益气活血壮骨方对去势大鼠骨吸收与骨形成的影响

益气活血壮骨方对去势大鼠骨吸收与骨形成的影响 益气活血壮骨方对去势大鼠骨吸收与骨形 成的影响 ? 26?(总906)中医正骨2010年12月第22卷第12期 ? 实验研究? 益气活血壮骨方对去势大鼠骨吸收与骨形成的影响 肖镇,邓敦,施杞,王拥军 (1.温州医学院附属温岭医院,浙江温岭317500;2.上海中医药大学,上海200032) 摘要目的:探讨益气活血壮骨方对去势大鼠骨吸收与骨形成的影响.方法:将45只大鼠随机分为假手术组(A组),模型组 (B组),益气活血壮骨方组(c组),乐力胶囊组(D组)和骨松宝组(E组),每组9只.假手术组仅开腹缝合,其余4组做卵巢切 除术.术后4周,A,B组大鼠以生理盐水灌胃(10mL?kg),c组大鼠以益气活血壮骨方灌胃(9.6g?kg),D组大鼠以乐力 胶囊灌胃(O.15g?kg..),E组大鼠以骨松宝灌胃(8g?kg),每天1次,连续给药12周.12周后处死大鼠,腹主动脉取血测定 大鼠骨密度,骨矿含量,白细胞介素6,骨钙素及碱性磷酸酶.结果:益气活血壮骨方组骨密度及骨矿含量高于模型组,白细胞介 素6,碱性磷酸酶和骨钙素含量低于模型组;益气活血壮骨方组白细胞介素6含量低于乐力胶囊组和骨松宝组;模型组骨密度,骨 矿含量,白细胞介素6,骨钙素及碱性磷酸酶与其它组比较有统计学差异;假手术组与乐力胶囊组骨密度及骨矿含量,白细胞介素 6和碱性磷酸酶比较有统计学差异.结论:益气活血壮骨方可抑制去势大鼠骨吸收,促进骨形成,从而阻止骨量丢失.益气活血 壮骨方抑制破骨细胞分化增殖和骨吸收的作用强于乐力胶囊和骨松宝. 关键词骨质疏松骨生成骨质吸收益气活血补肾 EffectofYiqihuoxueZhuanggudecoction(益气活血壮骨 方)onboneresorptionandboneformationincastra? tedratsXIAOzhen,DENGdun,SHIqi,eta1.WenlingHospitalAffiliatedtoWenzhouMedicalCollege,Wenling 317500,Wenzhou.China ABSTRACTObjective:ToexploretheeffectofYiqihuoxueZhuanggu(YQHXZG)decoction(益气活血壮骨方)onboneresorptionand boneformationincastratedrats.Methods:45ratswererandomlydividedintosham— operatedgroup(groupA),modelgroup(groupB), YQHXZGdecoctiongroup(groupc),LELI(compoundcalciumaminoacidchelate)capsulesgroup(groupD)andGUSONGBAO(akind oftraditionalChinesemedicine)group(groupE),9easesineachgroup.ThecasesingroupAwereadministratedwithsham—operation only,whilethoseinothergroupswereadministratedwithoophorectomy.4weeksafteroperation,ratsingroupAandgroupBwerelavaged withphysiologicalsaline(10mL?kg),ratsingroupCwerelavagedwithYQHXZGdecoction(9.6g?kg),ratsingroupDwerelay- agedwithLELIcapsules(0.15g?kg)andratsingroupEwerelavagedwithGUSONGBAO(8g?kg),onceadayforconsecutive12 weeks.12weekslater,alltheratsweresacrificed,thebonemineraldensity(BMD),bonemineralcontent(BMC),interleukin一6(IL一6), boneaprotein(BGP)andalkalinephosphatase(ALP)oftheratsweremeasured.Results:BMDandBMCofgroupCwerehigherthan thoseofgroupB,whilethecontentsofIL一 6,ALPandBGPofgroupCwerelowerthanthoseofgroupB.ThecontentofIL一6ofgroupC werelowerthanthatofgroupDandgroupE.TherewasstatisticaldifferenceinBMD,BMC,IL一6,BGPandALPbetweengroupBandany othergroup.TherewasstatisticaldifferenceinBMD,BMC,IL一 6andALPbetweengroupAandgroupD.Conclusion:Throughinhibiting boneresorptionandpromotingboneformation,YiqihuoxueZhuanggudecoction(益气活血壮骨方)performswellonpreventingfrombone lossforcastratedrats.andithasastrongereffectofinhibitingosteoclastdifferentiationandpro liferationandboneresorptionthanLEUcap— stilesandGUSONGBAO. KeywordsOsteoporosis;Osteogenesis;Boneresorption;ReinforcingQIactivatblood;Rein forcingkidney 骨质疏松症(Osteoporosis,OP)是一种以骨量减 少,骨组织显微结构退化为特征,以致骨脆性增高的 骨病.中医药在治疗骨质疏松症方面有着明显的优 基金项目:国家教育部重点学科项目,上海市重点学科项目 (第二期)(T0303) 通讯作者:邓敦Email:dengdun198425@126.con 势.2009年1—12月,笔者通过实验研究了益气活血 壮骨方对去势大鼠骨吸收与骨形成的影响,现将结果 如下. 1与仪器 1.1实验动物6月龄雌性SD大鼠45只,清洁级, 体质量220—270g,购自西普尔一必凯实验动物有限 中医正骨2010年12月第22卷第l2期(总907)?27? 公司,实验动物编号SCXK(沪)2003—0002. 1.2实验药物?益气活血壮骨方.药物组成:丹 参18g,黄芪15g,补骨脂12g,骨碎补l5g,川断9g, 川芎6g等.由温岭医院制剂室水煎浓缩成1:1浓度 煎剂.?骨松宝.由贵州富华公司提供,批号: 081209.?乐力胶囊.由美国矿维公司提供,批号: 081205. 1.3实验仪器?双能x线骨密度测量仪及LU— NAR—DPXO型小动物软件.由美国GE公司提供. ?全自动生化仪(7600—010型).由日立仪器 (苏州)有限公司提供.?骨钙素(boneglaprotein, BGP),白细胞介素6(interleukin一6,IL一6)和碱性磷 酸酶(alkalinephosphatase,ALP)试剂盒.由上海森雄 科技公司提供,批号:08091009. 2方法 2.1分组方法将45只大鼠随机分为5组:假手 术组(A组),模型组(B组),益气活血壮骨方组 (C组),乐力胶囊组(D组)和骨松宝组(E组),每 组9只. 2.2造模方法采用绝经骨质疏松动物模型造模方 法…造模.采用45mg?kg戊巴比妥钠腹腔麻醉, 固定,在最末肋骨下腋中线与距脊柱外侧1cm交叉 处消毒后切开腹膜.B,C,D,E组将脂肪团拉出分 离,结扎双侧输卵管并切除卵巢,切除卵巢做HE染 色以验证造模成功;A组不切除卵巢,仅开腹缝合. 术后每只大鼠肌肉注射青霉素0.1mL. 2.3药物干预饲养4周后根据动物与人体面积 换算,A,B组以10mL?kg生理盐水灌胃,C组以9.6 g?kg益气活血壮骨方(生药)灌胃,D组以0.15g? kg乐力胶囊(生药)灌胃,E组以8g?kg骨松宝 (生药)灌胃,每天1次,连续给药12周. 2.4检测方法最后一次给药后禁食24h,将大鼠 处死.腹主动脉取血,离心取血清,再取出双侧股骨, 并剔除骨上附着软组织,生理盐水纱布包裹,分装后 置一20cC冰箱保存备测.采用双能x线吸收法 测定大鼠骨密度(bonemineraldensity,BMD),骨矿含 量(bonemineralcontent,BMC).夹心法酶联免疫吸 附试验(enzyme—linkedimmunosorbentassay,ELISA) 检测IL一6,放射免疫法检测BGP,生化检测ALP. 2.5统计学方法采用SPSS16.0统计学软件对所 得数据进行统计学处理,组间比较采用方差分析,差 异有统计学意义者,再用q检验进行两两比较,检验 水准o/=0.05. 3结果 在实验过程中每组各有1只大鼠死亡.经药物 干预后,各组大鼠的BMD,BMC,IL一6,BGP及ALP 比较,差异有统计学意义(P<0.05),然后行组间两 两比较.(j~)BMD:B组与A,C,D,E组比较,差异均有 统计学意义(q=3.11,P=0.002;q=3.O1,P=0.000; q=3.64,P=0.001;q=4.05,P:0.003);A组与D 组差异有统计学意义(q=3.45,P=0.025);其余各 组问差异均无统计学意义.?BMC:B组与A,C,D, E组比较,差异均有统计学意义(q=3.72,P=0.000; q=3.05,P=0.002;q=3.45,P=0.003;g=4.65,P= 0.000);A组与D组差异有统计学意义(q=3.69,P = 0.035);其余各组间差异均无统计学意义.? ALP:B组与A,C,D,E组比较,差异均有统计学意义 (q=3.59,P=0.004;q=3.15,P=0.008;q=3.34,P =0.005;q=4.60,P=0.012);A组与D组差异有统 计学意义(q=4.95,P=0.013);其余各组间差异均 无统计学意义.?BGP:B组与A,C,D,E组比较,差 异均有统计学意义(g=3.36,P=0.007;g=3.20,P= 0.007;q=2.95,P=0.000;q=4.32,P=0.040);A组 与C,D,E组比较,差异均有统计学意义(q=3.27,P =0.004;q=3.59,P=0.012;g=3.16,P=0.001;q= 4.29,P=0.037);其余各组间差异无统计学意义.? IL一6:B组与A,C,D,E组比较,差异有统计学意义 (q=3.17,P=0.003;q=3.26,P=0.030;g=3.95,P = 0.045;g=4.60,P=0.020);A组与C组差异无统计 学意义,A组与D,E组差异有统计学意义(q=3.20,P = 0.007;q=5.22,P=0.030);C组与D,E组差异有统 计学意义(q=6.33,P=0.001;q=4.75,P=0.002),D 组与E组差异无统计学意义.见表1. 4讨论 多虚多瘀为OP的病机特点,肾虚为本,血瘀为 标,本虚标实,互为影响,互为因果.中医治疗OP以 补虚化瘀为治则,即调补脾肾外加活血化瘀.益气活 血壮骨方以丹参为君,活血化瘀兼能养血;黄芪为臣, 益气活血.二者同用,体现中医学"以气为主,以血为 先"的气血理论.佐药补骨脂补肾壮阳止冷痛,兼能 ? 28?(总908)中医正骨2010年12月第22卷第12期 温脾;骨碎补补肾续伤,兼能活血.川断,川芎补肝 肾,行血脉,续筋骨,是为使药.全方以益气活血补肾 立法,调节气血,补中寓通,补而不滞,共收补肾壮骨, 益气活血,通络止痛之效. 乐力胶囊为临床上常用治疗骨质疏松的钙剂,疗 效较好.骨松宝胶囊是国家食品药品监督管理局批 准的用于防治骨质疏松症的中药成方制剂,在治疗骨 质疏松特别是绝经后骨质疏松症方面的疗效已得到 了普遍的认可. 分析本实验的结果:?A组与c,E组BMD,BMC 比较,差异无统计学意义,说明益气活血壮骨方和骨 松宝能提高BMD,BMC,使其接近正常,有较好的抗 骨质疏松作用.?C组IL一6含量低于D,E组,差异 有统计学意义.IL一6可刺激粒细胞一单核细胞集落 生成单位(colony—formingunit—granulocyteandmoB— ocyte,CFU—GM)发育,促进早期破骨细胞前体形成 和分化,增加新的破骨细胞形成和激活已成熟的破骨 细胞,刺激骨吸收,使骨转换增加j,形成骨吸收陷 窝J,是破骨细胞活性的介导剂?.由此可以说明 益气活血壮骨方抑制破骨细胞分化增殖和骨吸收的 作用强于乐力胶囊和骨松宝.?各组BGP含量两两 比较,B组与C,D,E组比较,差异均有统计学意义, 这说明益气活血壮骨方,乐力胶囊和骨松宝均能降低 BGP含量,有较强的抗骨质疏松的作用.@ALP可加 快破骨速度,造成骨丢失,降低骨转换,改善骨结 构,提高骨质量,加强骨强度,减少骨折.B组ALP含 量与A,c,D,E组比较差异均有统计学意义,C,E组 与A组差异无统计学意义,D组与A组差异有统计学 意义.说明益气活血壮骨方,骨松宝,乐力胶囊均能 降低骨高转换状态. 益气活血壮骨方能够提高BMD及BMC,降低 BGP,ALP和IL一6,抑制破骨细胞分化增殖和骨吸收 且作用强于乐力胶囊和骨松宝,对骨质疏松有明显的 治疗效果. 5参考文献 [1]BowlesEA,WeaverDS,TelewskiFW,eta1.Bonemeasure— mentbyenhancedcontrastimageanalysis:ovarieetomized andintactMacacafascicularisasamodelforhumanpostm— enopausalosteoporosis[J] (2):99—103. [2]金世鑫.近年骨质疏松诊断治疗的状况[J].中国骨质疏 松杂志,2005,11(4):518—522. [3]马文礼.中医药治疗骨质疏松症研究进展[J].天津中医 学院,2005,24(2):107—108. [4]顾增发,林凤如.用切除卵巢大鼠建立骨质疏松症模型 的研究[J].中华老年医学杂志,1989,8(2):118—120. [5]Conte—DevolxB,GiraudP,CastanasE,eta1.Effectofneo— nataltreatmentwithmonosodiumglutamateonthesecretion ofalpha—MSH,beta—endorphinandACTHintherat [J].Neuroendocrinology,1981,33(4):207—211. [6]张保亭.骨疏康对去卵巢雌鼠骨质疏松症防治作用的研 究[J].中国骨肿瘤骨病,2006,1(5):283—286. [7]霍建河,陈康,赵志红.骨疏康颗粒治疗绝经后妇女骨质 疏松症[J].医药导报,2007,23(7):467. [8]RoodmanGD.Interleukin,6:anosteotropicfactor[J].J 478. BoneMinerRes,1992,7(5):475— [9]MuudyGR.Peptidesandgrowthregulatoryfactorsinbone [J].RheumDisClinNorthAm,1994,20(3):577—588. [10]VargasSJ,NaprtaA,LeeSK,eta1.Lackofevidenceforan increaseininterleukin一6expressioninadultmurinebone, bonemarrow,andmarrowstromalcellculturesafterovariee— tomy[J].JBoneMinerRes,1996,1I(12):1926—1934. [11]JacksonJA,KleerekoperM.Osteoporosisinmen:diagnosis, pathophysiology,andprevention[J].Medicine(Balti— more),1990,69(3):137—152. (2010—05—29收稿2010—09—28修回)