CYP2A6基因多态性对丙戊酸钠血药浓度的影响

CYP2A6基因多态性对丙戊酸钠血药浓度的影响 CYP2A6基因多态性对丙戊酸钠血药浓度 的影响 2006年11月第39卷第ll期ChinJNeurol,November: CYP2A6基因多态性对丙戊酸钠 血药浓度的影响 孙妍萍谭兰宋敬卉 【摘要】目的探讨细胞色素P4s.2A6(CYP2A6)基因多态性对丙戊酸钠血药浓度的影响. 方法选择单药服用丙戊酸钠的癫痫患者98例,应用巢式PCR(nested—primerpolymerasechain reaction)方法分析其CYP2A6基因型,分析等位基因CYP2A6{1及CYP2A64;同时应用荧光偏振 免疫法(FPIA)测定患者丙戊酸钠的血药浓度.结果98例患者中CYP2A6基因型为1/1者73 例(74.5%),{1/{4者24例(24.5%),{4/{4者1例(1.0%),根据基因型分为A组(CYP2A6{ 1/{1)和B组(CYP2A6{1/{4或CYP2A6{4/{4).B组患者丙戊酸钠的标准血药浓度平均值 (4.1393?0.2793)较A组(3.3486?0.3919)高,差异有统计学意义(P<0.05).结论CYP2A6基因 多态性影响丙戊酸钠的血药浓度,含有CYP2A64等位基因的患者应用丙戊酸钠应较常规降低用 量. 【关键词】芳基烃羟化酶类;混合功能氧化酶类;多态现象(遗传学);丙戊酸;药代动 力学 Effbct0fCYP2A6geneticpolymorphismsonserumconcentrationofsodiumvalproateSUN Yan— ping,,vLan,SONGJing— hui.DepartmentofNeurology,theAffiliatedHospitalofMedicalCollege, QingdaoUniversity,Qingdao266003,China Correspondingautho:TANLan,Email:ruthysyp@163.con 【Abstract】0bjectiveToinvestigatetheeffectofcytochromeP4502A6(cYP2A6)genetic polymorphismsonserumconcentrationofsodiumvalproate,MethodsAtotalof98epilepticpatients receivingsodiumvalproateafteraperiodofmorethan5half-timewererecruited.ThegenotypesofCYP2A6 ofthepatientsweredetectedbynested— primerpolymerasechainreaction(PCR)toexaminethealleles CYP2A6{1andCYP2A6{4.FIuorescencepolarizationimmunoassay(FPIA1wasusedtomeasurethe serumconcentrationofsodiumvalproate.Results0fthe98cases,73(74.5%)werewildgenotypes,24 (24.5%)wereCYP2A61/4genotypesandl(1.0%)wasCYP2A6{4/{4genotype.Accordingto thegenotypesofCYP2A6thepatientsweredividedintotwogroups,onewasgroupA(CYP2A6{1/{1) andtheotherwasgroupB(CYP2A6{1/{4or{4/{41.Themeanvalueoftheserumconcentrationof sodiumvalproateofthepatientsingroupA(4.13934-0.2793)washJigherthanthatingroupB(3.34864- 0.3919)withastatisticalsignificance(P<0.05).ConclusionsThegeneticpolymorphismsofCYP2A6 affecttheserumconcentrationofsodiumvalproate.Thedosageofsodiumvalproateinpatientswith CYP2A6{4alleleshouldbelowerthanusua1. 【Keywords】 Arythydorcarbonhydroxylases;Mixedfunctionoxygenases:Polymorphism (genetics);Va|proicAcid;Pharmacokinetics 丙戊酸钠是临床上常用的一线抗癫痫药物之 一 ,临床发现丙戊酸钠的用药剂量和血药浓度存在 很大的个体差异,部分患者即使应用较小剂量,其血 药浓度仍会超过有效血药浓度范围.药物的代谢主 要受药物代谢酶影响,细胞色素P铀酶(CYP)也是 丙戊酸钠的主要代谢酶.体外研究证明,CYP2C9 作者单位:266003青岛大学医学院附属医院神经内科 通信作者:谭兰,Email:mthysyp@163.corn ? 745? . 论着 和CYP2A6是丙戊酸钠生物转化的代谢酶….CYP 基因具有多态性而导致酶的活性改变,CYP2A6 基因多态性可能通过影响酶的活性而影响丙戊酸钠 的血药浓度. 和方法 一 ,研究对象 所有受试患者来自2004年9月至2005年11 月青岛大学医学院附属医院神经内科门诊单药服用 2006年J1JJ旃39壮第l1J辋ChinJNe~,1.Nm'emher2006Ll【塑L 丙戊陵钠,且无肝肾功能异常的癫瘌患者98例(男 51例,女47倒),年龄4—56岁.平均23.1岁;服用 丙戊酸钠的剂量为lO,3On?-d,,分3次 服用,服用丙戊酸钠的总疗程为5d至6年,平均 l0.1个月. 二,方法 I标率采集:在服药5个半衰期约100h后.于 清晨空腹服药前采静脉血4n其中2ml置于普通 试管中用以测定丙戊酸钠皿药浓度.另外2mJ置于 无菌无酶的EDI'A抗凝的试管中4?保存,48h内 应用J海华舜公司试剂盒提取基因组DNA 2.引物漫计根据Pubmed_?Genbank— .聚合酶链反 NGO00008,并参照Oseacson等文献 应(PCR)引物序列见表1. 表1PCR物州 7F5一C(:ACC^AC^TcccnC^I:3 8P65一C^'CAC1A^可t,AC一 85C^CC^1_rrcCT(^1(:^f:0. RI5一fTT^11-rH^(,^C^丁CAfAcAC^^.3 】垃5一^A^A'nf,(;C^TAACCCCc.3' 3.巢式PCR没计:(?PCRI应J_=f=『外引物7}' 千uRl,7F为cYP2_A7cY1A6外F7的共有序 列Rl位于CYlY2A6的外显子9F游400bp,因此 CYP2A6l和CYP2A64等位基闽都口n三{被扩 增,产物为202kbp.(2)PCIIHI需每个标本进行2 提PCI{反应,均以PCRI产物为,2次反应分 别应用内引物8F6和R2以及8和H2米进行.. 8F6为CYI~A6外显子8的特异序列,8F7为 c,1)2^7外显子8的特异序州,R2为CYP2A63端 的特异序列,因此8F6和R2增CYP'2A6l等他 基因,8和R2扩增CYP2A6$4等位基因PCR ?产物为1.24kbp(J刳1). 4巢式PCR反应条什:(I)PCRI总反应体系 20,基因组DNA0.02g.外引物7F和Rl各 0.24b~mol/1,dN]TP0.】87p.moltL.pfuDNA聚合酶 (美国Pronmga公司)1.5uPCRI反应条::94? 顶变性3rllilI,94变-45s,58退火45s.72? 延伸3min,共35个循环,最后72延伸10rain.. (2)PCR1I总反应体系2O,PCRT产物0.5.内 引物R2及8r6或8F7各0.246Lmol/I,dNTP 0.187txmol/1,pfuDNA聚合翦ll5UPCRII反应 条件:94?顶变性1ilfin,94变性45s,62?退火 45s.72延伸1.5rain,共l8个循环最后72延 bp 2000一 l000— 750— 500— 250— 1O0一 bp 一 2020 一 l240 M:标记物(TakaraDL2fRD);t,3.4,6.7—9泳滥分别备为 3倒患者的3嫩PcR广:物,【47为1CRl反成产物2,5,8 为引物8F6IR2反庹产物.即CYP2A6l;36,9为引物 8F7刊R2的反应产物,UIJCYP2A6}4I一3证寅患者因 型为C'/P2^6li1,4,6,』JcY抽4i#4,1—9为 c:YP2A6I/4 图I患者PCll产物l乜浊l{}j 伸7min 5丙戊酸钠血药浓度的测定及其标准化:应用 美同雅培公司制造的TDX快速f仃L药浓度检测仪,采 用荧光偏振免疫法(FP1A)测定阿戊酸钠的血药浓 度,为消除体重和服药剂量对血药浓度的影响,将 FPIA榆测的患者的m药浓度除以患者每F1每公斤 体蘑的服药量得到患者的标准血药浓度一 6.缆计学分析:数据采均数?标准差表示, 应用SPSSI3.0软件.纰问比较采用f捡验,P<005 认为差异有统汁学意义. 结果 l_研究对象的基因型分析:98删患者的 CYF2A6基困型为CYP2A61/1者73例 (74.5%)CYP2A61/$4者24例(245%), CYP2A64/4者l例(1.0%1,I捌4等位基 频率分别为867%和13.3% 2.c?】2A6】/l肉型与含有CYP2A64 等位基因的患曹丙戊酸钠标准血药浓度的比较:根 据上述基因分型将CYP2A6野!(即cYP2A6 l/I)的患者作为A组,含CYP2A6突变型的患者 (包括CYP2A6】/4或CYP2A64/4)作为B 组陌组的资料比较见表2两组药浓度均值比 较,差异有统计学意义(24998,P=0.0141) 讨论 本组测定98例单药服用丙戊酸钠的患者吡药 浓度,同时应用巢式PCR方法测定患者的CYP'2A6 的基因型得到结果为CYP2A61和CYP2A6}4 2006年11月第39卷第11期ChinJNeurol,November2006,Vo: 表2不同基因型患者的临床资料 注:与A组比较,P:0.0141 的等位基因频率分别为86.7%和13.3%,与 Oscarson等测定的中国人群中CYP2A6:Ic1和 CYP2A6:Ic4等位基因频率(84.9%和15.1%)相 似. 根据患者的CYP2A6基因型将患者分成2组, 将测定的血药浓度除以患者每日每公斤体重的服药 量使血药浓度标准化,以排除服药剂量和体重对血 药浓度的影响.含有CYP2A6:.c4等位基因的患者 丙戊酸钠的平均标准血药浓度高于不含有 CYP2A6:.c4等位基因的患者,差异具有统计学意义, 因此可以认为CYP2A6基因多态性影响丙戊酸钠的 血药浓度.CYP2A6基因表达产物CYP2A6酶的活 性调节丙戊酸钠的体内代谢速度.CYP2A6:Ic4/:Ic4 基因型患者由于CYP2A6基因完全缺失导致产生酶 失活的产物,而CYP2A6:Ic1/:Ic4可能只有1条有 效的CYP2A6等位基因而使得CYP2A6酶活性降 低,故含有:.c4等位基因的患者血中的丙戊酸钠浓 度明显高于不含有4等位基因的患者.临床上因 为丙戊酸钠的有效血药浓度范围(50,100m1) 较大,常开始给予常规剂量.本组研究发现,含有 CYP2A6:.c4等位基因的患者按照常规量给药,则其 血药浓度较不含有:.c4基因的患者高.因此临床上 对含CYP2A6:.c4等位基因的患者在应用丙戊酸钠 时应该较常规减少用药剂量,并注意不良反应的发 生. 参考文献 1SadequeAJ,FisherMB,Ko~ekwaKR,eta1.HumanCYP2C9and CYP2A6mediateformationofthehepatotoxin4.ene.valproicacid.J PharmacolExpTher,1997,283:698.703. 2vanderWeideJ,Ste~nsLS,vanWeeldenMJ,eta1.Theeffectof geneticpolymorphismofcytochromeP450CYP2C9onphenytoindose requirement.Pharmacogenetics.2001.11:287-291. 3黄越,杨静芳,齐晓涟,等.cYP2c19和CYP2C9基因型与苯妥 英血药浓度关系的研究.中华医学杂志,2004,84:1686-1689. 40scarsonM,McLellanRA,GullstenH,eta1.Characterisationand PCR.baseddetectionofaCYP2A6genedeletionfoundatahi frequencyinaChinesepopulation.FEBSLett,1999,448:105. 110. (收稿日期:2006-05-31) (本义编辑:李鹏) 中华神经科杂志临床病例(理)讨论征稿启事 我刊刊出的临床病例(理)类文稿因与临床结合紧密, 有指导治疗的价值,深受广大读者的欢迎.目前已刊登出的 临床病理讨论已达55例,其临床症状分别涉及言语不清,肢 体无力,头晕,头痛,发热,精神症状等表现,病理讨论结果分 别为脑内原发性非霍奇金淋巴瘤,颅内生殖细胞瘤,胚胎发 育不良性神经上皮肿瘤,浆细胞肉芽肿等,极大地丰富了读 者对神经系统少见,罕见疾病的认识.鉴于此,特面向全国 神经病学界各位作者征求病例(理)讨论类文稿,具体要求 中华神经科杂志对全年直接订户实行优惠 中华神经科杂志全年价格为168.O0元,现对全年直接 订户实行优惠订阅,优惠价格为151.20元.邮政汇款地址: 北京东四邮局100010-58信箱,邮政编码:100010,收款人:发 . 读者.作者.编者. 如下:(1)有完整的病历摘要和详细的检查结果;(2)临床讨 论部分要有参加讨论的各医院代表发苦,就问一病例提出各 自的不同看法;(3)病理结果部分要有具有说服力的病理图 片和详细的介绍,并对该病理结果的相关疾病进行大体上的 介绍,结合本例患者特点进行讨论;(4)字数要求在3000字 左右. 其余要求参见本刊稿约,热忱期待各位作者踊跃投稿. 中华神经科杂志编辑委员会 行部.电话:010—85158299.请在汇款单附言中注明所订杂 志名称,年,册数.如需挂号,每册另收3.00元.