乌苯美司在犬体内的药动学和绝对生物利用度

乌苯美司在犬体内的药动学和绝对生物利用度 乌苯美司在犬体内的药动学和绝对生物利 用度 中国医药工业杂志ChineseJournalofPharmaceuticals2006,37(4) 乌苯美司在犬体内的药动学和绝对生物利用度 葛庆华?,马丽丽:,支晓瑾?,周臻?,陈秀华 (1.上海医药工业研究院,上海200437;2.上海普洛康裕药物研究院有限公司,上海201314) 摘要:建立了RP—HPLC法在258nm测定犬血浆中乌苯美司的浓度,方法定量限为0.625~g/ml,曰内,日间差小于5.0, 平均回收率大于95.0.采用双周期自身交叉设计,在7条Beagle犬中进行口服及静脉给药的药物动力学研究,清洗期为 8d.Beagle犬静注乌苯美司200mg后的药一时曲线符合三室模犁,口服给药的cm为(31.54?5.164)~tg/n,a,为(1.50 ?0.41)h,Tl/2为(1.53?0.48)h,AUC0..,为(92.85?10.74)g.ml...?h.平均绝对生物利用度为(67.61?l1.75)%. 关键词:乌苯美司;药物动力学;绝对生物利用度;高效液相色谱 中图分类号:R969.1文献标识码:A文章编号:1001—8255(2006)04—0248—04 乌苯美司(ubenimex,1),化学名为Jv.[(2, 3R).4.苯基.2.羟基丁酰基].L.亮氨酸,具有双重 抗癌作用,能激活人体细胞免疫功能,刺激细胞因子 的生成和分泌,促进抗肿瘤效应细胞的产生和增殖. 和其他化疗药物联合用于治疗急性髓性白血病,慢 性髓性白血病,肺鳞癌,恶性黑色素瘤和胃癌等;也 可与放疗联合用于治疗鼻咽癌等;还可用于各种因 素引起的免疫功能低下症;试用于治疗骨髓发育不 良综合征及单纯红细胞再生不良症等.其剂型仅有 胶囊剂,药动学研究报道较少[??,无绝对生物利用 度数据.为此,我们研究了犬口服和静注1后的药动 学特性及绝对生物利用度,为剂型设计提供依据. 1仪器与试药 高效液相色谱仪:LC一10ADVP型泵,SPD一10A型检 测器,SIL一10AVP型自动进样器,CTO.10AVP型柱温箱和 CLASS—VP6.1型色谱工作站(岛津公司);XW.80A型旋涡混 合器(上海医科大学仪器厂);80—2型台式低速离心机及TGL一 16B型台式高速离心机(上海安亭科学仪器厂). 1对照品(浙江康裕制药有限公司),1注射液(上海普洛 康裕药物研究院有限公司,规格9.5ml:200mg);1胶囊(商 品名为百士欣,浙江康裕制药有限公司,规格30mg,批号 20030501). 乙腈,十二烷基硫酸钠(SDS)为HPLC级. 收稿日期:200511.22 作者简介:葛庆华(1963),女,研究员,从事药物分析及药物动 力学研究. Te1:021—65612448 E—mail:geqinghua@sina.tom 雄性健康Beagle犬,体重(6.97?0.88)kg(上海农学院 教学实验实习场). 2方法与结果 2.1血浆中1药物浓度的测定 2.1.1对照品溶液的配制 精密称取1对照品适量,以水制得含11mg/ml 的对照品溶液. 2.1.2色谱条件 色谱柱LuanCl8(2)(4.6mm×250mm,51.tm), 保护柱LC.18可换芯2cm保护柱(Supelco公司), 流动相乙腈.水一三氟乙酸.三乙胺(41:59: 0.15:0.1,含10mmol/LSDS),流速1.3ml/min, 检测波长258nm,进样量50gl,柱温55?. 2.1.3血浆预处理 精密取血浆200gl,精密加入含25高氯酸的 乙腈溶液5OLLl,涡旋振荡,离心(15000r/min) 5min,取上清液进样. 2.1.4专属性试验及色谱行为 1对照品溶液的色谱图见图1A;取空白血浆按 上述血浆预处理方法操作,色谱图见图1B:空白血浆外加1的色谱图见图1C;犬使用药物后的色谱图 见图1D.由图可见各峰分离良好,1的保留时间 约为12.4min,无内源性物质干扰. 2.1.5标准曲线及检测限 取空白血浆加入1对照品溶液适量,得含1为 2OO,10O,5O,25,1O,5,2.5,1.25, O.625gg/ml的血样.按"2.1.3"项下方法处理后 中国医药工业杂志ChineseJournalofPharmaceuticals2006,37(4) 0.002 0.000 0.002 0.000 O.O5.O1O.O15.O2O.O t/min 0.05.01O.O15.O2O.O t/min A:1对照品(401.tg/m1),B:空白血浆,C:空白血浆加1(25~g/m1),D:犬口服I200mglh 后血浆 l一1 图1血浆样品色谱图 进样,采用外标法峰高定量.以样品浓度(c)对样mA 品峰高()进行加权最小二乘法计算标准曲线,权 重因子为1/c2,得回归方程:H=0.7729+47.34C (,2=0.9999),表明在0.625~200ktg/ml浓度范围内 线性关系良好.本法血浆中1的检测限为0.625~g/ml, 色谱图见图2. 表1精密度和准确度试验(,l=5) 2.1.7稳定性试验 取高,中,低浓度的1血浆样品,置一20? 冰箱冻结后取出,室温放置融化,如此反复冻融3 次,按"2.1.3"项下方法处理后测定,结果表 明样品仍能保持稳定;另取处理好的高,中,低 浓度的血浆样品5?放置24h,与新鲜配制的样品比 较.测定结果表明稳定性良好. 2.2试验设计与给药方法 7条Beagle犬随机分为两组,一组3条口服给 药,另一组4条静注给药,8d后交叉试验.分别 于试验前一天下午2时后禁食(不禁水),于次日上 午8时3O分,分别口服或静注1200mg.给药后 禁食,禁水5h. 口服:取胶囊内容物适量(相当于1200mg), 加水10ml混悬后灌入,再饮水15ml. 静注:犬后肢小隐静脉给药.一次静注9.5ml (约含1200mg). 2.3血样收集 于给药前取空白血样.口服给药的采血点为 0.33,0.67,l,1.5,2,3,4,5,6,7, 9h;静脉注射给药采血点为0.016,0.16,0.33, 0.67,1,1.5,2,3,4,6,8h.分别于上 述采血点取静脉血1ml,置含肝素离心管中,离心 (3000r/min)10min,血浆转移至塑料管中置一20? 冰箱保存,待测. 2.4药动学参数计算 口服给药的C,用实测值表示;AUCo一, 用梯形法计算,是最后一次可测浓度的取样时问. Ac0—,按下式计算,ACo—,=AUCo一,+九z. C是最后一点的血药浓度,九z是末端消除速度常 数,f.,=0.693/2~z,口服给药的绝对生物利用度 F:!r!pcloo% (AUC0)., (AUCo一,)..,(AUCo一,)i分别为口服,静注给 药药一时曲线下面积.同时对静注给药的药时数据 用3P87程序进行模型拟合. 2.5结果 7条Beagle犬口服及静注1200mg后的平均药一 时曲线见图3,口服给药的主要药动学参数见表2. 用3P87软件对7条Beagle犬静注1的血药浓度经时 数据进行拟合,确定其符合三室模型,主要药动学参 数见表3,以梯形法计算的AUCo一,为(139.9? 21.61)g?mI一h,AUCo一..为(143.4?19.98) g.m-.h.AUCo一,及Ac0—,经对数转换后进行 方差分析及双单侧f检验,结果显示1口服给药的 AUC显着小于静脉给药(P>0.05),口服给药的绝 对生物利用度为(67.61?11.75)%(n=7). 4讨论 本研究首次报道了1静脉给药的药动学特性及 口服给药的绝对生物利用度,对于注射剂等其他剂 中固医药工,杂志ChineseJournalofPharmaceuticals2006,37(4) 200 l60 jl20 ? 80 40 0 5l0 h ?一}J服:?一静注 图37条犬口服及静注1200mg后的平均药一时曲线 表2Beagle犬口服给药的主要药动学参数 表3Beagle犬静注1后主要药动学参数 参数? 6.957?3.5450 9l435?3.6590 0.2699?0.42l8 0.7862?0.6826 1.4l94?0.3362 0.044l?0.0l27 0.66l3?0.243l 1.4l60?0.509l 1.09l2?0.463l 1.4288?0.2l8l 型的开发具有一定指导意义. 1在258nm处的E-仅为6.0,摩尔吸收系数 小,紫外检测灵敏度低,因此生物体液中药物的测 定难度较大.文献…1采用GC—MS法,须经提取, 浓缩和衍生化;文献须将1氧化成醛后与荧光试 剂反应,再进行RP—HPLC荧光检测,灵敏度为 0.2p.g/ml;另有放射免疫方法报道.这些方法都 需要特殊的仪器和试剂,成本较高.本研究建立的 方法采用常规HPLC仪器,血样处理简单易行,无 需提取,浓缩和衍生化;由于蛋白沉淀时采用高 效的高氯酸一乙腈溶液,样品稀释效应小,灵敏度 达0.6251ag/ml;另外,本法一次测定仅需200p.1血 种帆,砌‰ 中国医药工业杂志ChineseJournalofPharmaceuticals2006,37(4) 样,适于动物药物动力学研究. 参考文献: [1]KoyamaM,HashimotoM,AsakawaN,etalSimultaneous determinationofbestatinandP_hydroxybestatin,amajor metabolite,inhumanserumbygaschromatographymass spectrometry.Utilizationofquantitativeselectedionmoni— toringanddeuteriumlabeledinternalstandard[J].Biomed MassSpectrom,1980,7(9):372—376. [2]AbeAlvordG,KoyamaM,eta1.Pharmacokineticsof [3] [4] ? 25l? bestatinandoralactivityfortreatmentofexperimental metastases[J].CancerlmmunolImmunother,1989,28(1): 33. 29— IshidaJ,YamaguchiM,KaiM,eta1.Determinationofbestatin inserumbyhigh—performanceliquidchromatographywith fluorescencedetection[J].JChromatogr,1984.305(2):381— 389. KoyamaM,WatanabeN,AsakawaN.Radioimmunoassayfor ubenimexinhumanserum[J].JPharmBiomedAnal,1992, lO(2—3):l37—140. PharmacokineticsandAbsoluteBioavailabilityofUbenimexinBeagleDogs GEQing—Hua,MALi—Li,ZHIXiao—JinI,ZHOUZhen,CHENXiu—Hua (1.ShanghaiInstituteofPharmaceuticalIndustry.Shanghai200437; 2.ShanghaiApeloaPharmaceuticalResearchInstitute,Shanghai201314) ABSTRACT:UbenimexindogsplasmawasdeterminedbyRP— HPLCwithdetectionwavelengthof258rim.Thelimitof quantificationforubenimexwas0.625gg/ml,theintra-andinter— dayDswerelessthan5.0%.andtheaveragerecoverywas above95.0%.Accordingtoarandomizedtwo— periodcrossoverdesign.sevenbeagledogswereadministratedbyivandpo 200mgubenimex.respectively.witha8一 daywashout.Thepharmacokineticsbehaviorofubenimexivcouldbedescribedby athree—compartmentmode1.ForpD,(1m"(31.54?5.164)gg/ml,Tmax(1.50? 0.41)h,fl,2(1.53?0.48)h,AC一,(92.85? 10.74)g?mrh.Theabsolutebioavailabilityofubenimexforpowas(67.61?l1.75)%. Key肋rds:ubenimex;pharmacokinetics;absolutebioavailability;HPLC ??????????????I (上接第233页) 参考文献: [1]苑可武,白芳,杨波,等.甘草酸的提取和精制法概述[J]l 中国医约工业杂志,2002.33(7):362—364. [2]李晓光,翟所迪.甘草酸单铵盐脂质体的试制及稳定性研究 [J]中国医约工业杂志,2004,35(4):222—224 [3]彭子模甘草次酸及其衍生物的研究现状和展望[J]_中医约 学报,1998,26(1):32—35. [4] [5] [6] ????a?????? 蒋丽媛,陈莉,张奕华.(2一乙酰氧基)苯甲酸(3一硝氧甲基) 苯酯的合成工艺改进[J].中国药物化学杂志,2004,14(3): l78一l79. 吴庆安.阿维菌素Bl和井冈霉素衍生物的合成及其生物活 性研究[D].浙江:浙江大学,2004. 盛永莉,朱正方.4.甲氨基吡啶的合成与应用研究[J].化 学世界,l997,38(10):528—529. StudiesonSyntheticMethodsofN-AcetylGlycine—glycyrrhetinicAcidEsterbyHPLC YANGXiao—Hui,LIULi.Jun,DAIXiao.Jun (CollegeofChemistryandChemicalEngineering,NingxiaUniversity,~nchuan750021) ABSTRACT:N-Acetylglycine— glycyrrhetinicacidesterwassynthesizedbyN-acetylglycineandglycyrrhetinicacid inCH2CI2inthepresenceofDCC/DMAPunderthreedifferentconditionsrespectively:stirringat18~C, refluxingat40~C, refluxingat40~Cunderultrasonicradiation.ThereactionspeedofesterificationwasdetectedbyHPLC.Theresultsshowed thattheyieldofesterwashigherunderthelastconditioninshorterreactiontime. KeyWords:N-acetylglycine—glycyrrhetinicacidester;ultrasonicreflux;HPLC