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乳酸杆菌体外对大肠埃希菌O_78拮抗作用试验_cropped

2017-11-15 6页 doc 33KB 42阅读

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乳酸杆菌体外对大肠埃希菌O_78拮抗作用试验_cropped乳酸杆菌体外对大肠埃希菌O_78拮抗作用试验_cropped 1 1 1 2 2 张辉华,曹永长,毕英佐,胡文锋,方祥 () 11 华南农业大学动物科学院 ,广东 广州 510642 ;21 华南农业大学食品科学院 ,广东 广州 510642 摘要 目的 :研究乳酸杆菌体外对大肠埃希菌 O278 的拮抗作用 。方法 : 将乳酸杆菌与大肠埃希菌 O2 78 体外共培养观察拮抗情况及用电镜观察形态变化 。结果 :等量同时间接种 ,24 h 内乳杆菌就将大肠埃希 菌 O278 全部抑杀 ;乳酸杆菌早 24 h 接种 ,4,8 ...
乳酸杆菌体外对大肠埃希菌O_78拮抗作用试验_cropped
乳酸杆菌体外对大肠埃希菌O_78拮抗作用试验_cropped 1 1 1 2 2 张辉华,曹永长,毕英佐,胡文锋,方祥 () 11 华南农业大学动物科学院 ,广东 广州 510642 ;21 华南农业大学食品科学院 ,广东 广州 510642 摘要 目的 :研究乳酸杆菌体外对大肠埃希菌 O278 的拮抗作用 。方法 : 将乳酸杆菌与大肠埃希菌 O2 78 体外共培养观察拮抗情况及用电镜观察形态变化 。结果 :等量同时间接种 ,24 h 内乳杆菌就将大肠埃希 菌 O278 全部抑杀 ;乳酸杆菌早 24 h 接种 ,4,8 h 内将大肠埃希菌 O278 全部抑杀 ; 大肠埃希菌 O278 早 24 h 接种 ,在 12,24 h 内全部被抑杀 。电镜观察发现 ,经乳酸杆菌培养液处理 ,大肠埃希菌 O278 细胞膜形态发 生变化 。结论 :本试验中所用乳酸杆菌体外具有抑制杀死大肠埃希菌 O278 的作用 。 关键词 :乳酸杆菌 ;拮抗作用 中图分类号 : R378 文献标识码 :A STUDY O N ANTA GO NISM TOWARD ES C H ERI C HIA COL I O278 BY LAC TO2 BACILL US IN VI TRO ZHANG Hui2hua ,CAO Yong2chang ,B I Ying2zuo , et al1 ( )College of Animal Science , South China Agriculture University , Guangzhou 510642 , China () Abstract :Objective :To investigate whether there is antagonism of L actobacillus LABtoward E. coli O278 in ivtro or not . Method :LABs and E. coli O278 were cultured together ,then observed the survive of E. coli O278 and the bacte2 rial cells morphology alteration by TEM. Results :Inoculated LABs and E. coli O278 at same time and volumes , E. coli O2 78 were killed in 24 h. E. coli O278 were killed in 4 to 8 h and 12 to 24 h ,respectly ,when inoculated LABs 24 h earlier or later than E. coli O278. When E. coli O278 exposed to LAB culture supernatant ,an altered cell membrance morpholo2 gy was observed by TEM. Conclusion :The LABs used in this study had the ability of antagonism toward E. coli O278. () Key Words :L actobacillus LAB;Antagonism 畜禽大肠埃希菌病是畜牧业生产中常见传染病 大肠杆菌 O278 存活情况 ,当大肠埃希菌 O278 被抑 之一 ,对集约化养殖业危害极大 。血清型 O78 属致 杀后测培养基 p H 值 。 病性产肠毒素性大肠埃希菌 ,是引起大肠埃希菌病 () 11213 取 MRS 液体培养基 p H6183 支 ,分别接种 重要血清型 。生产上由于大肠埃希菌耐药情况非常 μ乳酸杆菌 O22 、1F13 、1557 100 l ,37 ?培养 24 h 后 , 严重 ,给临床治疗此病带来困难 。乳酸杆菌是畜禽μ分别接种大肠埃希菌 O278 200l/ 支再培养 ,取 4 、8 、 肠道内主要的正常菌群 ,具有抗感染 、免疫刺激等许 12 、16 h 的培养液倒麦康凯琼脂平板 ,检查拮抗情况 。 多生理功能 。本试验体外研究乳酸杆菌对大肠埃希 () 11214 取 MRS 液体培养基 p H6183 支 ,接种大肠 菌 O278 的拮抗作用 ,以期为乳酸菌用于预防治疗大 μ杆菌 O78 100l/ 支 ,37 ?培养 24 h 后 ,分别接种乳酸 肠埃希菌病提供理论依据 。 1 材料与方法 μ杆菌 O22 、1F13 、1557 200l 再培养 ,取 12 、24 、48 h 的 111 试验材料培养液倒麦康凯琼脂平板 ,检查拮抗情况 。 11111 菌种 乳酸杆菌 O22 、1F13 、1557 自健康鸡粪 11215 体外抑菌透射电镜试验 参照 Marie2Helene便分离 ; 大肠埃希菌 O278 ,购自中国兽药监察所 ,本 1 ,2 Coconnier 等人的实验方法进行 。用乳酸杆菌 O2 实验室保存 。 2 培养后 ,离心取上清液 1 ml ,加入到 3 ml 浓度为 111112 培养基 MRS 培养基 ; 麦康凯琼脂平板 ; 普 8 ×10 个/ ml 的大肠埃希菌 O278 试管中 ,37 ?,孵育 通肉汤 ;营养琼脂 。 2 h ,然后在 5 500 g 下 4 ?离心 10 min ,用 PBS 液洗涤 112 实验方法 ( ) 1 次 , 取 沉 淀 , 用 磷 钨 酸 盐 2 %负 染 , 切 片 用11211 取各菌种分别接种在合适培养基中活化 ,调 9 节成 2 ×10个/ ml 。 Philip sEM2400 机在 60 Kv 下进行观察 。 () 11212 取 MRS 液体培养基 p H618试管 3 支 ,分别 2 结果 μ接种乳酸杆菌 O22 、1F13 、1557 100 l ,同时再分别接 211 同 时 间 等 量 接 种 的 拮 抗 效 果 结 果 见 表 1 。 μ种大肠埃希菌 O278 各 100 l ; 设大肠埃希菌单独培 从表 1 中可知乳酸杆菌与大肠埃希菌 O278 混合培 养管作对照 。在恒温培养箱中 37 ?培养 。取培养养 24 h 后 ,大肠埃希菌 O278 全部被抑杀 ,培养液此 24 、48 、72 h 的培养液倒麦康凯琼脂平板 ,检查 时 p H 值在 314,317 范围内 。对照组培养 72 h 后 , 收稿日期 :2002205224 大肠埃希菌 O278 仍存活 。( ) 作者简介 :张辉华 19712, 男 , 在读博士研究生 , 研究方向为动物营 212 不同时间接种的抑菌效果 结果见表 2 。从养与免疫 表 2 中可看出 ,当乳酸杆菌先培养 24 h ,然后接种大 24 h ,然后接种乳酸 被抑杀 。当大肠埃希菌先培养 肠埃希菌 O278 共培养 8 h 后 ,大肠埃希菌 O278 完全杆菌共培养 24 h 后 ,大肠埃希菌 O278 完全被抑杀 。 表 1 乳酸菌株与大肠埃希菌 0278 一起接种拮抗效果 (μ)( )细菌接种量 l 培养基 培养不同时间 O278 存活情况 h O22 1F13 1557 O278 24 48 72 p H 值 100 100 - - - 3145,3155 100 - - - 3157,3167 100 100 - - - 100 3156,3169 100 + + + ND 注 :单独接种 O278 组为对照 ; + 表示存活 ; - 表示无菌存活 ;ND 表示没测 表 2 不同时间接种的抑菌试验结果 (μ(μ))( )早 24 h 接种菌量 l 迟 24 h 接种菌量 l 培养不同时间 O278 存活情况 h O22 1F13 1557 O278 O22 1F13 1557 O278 4 8 12 24 48 200 + - - - - 100 100 200 + - - - - 100 200 + - - - - 100 200 + + + - - 200 100 + + + - - 100 200 + + + - - 注 :单独接种 O278 组为对照 ; + 表示存活 ; - 表示无菌存活 ; 213 透谢电镜试验结果酸杆菌对大肠埃希菌 O278 都能产生拮抗作用 。与 3 4 1 ,2 史同瑞等、程茜等、Coconnier 等人的研究报 道结果相一致 。但在具体的抑制杀菌时间上有些不 3 同 。史同瑞等研究报道的抑制杀菌时间发生在混 合培养 24,48 h 左右 ,本研究在 24 h 前就发生抑制 杀菌作用 ,原因可能与所用菌株生长代谢状况有关 。 本研究所用菌株生长速度很快 ,产酸能力很强 ,根据 测定 ,生长 6,8 h 培养液 p H 值就降到 315 左右 ,最 ) ( 低达 311, 312 数据没列出。对大肠埃希菌 O278 ( )图 1 大肠埃希菌正常形态 ×30 000 抑制杀死作用很快很强 ,也就不足以为奇 。通过电 镜观察可看出乳酸杆菌培养后菌液使大肠埃希菌 1 O278 细胞膜形态发生变化 ,与 Coconnier 等人的实 2 验结果相似 。Coconnier 等还发现幽门螺旋杆菌经 LB2SCS 处理后 ,发生卷曲 ,然后变成球形 。 因此通过本研究 ,我们认为本实验用乳酸杆菌 可以对大肠埃希菌产生抑制并杀死作用 ,对用于临 床防治大肠埃希菌病提供了新思路与理论依据 。 ( ) 图 2 乳酸杆菌液 022 处理后大肠埃希菌形态 ×14 000 参考文献 : 1 Coconnier MH , Lievin V , Marie2Francoise Bernet2Camard , et 为了研究乳酸杆菌代谢产物对病原菌作用后病 al1Antibacterial effect of the adhering human Lactobacillus acidophilus 原菌形态学的变化 ,本实验通过电镜试验来观察 ,结 () strain LBJ 1Antimic Agent Chemother ,1997 ,41 5:1046210521 果如图 1 、2 。经乳酸杆菌培养液处理后 , 大肠埃希 2 Coconnier MH ,Lievin V , Hemery E , et al1Antagonistic activity against 菌 O278 菌体发生弯曲变形 、缩小等变化 ,与正常情Helicobacter infection in vitro and in vivo by the human Lactobacillus aci2 () () 况完全不同 ,与 Coconnier 等人 1997用 LB2SCS 处理 dophilus strain LBJ 1Appl Environ Micriol ,1998 ,64 11:4573245801 3 史同瑞 ,刘文韬 ,王铭杰 ,等 1 三株微生态菌对鸡致病性大肠埃希 鼠伤寒沙门菌 37 ? 2 h 结果相似 。 () 菌的体外抑制试验J 1 中国兽医科技 ,1999 , 9:182201 3 讨论程茜 ,刘作义 1 双歧杆菌体外对 STM 拮抗作用的实验研究 J 1 4 () 中国微生态学杂志 ,1999 , 21 从本研究结果可看出乳酸杆菌与大肠埃希菌共 培养后 ,不管是同时接种或先后不同的时间接种 ,乳
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