) 【目的】 1. 了解葡萄糖氧化酶法测定血糖的原理，能进行血糖测定的操作。 2. 掌握血糖测定的临床意义。 【原理】 葡萄糖氧化酶 (GOD) 能将葡萄糖氧化为葡萄糖酸和过氧化氢。后者在过氧化物酶 (POD)作用下，分解为水和氧的同时将无色的4-氨基安替比林与酚氧化缩合生成红色的醌类化合物，其颜色的深浅在一定范围内与葡萄糖浓度成正比，在500nm波长处测定吸光度，与标准管比较可计算出血糖的浓度。反应式如下: 器材】 【 试管、吸管、试管架、恒温水浴箱、分光光度计 【试剂】 1. 0.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.0) 称取无水磷酸氢二钠8.67g及无水磷酸二氢钾5.3g溶于800ml蒸馏水中，用1mol/L氢氧化钠(或1mol/L盐酸)调节pH至7.0，然后用蒸馏水稀释至1L。 2. 酶试剂 称取过氧化物酶1200U，葡萄糖氧化酶1200U，4-氨基安替比林10mg，叠氮钠100mg，溶于上述磷酸盐缓冲液80ml中，用1mol/L NaOH调pH至7.0，加磷酸缓冲液至100ml。置冰箱保存，4?可稳定3个月。 3. 酚溶液 称取重蒸馏酚100mg溶于100ml蒸馏水中(酚在空气中易氧化成红色，可先配成500g/L的溶液，贮存于棕色瓶中，用时稀释)，用棕色瓶贮存。 4. 酶酚混合试剂 取上述酶试剂与酚溶液等量混合，4?可以存放一个月。 5. 12mmol/L苯甲酸溶液 溶解苯甲酸1.4g于蒸馏水约800ml中，加温助溶，冷却后加蒸馏水至1L。 6(葡萄糖标准贮存液(100mmol/L) 称取已干燥恒重的无水葡萄糖1.802g，溶于12mmol/L苯甲酸溶液约70ml中，并移入100ml容量瓶内，再以12mmol/L苯甲酸溶液加至100ml。 7.葡萄糖标准应用液(5mmol/L) 吸取葡萄糖标准贮存液5.0ml 于100ml 容量瓶中，加12mmol/L 苯甲酸溶液至刻度。 【操作】 取3 支试管,编号，按下表操作。 表 血糖测定操作步骤 加入物 (ml) 空白管 标准管 测定管 血清 , , 0. 2 葡萄糖标准液 , 0. 2 , 蒸馏水 0. 2 , , 酶酚混合液 2.0 2.0 2.0 混匀，置 37 ?水浴中保温 15分钟，在波长 505nm 处比色，以空白管调零，读取标准管及测定管吸光度。 【计算】血清葡萄糖(mmol/L) =( 测定管吸光度/标准管吸光度) × 5.55 【正常参考范围】 3.9,6.1mmol/L 【临床意义】 1. 生理性高血糖 可见于摄入高糖饮食或注射葡萄糖后，或精神紧张、交感神经兴奋，肾上腺分泌增加时。 2. 病理性高血糖 ?糖尿病:病理性高血糖常见于胰岛素绝对或相对不足的糖尿病患者。 ?对抗胰岛素的激素分泌过多:如甲状腺功能亢进、肾上腺皮质功能及髓质功能亢进、腺垂体功能亢进、胰岛α-细胞瘤等。 ?颅内压增高:颅内压增高(如颅外伤、颅内出血、脑膜炎等)刺激血糖中枢，出现高血糖。 ?脱水引起的高血糖:如呕吐、腹泻和高热等也可使血糖轻度增高。 3. 生理性低血糖 饥饿或剧烈运动、注射胰岛素或口服降血糖药过量。 4. 病理性低血糖 ?胰岛素分泌过多:由胰岛β细胞增生或胰岛β细胞瘤等引起。 ?对抗胰岛素的激素分泌不足:如腺垂体功能减退、肾上腺皮质功能减退和甲状腺功能减退等。 ?严重肝病患者:肝贮存糖原及糖异生功能低下，不能有效调节血糖。 【结果及】 【思考题】 1. 血糖有哪些来源和去路，机体是如何调节血糖浓度恒定的,