小鼠双氢睾酮酶

小鼠双氢睾酮酶 本试剂盒仅供研究研究使用 产品编号：E0443m ELISA法定量测定小鼠血清、血浆、细胞培养物上清或其它相关液体中DHT含量。 睾酮在其靶器官（如附睾和前列腺）内，被5a-还原酶还为双氢睾酮，再与靶细胞内的受体结合 而发挥作用, DHT可诱导男性外生殖系统诸如阴囊和阴茎的发育。 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中DHT水平。用纯化的抗体包被微孔 板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入DHT抗原、生物素化的抗小鼠DHT抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝 色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的DHT呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。 1. 酶联板：一块（96孔） 2. （冻干品）：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，其浓度为100pg/mL，做系 列倍比稀释后，分别稀释成50 pg/mL，25 pg/mL ，12.5 pg/mL，6.25pg/mL，3.12pg/mL， 1.56 pg/mL，15.6 pg/mL，样品稀释液直接作为浓度0 pg/mL，临用前15分钟内配制。 3. ：1×20ml/瓶。 4. A：1×10ml/瓶。 5. B：1×10ml/瓶。 6. A：1×120μl/瓶（1：100）临用前以A1：100稀释。 7. B：1×120μl/瓶（1：100）临用前以B1：100稀释。 8. 溶液：1×10ml/瓶。 9. 浓：1×30ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。 10. ：1×10ml/瓶（2N H SO4）。 2 1．细胞培养物上清：请离心后收集上清，并将标本保存于-20?，且应避免反复冻融。 2．血清：标本请于室温放置2小时或4?过夜后于1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20?保存，但应避免反复冻融。 3．血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8? C 1000 x g离心15分钟，或将标本放于-20?保存，但应避免反复冻融。 各试剂在使用前平衡至室温。 1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。除空白孔外，余孔分别加或待测样 品100μl，轻轻混匀，37?，120分钟。 2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。 3. 每孔加A 100μl，37?,60分钟。洗板3次，350μl/每孔，甩干。 4. 每孔加B 100μl，37?，60分钟，洗板5次，甩干。 5. 依序每孔加90μl，37?避光显色30分钟。 6. 依序每孔加50μl，终止反应。用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。 SO4。2： 测量时先用此孔调OD值至零。 1． 每次实验留一孔作为空白调零孔，该孔不加任何试剂，只是最后加底物溶液及2NH2．为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内。 手工洗板方法：吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层 吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将推荐的洗涤缓冲液至少0.4ml注入孔内，浸泡1-2分钟，根据需要，重复此过程数次。 自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。 本试剂盒可同时检测重组或天然的小鼠DHT，且与其它相关蛋白无交叉反应。 以标准物的浓度为横坐标（对数坐标），OD值为纵坐标（普通坐标），在半对数坐标纸上 绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物 的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 1． 洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性。 2． 一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。 3． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。 4． 如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请最后乘以稀释倍数。 5．在配制标准品、检测溶液工作液时，请以相应的稀释液配制，不能混淆。 6．底物请避光保存。 15.6 pg/mL -1000 pg/mL 1．试剂盒保存：-20?（较长时间不用时）；2-8?（频繁使用时）。 2．有效期：6个月 3．浓洗涤液会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。 4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影 响。 5．中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。