中华鳖皮肤溃烂病的病原研究

中华鳖皮肤溃烂病的病原研究 1998年4期(总第45期)重庆水产 中华鳖皮肤溃烂病的病原研究 ,『酬 蓉 4o246o)(四Jl1盲牧兽医工程系 5{叼. 摘要:从病鳖肝脏,颈,腿部皮肤溃烂处分离得到菌株m一3,m一6,卜8,J一1O棒 细菌.经 人工感染试验证明这四株菌为鳖皮肤溃拦病的病原苗.对苗体形特征,培养特性和 生理化反应 )M一3,M一6O为痒根的鉴定证明J一8,J—lO,为温和气单胞菌(Ae舢伽80b由 氏菌(M唧ne?a mw). 关键词:皮肤溃拦病病愿中华鳖 中华鳖皮肤溃烂病是在我国大部分鳖养 殖区流行的危害性较大的一种传染性疾病. 患病的鳖表现为体表,颈部,四肢,腹甲处有 出血,肿胀,直到出现化脓性溃烂等病兆,严 重者可引起鳖死亡.通过病原茵的分离鉴 定,致病性感染试验,药敏试验等研究工作确 定该病的病原及病因,为采取有效和防治措 施提供理论依据. 1.材料与方法 1.1材料试验于l997年l510月进 行,病鳖和健康鳖分别来自重庆,成都的鳖养 殖场.健康鲫鱼由本院渔场提供.病鳖每只 体重为20o一300克,健康鳖每只体重为40 5O克,鲫鱼每尾体重为3040克. 1.2病原分离无菌条件下分别取病 鳖的肝脏,颈部,腿部溃烂组织少许,在自行 配制的普通营养琼脂培养基上平板划线分 离,28?恒温培养24小时.选取优势单个菌 落再次进行平板划线,直至获得纯培养菌株. 1.3病原菌鉴定按常规进行菌形态 观察和生理生化特性测定,生化测定管为浙 江军区后勤部卫生检验所的产品.补充生化 试验按朱忠勇《实用医学检验学》一书进行, 并按照《伯杰氏细菌鉴定手册》第八版进行病 原菌鉴定. 1.4致病性试验将从病鳖中分离出 来的菌株分割接种在营养肉汤中培养24小 并作倍比稀释.用倾注平 时,村成细菌悬液, 板法测定每毫升细菌数.每个菌液剂量每尾 鱼或每只鳖馥腔注射0.2w.1,对照组则注射 0.2w.1生理盐水.每个菌株注射健康鲫鱼5 尾,健康鳖2只. 1.5药敏试验按常规方法对分离出 来的病原菌作药敏试验.药敏纸片为浙江军 区后勤部卫生防疫检验所的产品. 2结果 2.1病原菌的分离鉴定 分别从病鳖的肝脏及颈部溃烂处分离到 四株细菌,接种的细菌在营养琼脂平板上培养 后,可见蔼落圆形,傲凸.表面光滑,湿润,边缘 整齐.灰白色,半透听,直径l一3H甜l.从肝脏 分离两株病菌J一8.J一10均为革兰氏阴性短 杆菌两端钝圆.乖荚膜和芽孢,极生单鞭毛. 经形态特征及生理生化鉴定为温和单胞菌 (ml删肿硼8$.bia).从劲部溃烂处分离的两株 病菌m一3,m一6均为革兰氏阴性杆菌,无荚 膜和芽孢,有鞭毛,经形态特征及生理生化鉴 定为摩根氏菌(?罾?ella|m替?1ii). 重庆水产l998年4期(总第45期) 四株分离菌生理生化特性鉴定结果见表 表14株分离菌株的生理生化特性鉴定 菌株 鉴定项目 J一8J—lOM一3M一6 O/F试验FFFF 氧化酶+ 特氨酸水解酶 赖氨酸脱搜酶 鸟氨酸脱貌酶 苯丙氨酸脱氨酶 葡萄糖产气 ,蔗糖+一 乳塘'? 麦芽糖+ 水杨苷 肌醇 甘露醇 侧金盏花醇 山梨醇 6%NACL~ 枸橡酸盐 丙二酸盐 (s)硫化氧 尿素^ :, V—P试验+ 靛基质+'+ 2.2致病性试验 用分离的J.8株和M一6株菌分别接种 感染健康鲫鱼和鳖,出现与自然病变基本一 致的症状,其胸腹鳍基部或颈部及腹甲处体 表充血,随病情恶化,有的鳖表皮溃烂,解剖 后可见内脏充血肝脏肿大,土褐色.J一8株 细菌数为5.3x107个/ml,注射后5小时鲫鱼 开始亡,48小时内全部亡;鳖2天后开 始发病,病逐渐加重M一6株细菌数为7.0 /ml.注射后lO小时鲫鱼开始死亡, ×1个 48小对内全部死亡,鳖3天后开始发病,病 情也逐渐加重.对照组观察l周全部健康活 泼. . 2.3药敏试验 药敏试验结果见表2.J一8对氧氟沙 星,诺氟沙星高度数感;对环丙曲星,妥布霉 毒,丁胺卡那霉毒敏感;对庆大霉素,鲤霉素, 壮观霉索,多粘菌塞磺胺癌啶麝特灵,青霉 素不敏感.M一6,M一3对氧氟沙星,诺氟沙 基,环丙沙星高度敏感;对妥l布霉繁,多粘菌 紊敏感;对于胺卡霉索,庆大霉素,l红霉素, 壮观霉素,磺胺嘧嚏痢特灵,昔霉素_不敏感. 衰_2株绑菌葑试验结粜 药一物.名.称抑茸环声犟(一 J一8M一3M一6 青霉素OOO 庆大霉索O0O 丁胺卡鄢霉素l2O0 赶霉素Od0 壮观霉素.0dO 氧氟涉星2020'2l 诺氟抄星202020 环丙沙星l422 袅胺嘘靛OO0 癣特是OO0 妥布霉素lOl1l0 参枯菌索Olol0 3讨论与小结 3.1中华鳖皮肤荤烂病常因多种原因 1998年4期(总第45期)重庆水产 如互相撕咬,交配的习性,运输和养殖过程中 的机械损伤等引起皮腱破损,而后触不干净 的水体感染病菌所至.目前已从患皮肤溃烂 病的中华鳖中分离到气单胞菌,假单胞菌和 无色杆菌等多朴细菌,其中以气单胞菌为主 要致菌….中华鳖所患的疖疮病,穿孔病,败 血症,红底板病,红脖子病等中分离到的病原 主要为嗜温运动气单胞菌类Ll?2?,,该菌群 可分为嗜水气单胞菌,温和气单胞菌,隔鼠-气 单胞菌,其致病机理是毒力因子外毒索即 HEC毒素(溶血素,肠毒索,细胞毒索)的作 用导致疾病的流行发生和引起死亡'3l.本 次试验以患皮肤溃黼的鳘的肝脏中分离到 的病原菌温和气单胞苗,而上述多种传染性 细菌病也是从肝脏中分离到气单胞苗据研 究肝脏是机体清除毒素的器官.l也是阻止毒 素进^体循坏的熏要防御屏障.大蟹致精菌 存在于肝脏其释放毒素可髓弓f起肝脏的菩种 病理变化,出现肝肿失,广泛性炎症.鼾实质 细胞坏E等.造成肝脏持续性损害.气单胞 菌毒素的溶血过程包括结合一聚合一裂解三 个步骤.毒素形成聚合体后插入红细胞膜形 成细小孔洞.导致红细胞裂解州.由此造成 内脏器官的组织损伤和广泛牲出血以及红细 胞碎裂,溶解为主的溶血性贫血引发败血 t症【lJ.据这是中华鳖皮肤溃烂能够造戚 鳖陆续死亡的主要原因. 3.2从鳌皮趺溃烂处分离到肠杆菌科 细菌一摩根氏菌,国内尚未见报导.孙佩芳 等从患穿孔病的鳖体中分离到普通变形菌. 该菌可引起鱼类靖和头部溃烂及虾红腿病 等,据报导该菌从体表损伤部位入侵,进^血 淋巴循环系统,引起败血症【4J.摩根氏菌属 原来也属于变形杆菌属,现单独列为一个菌 属.只有1个菌种即摩根错苗?.摩根氏苗 和变形杆菌一样.存在于泥土,行水中,为条 件致病菌.据推测其致病原因可能是引起败 血疰. 3.3本试验分离的两种菌表现出对新 一 代抗菌素药物(如氧氟沙星等)高度敏感或 敏感.而对生产上使用较多的一些抗菌蓊聊 如庆太霉素,磺胺嘧啶,痢特灵不敏感.据分 析因该鳖场为防治鳖病曾广泛施用磺胺嘧 啶,痢特灵等多种抗苗药物,且用鼍大,次数 多.可能使分离菌对选些经常使用的药物产 生了抗药性,从可降低了该药物的抑菌效果. 这在生产土应引起足够的重视.不应滥用药 物,尽可能轮换使用疗效好真有同一治疗效 果盼不同药物.尤其要注意控嘲永质,创造 良好的生态环境进行鳖的健康莽殖,以根率 上防止痰病的发生一 -本文的完成得到攀院生物技术中心黄 特此致谢. 伟,椽刚老师的大力支持. 参考文献 I.中国科院水生生物研究所鱼病学研究室 编着,鳖的防病养殖.中国科学技术出版社.19卯,91 — 92.. .2.王永坤等.甲盘暴发性传染病的病原研究, 鱼类病害研究,l9.19'12):l8,抖 3.王永坤等.温和气单胞菌翱噜水气单胞菌致 病力的比较研究,鱼类病害研兜,1997,l9(12):7.5 —28 4.孙瓤劳等.麓穿孔病的病原研究.球产. 1996.20(2):I2D一12.5 5l朱忠勇,实用医学检验学,人民军医出版杜, 199"2,632—634 6.陆宏达卑,鳌嚼水气单胞茁败血症的研究, 水产.1996.2o(3)!描-234 7.陆霉平辣痈性嗜木气单施菌及其所至鱼病 综述.水声.I992,16(2):282—288 8.阵怀膏,嗜水气单胞菌外毒索研究进展.国 l外医学镘生物学分册.1992,15(6):2.56—2蜘: