建立Lee氏大鼠异位心肺联合移植模型的几点改进

建立Lee氏大鼠异位心肺联合移植模型的几点改进 建立Lee氏大鼠异位心肺联合移植模型的几 点改进 444Vo1.21No.4AerospaceMedicineApr2010 建立Lee氏大鼠异位心肺联合移植模型的几点改进 寇应琳,朱晓涵,张向军,聂文静 (1.郑州铁路职业技术学院护理系,河南郑州450052;2.郑州市妇幼保健院,河南郑州450000) 摘要目的:建立并改进Lee氏异住心肺联合移植模型.方法:以Lee氏腹腔异位心肺联合移植模型为基 础,在受体血管的切口,吻合方法及术后补液几方面加以改进.结果:通过改进,简化了手术过程,提高了手术的 效率.正式实验80次,成功率为86.3%,整个手术过程为(64.5?2.0)min.结论:改进的方法稳定可靠,提高了 手术的成功率. 关键词大鼠;腹腔异位心脏移植;心肺移植模型 中图分类号:R一332文献标识码:A文章编号:1005—9334(2010)04一O444—02 SomeImprovementsinEstablishingLee,s HeterotopicHeartTransplantModel KOUYing—lin,ZHUXiao—han,ZHANGXiang-jun,etal (DepartmentofNursing,TheZhengzhourailwayvocationalandtechnicalcollege,Zhengzh ou450052,China) AbstractObjective:ToestablishandimproveLee,sheterotopicheart—lungtransplantmodelinrats.Methods: BasedonLee?abodominalheterotopicheart—lungtransplantmodel,thereweresomeimprovementsinVesselincision, vesselanastomosisandinfuSion.Results:Theseimprovementssimplifiedtheprocessofhea rttransplantandmaketlleoD. erationmoreefficia1.Thesuccessrateofformaloperationshadcometo86.3%.Fulltimeofop erationwas(64.5?2.0) minutes.Conclusions:Theimprovedtechniqueisreliable,andthistechniquecanimprovesth eSuccessrateofheterotop? ichearttransplant. KeywordsRat;Abodominalheterotopicheart—lungtransplant;Heart— lungtransplantmodel 作为治疗终末期心脏病的主要方法,心脏移植已得到 广泛应用并不断发展,但影响移植术后长期生存效果仍然 是移植排斥反应.大鼠的Lee氏腹腔异位心肺联合移植模 型是进行移植心脏排斥反应机制,诊断,治疗以及抗排斥 反应药物的筛选方面比较理想的动物模型.其手术方式 较为简单,且与Ono式相比,只需吻合1根血管,简化了手 术过程.监测手段主要采用心电图和触诊,简便且易掌 握.手术的关键在于移植器官的保护和血管的吻合质量, 难度在于时间紧,步骤多,需要掌握一定的显微外科技术. 现将实验过程如下. 1与方法 1.i实验对象选用健康成年雄性,清洁级近交系封闭群 大鼠,体重250,300g,平均体重(278?8.5)g,由河南省 实验动物中心提供. 1.2方法 1.2.1麻醉用新鲜配制的10%水合氯醛按30ms/kg腹 腔注射.' 1.2.2受体准备大鼠麻醉后仰卧固定,腹部除毛并碘伏 消毒后铺巾,行腹部正中切口,靠近腹白线部位可尽可能 的减少出血,自制拉钩牵开并暴露腹腔提出肠拌,用温盐 水纱布包绕后置于腹部左侧,充分显露腹腔血管.在腹腔 合适部位钝性游离腹主动脉,不游离血管鞘.选取移植部 位时尽量避开腰静脉所在,如非必要,无需结扎腰静脉. 为避免剪13后剪口处持续渗血影响手术视野,应仔细检查 并结扎下腔静脉通往背部的交通支.完成这一切后先将 受体肠复位,以温生理盐水纱布覆盖腹部后放置一旁,取 供体心脏. 1.2.3摘取供心将麻醉后的供体鼠仰卧固定于手术台 ,腹除毛,碘伏消毒后,沿腹正中线切开腹腔,从下腔 上,胸 静脉缓缓注入肝素生理盐水2mL(200u/mL),待全身肝 素化后沿两侧腋前线剪开胸腔至锁骨,打开心包后迅速放 人冰屑降温,阻断主动脉并从主动脉根部灌注4? St.Thomas液2mL.于接近右房处结扎下腔静脉,并于近右 心房处结扎切断右上腔静脉.于膈肌上方切断食管,用夹 持食管残端向上提拉,切断主动脉与气管,将取出的心肺 置于4~C林格氏液中进行修剪,剪除供体气管,食管,游离 主动脉并于无名动脉处以45.剪口切断主动脉,从根部结 扎剪除左肺,仅保留右肺,并使用静脉留置针通过主动脉 对心肺用冷肝素盐水缓慢进行灌洗,直至流出液体肉眼看 不见血液为止.然后将心脏放置于4~C林格氏液中待用. 1.2.4供心移植在受体鼠腹主动脉预行吻合口处的上, 下两端横行阻断.先用9—0的无损伤线针纵向缝起l针, 向上挑起后用显微弯剪剪除,血管侧壁即形成椭圆形口, 用肝素生理盐水冲去积血.剪口应略大于供心主动脉的 口径.将供心用冰林格氏液纱片包裹,置于血管右侧,并 敷以冰屑.用8—0无创伤缝线先将供心主动脉和受体的 腹主动脉切口对角缝合2针,打结.然后自一端起用缝合 固定角部的线在前壁做连续缝合,缝至另一端行套缝后打 第21卷第4期航空航天医药2010年4月445 结.再将其翻转,用另一端固定角部的线在另一侧的前壁 做连续缝合.针距0.5,0.6mm,边距0.5mm,每边缝合6 — 8针.在缝至最后1,2针时用肝素生理盐水灌注供心 主动脉,以排除气体防止气栓.血管缝线收紧前用肝素生 理盐水冲洗血管以排出气体.针距和边距为0.3, 0.5mm,每侧壁缝合5—6针.吻合结束后,移去冰屑棉 片,同时松开两把微血管夹,用湿生理盐水棉球轻压吻合 口以减少渗血.若吻合口仅极少量漏血,可反复打开,关 闭近心端微血管夹4—5次,每次间隔10s左右,漏血即可 停止.若渗血过多则需重新阻断后加针止血.开放血管 阻断夹后可见吻合之血管迅速充盈,心脏面血管充盈, 心脏颜色由暗红色变为鲜红色,数秒钟后移植心自动复 跳,肺叶充血.若出现心律不齐,不需特殊处理,数分钟后 可自行恢复窦性心律. 术后根据失血情况可使用5号头皮针直接自下腔静 脉补液,补液使用5%碳酸氢钠溶液.判定移植成功后,用 庆大霉素温生理盐水冲洗腹腔(庆大霉素5000U+0.9% 生理盐水5mL),将肠袢复位,摆好移植心位置,分两层关 闭腹腔.术后给予庆大霉素5000U腹腔注射.手术过程 中心肌缺血时间不超过60s.移植心存活72h以上视为手 术成功.移植心的观察采用腹外触诊和心电图检查,心电 消失视为移植心死亡的标志. 2结果 预实验阶段,实验35次,成活7只,失败原因在早期多 为供心保护不好,在缝合过程中心脏已经变硬,术后大出 血,而大鼠失血2mL即出现休克.以及缺乏显微外科缝合 经验,造成血管缝闭.正式实验时,由于注意了供心的保 护,在预实验阶段积累了一定的显微外科缝合经验,并将 术式加以了改进,成功率明显提高.正式实验80次,成活 69只,成功率86.3%.失败原因6只吻合口出血,3只缝 闭,1只心肌坏死,1只取供心时不小心剪破心房,当时未发 现以至术后大出血,1只麻醉死亡.整个手术过程为(64.5 ?2.0)min,其中心肌缺血时间为(36.5?3.0)rain. 3讨论 1964年Abott…设计出大鼠异位心脏移植模型,该术 式横断了受体腹主动脉和下腔静脉,引起双下肢瘫痪和尿 滁留.1980年Fox设计出了单个主动脉端端吻合的大鼠 腹部异位心肺联合移植术式,后经Lee加以改进.同济医 科大学的陈忠华在Lee术式的基础上进一步加以改良. 在此基础上,又有许多实验者对本术式进行了改进.. 改良的Lee术式无须显微放大设备,整个手术可由单人直 接在肉眼条件下完成.该法操作简单,成功率高,是进行 移植心脏排斥反应机制,诊断,治疗和预防,以及心肌保 护,心脏保存以及移植心缺血再灌注损伤等多方面研究比 较理想的动物模型.Lee氏模型其移植心脏的循环特点 为:受体腹主动脉一一供体胸主动脉一左心室一冠脉一右 心房一右心室一肺动脉一右肺;肺静脉一一左心室受体一 腹主动脉.移植心有充分的血液供应而左室并不射血,移 植心相当于有血液供应的能节律性收缩的肌性器官. 通过大量的预实验,结合查阅了大量资料,总结经验 如下:(1)剪口,先用9—0的无损伤线针纵向缝起1针,向 上挑起后用显微弯剪剪除,血管侧壁即形成椭圆形口易行 操作,且因剪出的为椭圆形口,与动脉45.角剪出的椭圆形 口相对,不易形成漏血口.而按参考文献,先直接剪一 小口再纵向扩大,角部缝合时易形成漏血口.而使用尖刀 片切口常常是仅能将其外膜划开.(2)缝合主动脉时,将 带双针的无损伤线从中截为两段,分别各用1根将供心动 .然后自一 脉和受体的腹主动脉切口对角缝合2针,打结 端起用缝合固定角部的线在前壁做连续缝合,缝至另一端 行套缝后打结.再将其翻转,用另一端固定角部的线在另 一 侧的前壁做连续缝合.针距0.5—0.6mm,边距 0.5mm,每边缝合6—8针.针对缝合易缝闭的问题,可各 在两边缝合至最后3,4针时,先暂不拉紧缝线,以便能看 到血管内部情况,避免缝至对侧壁,特别是缝合至近心端 时应尤为注意,缝完最后1针后再将缝针自后向前一一拉 紧,此法可有效减少缝闭的可能性.因一旦缝闭,极难再 行纠正,手术多宣告失败.应尽量减少加针的次数,松阻 断夹后因漏血而加针,而完成加针后却出现缝闭的例子也 时有出现.(3)在供心保护方面,曾按文献所述使用冰 袋,发现影响手术视野,且来回换取麻烦,不利于心肌保 护且耽误时间.而直接采用冰纱布即能收到良好效果,且 易于更换.还发现使用冰林格氏液似比冰生理盐水更有 利于保护心肌,此效果尚待进一步证实. 此外,正式实验前大量的预实验来练习血管的缝合技 术非常重要,不但可以提高缝合的质量,减少在缝合中加 针,预实验时常常出现松阻断夹后因漏血而加针,而完成 加针后却发现缝闭的例子,也可以提高缝合的速度,减少 供心的缺血时间. 术后,曾按照文献所述采用自腰静脉补液,发现腰 静脉过于细小,肉眼缝合补液不易实行,且易造成腰静脉 周围组织的水肿.经实验发现,使用5号头皮针直接自下 腔静脉补液简便易行,效果良好,补完液用湿生理盐水棉 签按压扎针处30S即可止血,不必担心针头过大导致出血 问题. 参考文献 1AbottCP,LindseyES,Creeech,eta1.Atechniquefor heaatransplantationintherat[J].ArchAurg,1964,89; 645—8. 2FoxU.Atechnicalmodificationofhean—lungtransplan- tationinratsIJI.JMierosurg,l980,1:377. 3陈忠华,何藕聪,钟妙英,等.改进的大白鼠同种异位心 脏移植术[J].中华器官移植杂志,1982,3(1):38. 4张晓慎.吴若彬.大鼠腹腔心脏异位移植模型的改进 [J].解剖学研究,2008,(06):452—454. 5RubinY,SkuteskyE,AmihaiD,eta1.Improvedhypot— hermicpreservationofrathea~sbyfurosemide[J].JTho— racCardiovascSurg,1995,110(2):523,531. 6王约青,沈承澜,金庆元.大鼠腹腔内心脏移植模型 制作成功关键因素[J].临床和实验医学杂志,2009, lO(02):3,5. 7张晓慎,吴若彬.供心保存研究中大鼠心脏异位移植 模型的制作[J].实用医学杂志,2008,(16):2754, 2756. 8杨帆,王为忠.大鼠心脏移植模型的构建及改进[J]. 中国康复理论与实践,2007,13(1O):926,927. (收稿日期:2010—02一lo)