龈沟液中的碱性磷酸酶与牙周的关系_6576

龈沟液中的碱性磷酸酶与牙周的关系_6576 龈沟液中的碱性磷酸酶与牙周的关系 【摘要】 龈沟液及其内容的检测是牙周病目前研究的热点之一。龈沟 液的收集有两种方法：袋内法和袋口法。龈沟液中有众多的酶类，其中 碱性磷酸酶是研究得比较早的一类。通常检测骨性碱性磷酸酶的方法分 为两大类：电泳法和非电泳法。对龈沟液中的碱性磷酸酶采用化学发光 法效果较好。龈沟液中的碱性磷酸酶水平与牙周袋深度、牙槽骨吸收量 和活动性附着丧失呈明显地正相关。有炎症或种植失败的种植体周围龈 沟液中的碱性磷酸酶明显升高。而牙周炎牙齿在接受正畸外力时龈沟液 中的碱性磷酸酶的含量有增加的趋势。 【关键词】 牙周炎；龈沟液；碱性磷酸酶 牙周炎是间歇进行造成牙周软硬组织破坏的非特异性感染性疾病。 牙周炎治疗除必要的局部处理和长期的健康维护外，关键在于预测和控 制活动期。随着牙周病病原学研究的日渐深入，人们已经认识牙周病是 活动期与静止期相交替的渐进的缓慢的发展过程。发现并终止活动期的 发展无疑是早期防止牙周支持组织丧失的有效办法。但现有的牙周传统 诊断方法无法辨别牙周疾病活动期，因此需要寻找一系列客观的、有效 的、准确的牙周诊断新技术，来完善牙周病的检查和诊断。龈沟液 （gingival crevicular fluid，GCF）检测可显示某一个体或某一部位免疫反应状况及局部炎症病变程度，并可依某些生化成分的改变预测和 诊断活动期，是目前常用的牙周病检测研究方法。 1 龈沟液 11 龈沟深度为0.5~3.0 mm。龈沟液以大约20 μl/h 的速度自牙龈组织内的毛细血管网渗入到龈沟内。目前被接受的GCF产生模式为：微血管系统(后毛细血管小静脉)内液体，经内皮细胞间隙渗入细胞 间形成细胞间液，再通过淋巴管回吸收。当渗出大于回流时， 细胞间液在组织内聚积形成水肿；或经结合上皮细胞间隙外渗至龈沟形成 GCF。正常情况下，龈沟内存在菌斑微生物及其代谢产物，龈沟内始终有渗透梯度的变化，故有少量GCF聚积。GCF流量改变出现于牙龈炎主要症状之前，是龈沟最早可检测到的客观指标。对牙周炎和牙龈炎GCF检测结果显示：牙周炎GCF量大于牙龈炎，且均高于正常对照，并随炎 症好转而下降。GCF量与测定部位有关，邻间沟最大，颊舌侧龈沟变化 不明显。GCF流量由切牙到磨牙逐渐升高，上切牙高于下切牙，同名牙 无区别。另外，GCF量与袋深成正比，与附着丧失(Attachment Loss，AL)一般无关。只有在AL?5 mm 时，GCF量才显著增加。故目前多认为 GCF量与炎症程度成正比，但不能说明牙槽骨的破坏程度，不能作活动 期的判断。第1期龈沟液中的碱性磷酸酶与牙周的关系 王雯雯，等 12 龈沟液的收集方法 （1）重复取样：重复取样则可将多次重复采取的混合形成一 个牙位的1份GCF储池，或者各重复采取的样本进行多成分或一种成分 的多方法分析，既扩大了样本量，避免了牙位特异性的影响，又便于研 究各成分的交互作用。（2）袋内法和袋口法：?袋内法：袋内法取 GCF量较宜反映牙龈炎症。袋内法取样，插入深度易受牙石、牙周袋的 宽松程度影响，而插入深度又明显与取得的GCF量呈正相关。?袋口法：袋口法避免了滤纸条插入对龈沟上皮的物理性刺激，但获得GCF量 少；袋内法较袋口法获得GCF量多，但对局部的刺激可能导致血清稀释 作用。且袋内法反映炎症变化没有袋口法敏感。 2 碱性磷酸酶碱性磷酸酶（ALP） 是在碱性条件下水解多种膦酯酯并具有转磷酸基作用的一组酶，包 括由不同结构基因编码的小肠、胎盘、生殖细胞和非特异型同工酶。前 三者基因定位于染色体2q34~37的相邻位点，后者基因定位于染色体 1q36~34之间，其中非特异型碱性磷酸酶在基因表达后经过不同的修饰 形成肝、肾、骨等次级同工酶。这些同工酶的理化性质、分子生物学特 性、作用机制的深入研究以及准确的定量测定将有助于其在临床上的应 用。碱性磷酸酶几乎存在于机体的各个组织，但以骨骼、牙齿、肝脏、 肾脏含量较多。正常人血清中的碱性磷酸酶主要来自骨骼，由成骨细胞 产生，也可来源于肝脏、肾脏、肠道。妊娠时血清中的ALP来源于胎盘组织。ALP经肝胆系统进行排泄。测定血清中ALP作为Paget病、甲状腺功能亢进及肾病性骨营养不良等疾病的诊断指标，已有很久的历史， 其方法简便成熟。保存12 h，在4?保存数日，在-20?保存数月。牙周组织健康的人血清中的非特异性ALP男女之间没有区别。血清中的碱 性磷酸酶较为稳定，可在室温中（10~25 ?）12 h，有附着丧失者血清中的骨型ALP较牙周健康者的要少，但全部类型总的ALP含量无差异。血清中的ALP与年龄有关，青少年的高于成年人。且与青少年成长发育 规律有关，快速生长期高于其他时期。排除年龄和生长发育快速期，男 性女性之间无太大的差异。 21 检测方法 骨型碱性磷酸酶在机体的生理功用主要是在成骨过程中水解膦酯 酯，为羟磷灰石的沉积提供必需的磷酸；同时，水解焦磷酸盐，解除其 对骨盐形成的抑制作用，有利于成骨过程。目前鉴别和定量测定骨型碱 性磷酸酶的方法可以分为两大类：电泳法和非电泳法。电泳法主要利用 不同的同工酶之间物理性状、毛分子大小及荷电量的不同而进行。根据 所用的支持物和操作的方法可分为：醋酸纤维薄膜电泳、琼脂糖凝胶电 泳、聚丙烯酞胺凝肢电泳、等电聚焦电泳和亲和电泳等。其中以等电聚 焦电泳和亲和电泳的分辨效果较好。等电聚焦电泳分辨率高特别适合次 级同工酶的分离。非电泳法有化学抑制法、热失活试验、亲和沉淀法和 免疫分析法等。化学抑制法、热失活试验灵敏度和特异性较差，亲和沉 淀法和亲和电泳法操作简便，有较好的灵敏度和特异性，但是当血清标本含有胆汁型碱性磷酸酶时，会使假性增高。近年建立的免疫分析法能 把灵敏度、特异性、可靠及操作简便等特性很好地结合起来，从而满足 了临床的常规应用。对GCF中的ALP采用化学增强法可取得良好效果。 22 龈沟液中的碱性磷酸酶 龈沟液中含有多种酶，其中目前认为与牙周病有关的酶有许多，例 如:天冬氨酸转氨酶（AST)、白细胞弹性蛋白酶(NE)、β酶(βG)、髓过氧化物酶(MPO)、基质金属蛋白酶(MMPs)、金属蛋白酶组 织抑制剂(TIMP)和碱性磷酸酶（ALP）。碱性磷酸酶为成骨细胞的功能酶，是成骨细胞成熟的标志，与骨组织钙化密切相关，主要参与骨的代 谢。GCF中ALP经电泳热稳定性来测定，出现短而宽可被磷脂酰肌醇 (PI)固定的带，显示对抗骨型ALP的免疫学特异性，而另一条窄而游走 距离远的稳定带，与牙龈卟啉菌的ALP一致，因此推测GCF中ALP是来自牙周膜细胞和细菌的几种同工酶，多是龈下G-菌代谢产生。牙周膜 细胞中本身就含有大量的ALP，当牙周膜细胞破裂或通透性增高时，外 溢到龈沟液内。牙周膜细胞中的ALP是与骨、肝、肾等组织中相似的同 工酶，无特异性。 23 GCF中的ALP与牙周病的关系 关于牙周病活动性的研究已有十几年的历史，龈沟液中宿主来源的 酶是现在研究的热点，ALP便是其中之一。ALP与牙周袋深度（pocket deepth，PD）、附着丧失和骨破坏有关，牙周炎者高于牙龈炎者和正常 人，后两组无区别，活动期和植骨术后ALP水平升高，故可作为骨吸收 破坏的标志。 在牙周炎活动性的检测中对龈下菌斑中微生物的检测和 龈沟液中生化指标的检测是早期诊断牙周炎活动性的重要方法。在牙龈 炎临床症状出现的前7~14 d 就可检测到GCF中的ALP升高。有研究表明，测定成人牙周炎和快速进展型牙周炎患牙的GCF中的ALP水平，其值明显高于无牙周破坏者及边缘性牙龈炎者，且水平高低与临床症状呈 高度正相关。经治疗后GCF中的ALP水平随临床症状的改善而明显下 降，提示GCF中的ALP可能是牙周组织炎症状况和破坏程度的一项有意 义的诊断指标。现有表明， GCF中的ALP水平与牙周袋深度和牙 槽骨吸收量呈明显正相关与活动性附着丧失呈明显正相关。对不同位点 GCF中的ALP的监测，可预测是否将要发生附着丧失。GCF中的ALP水平和牙周袋的深度和牙槽骨吸收的百分率密切相关，可反映牙周早期炎 症和破坏状况。 24 GCF中的ALP与种植的关系 与自然牙一样，种植体周围也存在龈沟，研究表明种植体周围的龈 沟无论在形态和生化特征也都与自然牙有相似之处。周正等［1］观察发现种植成功的牙和正常牙ALP水平差异无显著性，失败的种植牙ALP水平比正常牙高。提示种植牙GCF中ALP水平可作为评判种植牙状况及 预后的一项重要指标。有人认为，种植体周围GCF量与临床指标无相关性。而其他一些学者的研究则发现，有炎症或失败种植体的GCF量明显高于健康的种植体，认为GCF量可作为种植体周围组织炎症程度的指标 ［2］ ，GCF的量、GCF中的ALP水平的变化趋势并不完全与种植体周 围黏膜的炎症状况相一致。但骨吸收位点的GCF量、GCF中的ALP水平均明显高于无骨吸收的位点。GCF量、GCF中的ALP水平可在一定程度上反映种植体周围组织的炎症状况及骨组织的变化，但它们的诊断和预 测价值还有待更深入地探讨。 25 正畸与龈沟液中的碱性磷酸酶 牙周健康牙齿在接受常规正畸治疗时具有安全性、可靠性。秦科 ［3］观察到牙周炎牙齿在接受正畸外力时，GCF中ALP含量均有增加趋势。他认为可能与正畸托槽机械刺激及局部菌斑的形成有关。一般菌 斑在几小时至十几小时即可开始形成。牙面正畸托槽的粘着不利于口腔 清洁，加速牙菌斑形成。细菌附着后，其抗原成分和毒性产物等引发白 细胞的趋化、吞噬及炎症过程，释放ALP，造成GCF中ALP含量增加。 26 取样方法对ALP的影响 GCF测定的微小误差会导致浓度的很大误差，取样过程中严格隔湿 并去除龈上菌斑的条件下，唾液和菌斑对GCF体积的影响还会有 5.2%~8.6%，其浓度仍会受到较大影响。即使有了唾液污染、带有少量 菌斑，因其中的ALP较GCF中之ALP少得多，对酶总量则无明显影响。 而且，ALP主要由局部组织生成，插入袋内造成的刺激引起血清稀释仅 对浓度有影响，对ALP总量无明显影响，在取样方法研究中，用酶总量 表示为佳。 【参考文献】 \[1\] 周 正.种植牙龈沟液中ALP水平与预后的关系\[J\].中国医学科学院学报,2001,13(2):58. \[2\] George K,Zafiropoulos G,Murat Y,et al.Clinical and microbiological status of osseointegrsted implants\[J\].J Periodontol,1994,65:766-770. \[3\] 秦 科,仇丽鸿.牙周炎牙齿正畸加力前后龈沟液中PEG2和ALP的变化\[J\].实用口腔医学杂志,2004,20(2):160. 声明：版权归原作者所有，如果侵犯了你的版权，请第一时间和我联 系，我将立刻做出处理！！！