【doc】 不同钙摄入量对我国青年女性骨密度影响的研究

【doc】 不同钙摄入量对我国青年女性骨密度影响的研究 不同钙摄入量对我国青年女性骨密度影响 的研究 第6期张刚,等.不同钙摄入量对我国青年女性骨密度影响的研究729 偶联反应过程中的一些未反应的小分子物质如MC.LR, EDC,NHS及反应副产物对偶联物的纯度和鉴定都有很大的 影响;并会影响免疫制备抗体的质量,因此,偶联物都需要进 行纯化,常用的纯化方法有冷冻高速离心,凝胶柱层析,透析, 饱和硫酸铵沉淀法,亲和柱层析法等,本研究采用冷冻高速离 心,凝胶柱层析和透析相结合的纯化方法,不仅有效地去除了 偶联物中的小分子杂质,而且使蛋白质反应物中的杂蛋白和 可能产生的蛋白质自凝聚和物也达到了分离. 3.3偶联物的鉴定 MC.LR是否偶联到KLH或BSA是本研究的关键,通过波 长200,40Ohm范围内的紫外光谱扫描是鉴定偶联物合成是 否成功的常用方法.从图2,图3可以分析:MC.LR—KLH (BSA)偶联物的扫描光谱曲线明显不同于MC.LR和KLH (BSA)的吸收光谱曲线.MC.LR在240nm和2lOnm处有最大 吸收峰,KLH(BSA)在280nm和230nm处有最大吸收峰,且 280nm和250nm处的峰高差>0.2.而MC.LR.KLH(BSA)偶联 物从280nm处有吸收峰后一直延伸到250nm处再形成220nm 处的最大吸收峰,280nm和250nrn的峰高差<0.1,230nm的蛋 白吸收峰前移至220nm,由此可以判断KLH(BSA)已偶联上 MC—LR. 3.4偶联物结合比的测定 偶联物中MC.LR与KLH(BSA)的结合比大小将直接影响 抗体的质量,通常认为KLH(BSA)上偶联的MC.LR分子数越 多越好.但据有关文献资料报道,偶联结合比<20就具有 较好的免疫性了.国外着名试剂公司提供的一些免疫抗原的 结合比一般为8—12:1.本研究中MC—LR与载体蛋白的结合 比为9.1,9.4:1,达到了常规免疫抗原的要求. 文章编号:1000.8020(2005)06.0729—03 然而,也有许多文献都没有报道偶联物的结合比.主要 原因可能是一般测定方法难以准确定量计算,只能通过免疫 动物后是否产生特异性的抗血清来最终确定免.疫抗原的合 成是否成功. 3.5通过常规的动物免疫试验,利用问接ELISA来测定所获 得的动物血清的效价也令人满意,最终证明合成的MC.LR. KLH具有较好的免疫原性,能够刺激动物产生针对MC.LR的 抗体,为进一步的单抗和多抗的制备奠定了基础. (本研究工作得到江苏省农科院刘贤进研究员和刘媛硕士的大力 帮助,在此一并表示感谢.) 4 1 2 3 4 5 6 参考文献 CarmichaelWW.Thetoxinsofcyanobacteria.SciAm,1994.271:78.86 SivonenK,NamikoshiM,EvansWR,eta1.Isomationandstructureof microcystisfromacyanobacteriawaterbloom(Finland).Toxicon,1992, 30:1473.1479 BotesDP,TuinmanM,WesselsPL,eta1.Thestructureofcyanoginosin— LA,acyclicheptapeptidetoxinfromthecyanobacteriumMicrocystis.J ChemSocPerkinTrans.1984.1:23l1—2318 RinehaaKL,NamikoshiM,ChoBW.Structureandbiosynsthesisof toxinsfromblue-greenalage(cyanobacteria).jApplPhyc0l,1994,6: 159-176 赵春城,蔡建荣,赵晓联,等,酶联免疫吸附法检测罂粟碱研究I罂 粟碱免疫抗原的合成.中国公共卫生,2004,20(增):79—8O 严杰,罗海波,陆德源主编.现代微生物实验技术及应用.北京:人 民卫生出版社,1997.140 (2005—01.14收稿) 不同钙摄人量对我国青年女性骨密度影响的研究 张刚赵文华付萍满青青何丽杨晓光张坚 中国疾病预防控制中心营养与食品安全所,北京100050 从营养角度预防骨质疏松的重点应放在获得和保持峰值 骨密度,延缓绝经期妇女随年龄增加而出现的骨质丢失速率 上.现有的研究已经证实钙摄入量是影响骨密度的重要因 素,充足的钙摄入量对获得峰值骨密度十分重要,因此适宜的 钙摄入量不仅可以增加青年女性的骨密度,而且可以降低骨 质疏松的发病率.本研究通过历时l3个月的人群钙干预流 行病学实验,探讨了不同钙摄入量对青年女性骨密度的影响. l对象及方法 1.1对象 某军校女学员179名(19,21岁),按照自愿参加的原则, 并排除了患有影响骨代谢的肝,肾疾病和骨骼系统疾病的对 基金项目:国家十五科技攻关项目 作者简介:张刚,男实习研究员,现在中国疾病预防控制中心健 康教育所 ? 调查研究? 象作为本研究的调查对象.本研究经中国疾病预防控制中心 营养与食品安全所伦理评审委员会同意,由调查对象签署了 知情同意书. 1.2方法 1.2.1研究对象的基本情况包括姓名,出生日期,身高,体 重.身高,体重采用身高体重计进行测定,要求调查对象穿单 衣裤,脱去鞋帽,赤脚立正姿势站立,足跟,骶骨部和肩胛部靠 立柱,两眼平视前方.测试者轻轻移动滑测板与头顶点接触, 立柱所示读数.称体重时调查对象脱去外衣,双脚站于 身高体重计的中央,保持直立状态,不接触它物,平稳后读数. 精确度分别为0.1cm和0.1kg.根据身高,体重计算体质指数 (BMI). 1.2.2膳食调查准确了解研究对象膳食钙摄入量是研究 不同钙摄入量对骨密度影响的基础,因此膳食调查的准确性 对本研究尤为重要.由于该校为军事学院,所有研究对象均 在学校食堂集体就餐,因此我们采用了食堂记帐法,称重法和 连续3天24小时膳食记录法来获取准确的膳食摄入量.该 730卫生研究第34卷 学校共有四个食堂,所有食物均为食堂自制,主食由主食食堂 统一制做,各食堂菜谱基本上是以每周为一个循环,一年中菜 谱变化不大. 1.2.2.1食堂记帐法为准确计算各种食物的原料组成及 各种原料的比例,按照食堂菜谱,由各食堂厨师长记录调查期 间各种主食,副食和调料的投料情况及加工出的食物份数,计 算每份食物重量及各种配料的比例,作为计算各食堂菜谱营 养成分的基础. 1.2.2.2称重法为准确计算每份食物的重量,由课题组工 作人员到所有学生食堂称量每份食物的重量并做记录,每种 菜肴称2,3份,取平均值作为一份重量,再结合食堂记帐法 中记录的各种菜肴的投料比例及用量计算各种菜肴的营养成 分,作为计算个人营养素摄人量的基础. 1.2.2.3个人连续3天的24小时膳食记录法要求研究对 象严格记录调查期间摄人的食物,包括:就餐时间,地点, 所摄人食物菜谱名,购买份数,废弃量,购买量扣除废弃量即 为摄人量.对于摄人食堂供应以外的食物如零食,饮料和水 果等,则要求研究对象根据零食和饮料包装袋的重量估计吃 了多少,单位用(克或毫升). 根据《食物成分表》计算每个研究对象平均每天主要营养 素和能量的摄人量. 1.2.3骨密度指标由河北省第一人民医院骨代谢研究室 负责骨密度测量,测量仪器为美国GE—Lunar双能x线骨密度 测量仪,型号为DPX—NT+72358.整个测定过程由2名专业医 师负责操作,每天测前均进行仪器性能校正检测.测定时要 求研究对象只穿贴身衣裤,摘下所有金属物件.全身扫描测 出头部,肋骨,骨盆,脊柱,下肢及全身骨密度,腰椎扫描测出 腰2,腰4(12一I4)骨密度,左前臂扫描测出前臂尺骨远端 1/3处和桡骨远端1/3处骨密度. 1.3统计分析 用Micr0s0ftACCESS软件建立数据库,采用SPSSl1.0和 SAS8.2软件包进行整理和统计分析,经过数据清理最后确认 125名研究对象的结果用于统计分析. 2结果 4组研究对象的年龄,身高,体重及BMI的分布差异均无 显着性. 根据基线和终期2次共6天的膳食调查,得出的研究对 象营养素摄人量,差异均无显着性.总钙摄人量组间差异有 显着性(表1). 表1膳食钙,补充钙和总钙摄入量毫克,(人?日) 表2为各组基线与终期全身及各部位骨密度变化比较, 第3,4组全身,下肢和尺骨远端1/3骨密度实验后均比实验 前有显着性增加,且第3组头部骨密度显着性增加;第1组除 前臂和桡骨远端1/3骨密度显着性增加外,其余各部位骨密 度差异无显着性. 表2各组基线与终期全身及各部位骨密度变化比较(x?)g/era 注:(1)P<0.05,(2)P<0.O1 第6期张刚,等.不同钙摄入量对我国青年女性骨密度影响的研究73l 表3为各组各部位骨密度实验后增加值比较,第3组和 第4组全身,下肢和尺骨远端1/3骨密度增加值均显着高于 第l组和第2组,第3组与第4组全身,下肢和尺骨远端1/3 骨密度增加值之间无显着性差异,第2组与第1组全身,下肢 和尺骨远端1/3骨密度增加值之间无显着性差异. 表3各组各部位骨密度实验后增加值比较(x?S)g,皿2 注:骨密度增加值为实验后骨密度减实验前骨密度,(1)P<0.01 3讨论 在研究不同钙摄人量对骨密度的影响时,主要需要控制 的混杂因素包括性别,年龄,体重,体力活动和膳食习惯等,本 研究很好的控制了这些混杂因素.本研究的研究对象为l9 — 2l岁的青年女性,生活环境相同,人群可获得的食物种类 基本相同,因而个体问的膳食模式没有明显差异;体力活动也 无明显差异,因此能更好地反映钙摄入量对骨密度的影响. 钙与磷是骨矿物质的主要成分,二者在骨骼沉积得愈多, 骨骼就愈坚实.其中磷在日常食物里含量比较丰富,极少有 磷缺乏问题,因此骨的强度及密度与钙的含量密切相关. 本研究中四组人群平均每日膳食钙摄人量分别为467,537, 474,530mg/d,占2000年中国营养学会提出的成年女性钙的适 宜摄人量(AI)800mg的55%一65%,略高于1992年全国营养 调查的数据;四组研究对象在干预实验过程中平均每日总 钙摄人量分别为510,803,984,l188mg/d.比较各组各部位骨 密度的增加值,结果显示全身,下肢和尺骨远端l/3处骨密度 的增加值四组间有显着性差异,其余部位差异均无显着性;对 全身,下肢和尺骨远端l/3骨密度增加值采用多个样本两两 比较的秩和检验,结果发现第3,4组全身和下肢骨密度增加 值显着高于第l,2两组,而3,4组之间全身和下肢骨密度的 增加未见显着性差异. Hawker等采用单能x线法测定963名l9—35岁成年女 性的前臂骨密度发现,奶摄人量少者骨密度较低..Du等采 用单能x线法测定中国北京649名青春期女性的骨密度,研 究牛奶摄人量和骨密度的关系,发现牛奶摄人对北京青春期 女性的骨密度增加有益,补充牛奶者有提高骨密度的作用,因 此可以认为通过补充牛奶来提高了钙摄人量能获得最佳的骨 密度.delPuente等采用双能x线骨密度仪测量意大利那 勒斯的139位健康妇女腰椎和股骨颈的骨密度,膳食调查,测 量血清维生素D,观察尿生化指标,发现膳食钙摄人量,血清 钙,血清维生素D水平是骨密度变化的重要决定因素.Hu 比较我国钙摄人量水平不同的三个地区700多名妇女骨密度 值,结果表明内蒙牧区妇女膳食钙摄人量高达724mg/d,新疆 半牧区妇女钙摄人量为380mg/d,山西,福建农区妇女钙摄人 量为303mg/d,内蒙妇女的桡骨骨密度值显着高于另外两地, 但没有考虑膳食钙以外其他因素对骨密度的影响. 现行国外成人钙的适宜摄人量美国为1000mg,英国为 70HDmg,日本600mg,2000年中国营养学会制定的我国成年 人钙的适宜摄人量为800mg.本次钙干预实验结果显示,钙 摄入量为984mg/d和1188mIg/a组全身,下肢和尺骨远端1/3骨 密度的增加值显着高于5lOmg/d和803mg/a组,984mg/d组与 l188m-g/d组骨密度的增加值无显着性差异,提示我国青年女 性钙的适宜摄人量可能为lO00mg. 国内关于人群钙干预流行病学的实验研究多限于骨密度 的横断面调查,与其相比,实验研究需要的样本量较多,随访 的时间较长,具体执行的难度较大,费用也比较高昂,因此本 类型研究尚处于探索阶段.本次研究在l3个月的时间内的 钙干预对研究对象的依从性提出较高的要求,有一部分研究 对象未能坚持服用钙补充剂,结果被剔除,使样本量减少.膳 食钙摄入量对骨密度的影响是在较长时问形成的,理论上应 该观察时间更长一些,但由于受研究经费及研究对象的流动 性所限,故研究时间为l3个月. (致谢:诚挚感谢白求恩军医学院的老师和同学给予的大力协助, 感谢所有参加项目的课题组工作人员) 4参考文献 1陈炳卿.营养与食品卫生学.北京:人民卫生出版社,2000.28 2中国预防医学科学院营养与食品卫生研究所.食物成分表.北京: 人民卫生出版社,1991.38 3张刚.人体骨密度的影响因素.国外医学卫生学分册,2004.31 (3):184-187 4葛可佑.90年代中国人群的膳食与营养状况(1992年全国营养调 查).北京:人民卫生出版社,1996.38 5HawkerGA.Co.elvesofforearmbonemineraldensityinyoung Norwegianwomen:theNord-TrondelagHealthStudy.AmJEpidemio1. 2002,156(5):418-427 6DuXQ.MilkconsumptionandbonemineralcontentinChinese adolescentgirls.Bone,2002,30(3):521.528 7delPuenteA,EspositoA.DietarycalciumintakeandserumvitaminD aremajordeterminantsofbonemassvariationsinwomen.Alongitudinal studyAgingClinExpRes,2002,14(5):382-388 8中国营养学会.中国居民膳食营养素参考摄入量(ChineseDRIs). 北京:中国轻工业出版社,2000.10 (2004.12.07收稿)