新生儿促甲状腺素定量检测试剂盒(酶联免疫吸附法)说明...

新生儿促甲状腺素定量检测试剂盒(酶联免疫吸附法)说明... 新生儿促甲状腺素定量检测试剂盒(酶联免疫吸附法)说明 目录 ? 产品名称 ? 包装规格 ? 预期用途 ? 检验原理 ? 主要组成成分 ? 储存条件及有效期 ? 适用仪器 ? 样本要求 ? 检验 ? 参考值(参考范围) ? 检验结果的解释 ? 检验方法的局限性 ? 产品性能指标 ? 注意事项 ? 参考文献 ? 生产企业 ? 医疗器械生产企业许可证编号 ? 医疗器械注册证书编号 ? 产品标准编号 ? 说明书批准及修改日期 1 产品名称 通用名:促甲状腺素定量检测试剂盒(酶联免疫吸附法) 英文名称:TSH ELISA Kit 包装规格 96人份/盒 480人份/盒 预期用途 用于定量检测采集在S&S 903# 滤纸上的新生儿血样本中促甲状腺素(TSH)的浓度，适用于新生儿甲状腺功能低下的筛查。 促甲状腺素(TSH)是由垂体前叶分泌的一种糖蛋白，是调节甲状腺功能活动的主要激素。主要作用是促进甲状腺激素的合成与分泌。TSH受下丘脑分泌的促甲状腺素释放激素(TRH)控制，还受甲状腺素(T3、T4)的影响，即负反馈作用。血液中甲状腺素浓度升高时，下丘脑减少TRH 的释放，垂体分泌的TSH减少，甲状腺素的释放也随之减少。血液中TSH的正常浓度很低，却维持着甲状腺的正常功能。 在我国，甲状腺功能低下的发病率约1/3000左右。主要发病原因有先天性甲状腺发育异常，先天性甲状腺激素合成障碍，TSH不足或孕妇服用抗甲状腺的药物等造成。通过筛查及时发现、早期诊断、适当治疗，即可避免发生智力损伤。在新生儿甲状腺功能低下的筛查方面，检测TSH水平被认为是较灵敏的、可行的方法。但在甲状腺功能低下的确诊中同时还需要做其它试验，如血清T3、T4、TSH等。 检验原理 96孔微孔板包被抗-β-hTSH-抗体，与被分析物中的TSH抗原β位点结合，辣根过氧化物酶标记的抗-hTSH抗体与抗原的其他位点结合，形成“三明治”的抗原抗体复合物，催化底物TMB转化成蓝色的物质，终止后呈黄色，在波长450nm处有吸收峰，颜色的深浅与样品中TSH抗原的浓度呈正比，通过酶标仪测定最后产物的吸光度(OD值)。根据OD值，判断反应体系中被分析物的浓度。 主要组成成分 新生儿促甲状腺素定量检测试剂盒(酶联免疫法)组成表 名称 96人份/盒 480人份/盒 包装 酶结合物(辣根过氧化物酶标记的抗hTSH抗体) 12 ml /瓶 60 ml /瓶 终止液(2M HSO ) 12 ml /瓶 60 ml /瓶 24 样品缓冲液(Tris-HCl缓冲液) 白色塑料瓶或无色玻璃瓶 12ml/瓶 60 ml /瓶 浓缩洗液20?(Tween 20) 60ml/瓶 300 ml /瓶 底物A (柠檬酸盐缓冲液) 10ml/瓶 50 ml /瓶 底物B (TMB) 棕色塑料瓶或玻璃瓶 10ml/瓶 50 ml /瓶 96孔包被板(包被抗-β-hTSH-抗体) 1块 5块 铝箔袋 *1份 5份 TSH标准血片A,F(0、5、10、25、60、150µU/ml) 铝箔袋 质控血片C1、C2 1份 5份 盖膜 2张 10张 说明书 1份 * 注:标准品或质控品的浓度若有改变，将在试剂盒内放通知单，同时电话通知。 储存条件及有效期 储存条件 2,8?,防止冷冻。 有效期 12个月。试剂盒开启后可在2,8?保存6周。 适用仪器 酶标仪。本说明中的技术参数使用美国DYNEX公司生产的CB 372型酶标仪。使用波长450?10nm。 样本要求 按照卫生部规定的“新生儿采血常规”采取足跟血。 2 检验方法 1. 检测前将试剂盒、样本先放在室温(18,25?)平衡; 2. 浓缩洗液与蒸馏水1:20稀释，稀释后2,8?可保存1个月; 3. 打下直径3mm标准品、质控品和样本血片放入相应的微孔中; 4. 每孔加样品缓冲液100µl，充分混匀，盖膜后放入4?孵育18,20小时; 5. 洗板 弃去包被板中孵育的混合物在吸水纸上拍干。每孔加洗液350µl，洗板之间浸泡约10秒或振荡5 秒，弃去，重复上述操作5次，洗完后在吸水纸上拍干直至没有潮气。 6. 每孔加酶结合物100µl，混匀，盖膜，37?孵育1小时后重复洗板程序。 7. 每孔加底物混合液100µl(底物A和底物B在使用前15,60分钟等体积混合在一起,避光待用)， 盖膜后放入37?孵育15分钟。 8. 每孔加终止液100µl混匀，终止反应。在30分钟内读取OD值，酶标仪波长使用450nm。 结果计算 1. 手工计算: ? 计算标准品、质控品和样本平均OD值。 ? 建立标准曲线，使用标准品的OD值与其相对应的浓度绘制标准曲线。OD值为纵轴(Y 轴)，浓度 为横轴(X轴)。 ? 样品的TSH浓度:首先在Y 轴上查找样品对应的OD值，横向延伸至标准曲线，以标准曲线上的 点拉垂直线与X轴相交，得出TSH浓度值。 2. 利用酶标仪所带的软件，自动计算样品浓度值。 3. 计算公式:Lin-Lin或 Log-Log 参考值(参考范围) 参考值 ?10.8µU/ml(97.5,百分位数)。 对696例正常新生儿血斑样品检测促甲状腺素并统计频数分布，见图1。 图1 696例正常新生儿血斑样品的TSH含量分布图 696例正常新生儿血斑促甲状腺素含量分布图 180120.0% 160100.0%140 12080.0% 10060.0%频数80累计频率6040.0% 4020.0%20 0.0%0 0~ 1~促甲状腺浓度 2~ 每个实验室应建立自己的正常参考值范围。 3~ 注:本试剂盒得出的结果为血清值(全血值,血清值?2.22)。 4~ 检验结果的解释 5~ a) 质控品的结果必须控制在要求范围之内，否则实验结果不符合可接受范围视为无效。 6~ b) 实验结果仅仅是患者临床的一个部分，只有与所有的临床诊断吻合，才能做出最终诊断。 7~ 8~ 9~ 3 10~ 11~ 12~ 13~ 14~ >15 c) 实验结果不能单独决定患者的治疗。 检验方法的局限性 a) 出生后72小时采血，避免因生理性增高而产生假阳性。 b) 含叠氮纳化物不能用于酶反应。 产品性能指标 1. 标准曲线的线性范围 0,150μU/ml(非精确值，以实际试剂盒内标定值为准)，R值?0.99。 2. 批内精密度:CV不大于15 % 3. 批间精密度:CV不大于20 % 4. 准确性:回收率为85,,119, 5. 灵敏度:最低可检出限小于2.2µU/ml 6. 特异性:与HCG、LH、FSH无交叉反应，TSH表观浓度,5µU/ml 注意事项 1. 不同批号的试剂不可混用;超出有效期的试剂不可使用。仅用于体外诊断。 2. 避免接触终止液(0.5M HSO)，以免皮肤腐蚀和烧伤。 24 3. 自备实验材料:酶标仪、双蒸水、移液器、移液槽及吸头、吸水纸、一次性手套。 4. 所有试剂、样本应视为有潜在的生物危害，实验结束应采用高压、消毒液等浸泡处理。 参考文献 ? 卫生部《卫生部关于印发〈新生儿疾病技术规范〉的通知》，附件2。 ? 黄雨三主编《新生儿疾病筛查与临床诊断治疗技术操作规范全书》2005，2:111-119 ? Travis, J. C., et al.1979.Methods of Quality Control and Clinical Evaluation of a Commercial Thyroxin and Thyrotropin Assay for Use in Neonates. Clinical Chemistry. 25:735. ? F.Delange, 1998. Screening for Congenital Hypothyroidism Used as an Indicator of the Degree of Iodine Deficiency and of its Control. Thyroid Vol.8: No.12. 生产企业 企业名称:北京协和洛克生物技术研究开发中心 地址:北京市海淀区恩济庄18号院4-2-302 邮政编码:100036 电话:010,51295656 传真:010,88140690 网址:www.unionluck.com.cn 医疗器械生产许可证编号 京药管械生产许20040085号 医疗器械注册证书编号 注册产品标准编号 说明书批准及修改日期 4 i 新生儿促甲状腺素定量检测试剂盒(酶联免疫分析法)说明书 96人份/盒 480人份/盒 医疗器械生产许可证编号:京药管械生产许 号 医疗器械注册证书编号: 注册产品标准编号: 北京协和洛克生物技术研究开发中心 5 6