人凝血因子ⅷ效价检验标准操作规程文库

人凝血因子ⅷ效价检验#操作#文库 人凝血因子?效价检验标准操作规程 1 目的 严格操作者的检测方法～使操作者能够快速有效和安全准确地完成检验 操作～特制定本操作规程。 2 适用范围 本操作规程适用于冷沉淀、人凝血因子?洗脱原液、原液、半成品、冻干及 成品等含有人凝血因子?的供试品效价检测。 3 制定依据 《中华人民共和国药典》,2015年版,三部～附录3521人凝血因子?效价测 定法,一期法,。 4 4.1 检验人员按本SOP对供试品进行检验和计算。 4.2 复核人对检验中的计算进行复核。 4.3 确认人按本SOP对检验过程及结果进行相应确认和判定。 5 仪器及器具 5.1 仪器 5.1.1 凝血仪 5.1.2 电子天平 5.1.3 电子天平 5.1.4 漩涡混匀器 5.2 器具 5.2.1 微量移液器 5.2.2 吸头 5.2.3 移液管 5.2.4 洗耳球 5.2.5 试管 5.2.6 试管架 5.2.7 砂轮 5.2.8 凝血仪耗材,比色盘、供试品杯等, 6 试剂及试液 6.1 试剂 6.1.1 人凝血因子VIII国家标准品 6.1.2 人凝血因子VIII比较品 6.2 试液 6.2.1 人凝血因子?缺乏血浆 6.2.2 稀释液,咪唑稀释液/因子稀释液/样本稀释液, 6.2.3 激活的部分促凝血酶原激酶时间试剂 6.2.4 氯化钙溶液 7 操作步骤 7.1 供试品溶液、比较品溶液及标准品溶液的制备 7.1.1 供试品及比较品溶液的制备 7.1.1.1 供试品及比较品的预稀释 用人凝血因子?缺乏血浆将供试品预稀释成约1IU/ml,冻干制品 先按标示量加入水溶解,冷沉淀先取1~2g～加水溶解约为20倍。 具体稀释过程如下: 人凝血因子人凝血因子? 供试品区分 冷沉淀 ?洗脱原半成品、成品、冻干 液、原液 及比较品 供试品 1~2g 100μl 100μl 人凝血因子?缺乏血浆 19~38g纯化水 300μl 100μl 稀释倍数 20 4 2 取上步稀释液 --- 50μl 50μl 人凝血因子?缺乏血浆 --- 450μl 450μl 总预稀释倍数 20 40 20 7.1.1.2 供试品预稀释液的工作稀释,供试品溶液, 将上述含人凝血因子?约1IU/ml的供试品预稀释液用稀释液稀 释6倍、8倍、10倍。具体稀释过程如下: 先取500μl已预稀释成含人凝血因子?约1IU/ml的供试品预稀释 液～加500μl稀释液～稀释成含人凝血因子?约0.5IU/ml～混匀～ 再分别从中取200μl移到3支试管中～分别加400μl～600μl和800μl 稀释液。供试品稀释可根据本身效价高低及仪器环境等变化作适 当适当调整。 如下表稀释: 供试品溶液1 供试品溶液2 供试品溶液3 供试品预稀释液 500μl 500μl 500μl 稀释液 500μl 500μl 500μl 稀释倍数 2 2 2 取上步稀释液 200μl 200μl 200μl 稀释液 400μl 600μl 800μl 总稀释倍数 30 40 50 7.1.2 标准品溶液的制备 7.1.2.1 预稀释:将标准品按标示量加入水溶解～取100μl复溶品～加人凝 血因子?缺乏血浆适量预稀释成约1IU/ml。 7.1.2.2 工作稀释:将上述1IU/ml的标准品用稀释液稀释2倍、4倍、8倍、 16倍、32倍。 稀释倍数 ×2 ×4 ×8 ×16 ×32 600μl 600μl 600μl 600μl 600μl —— 1IU/ml ×2 ×4 ×8 ×16 标准品 标准品 标准品 标准品 标准品 稀释液 600μl 600μl 600μl 600μl 600μl 0.5 0.25 0.125 0.0625 0.03125 人凝血因子?效价 IU/ml IU/ml IU/ml IU/ml IU/ml 7.2 检验操作 7.2.1 凝血仪准备: 7.2.1.1 先打开凝血仪电源～在反应盘上放入比色盘～预热使反应仓温度 。 达到37? 7.2.1.2 分别将激活的部分促凝血酶原激酶时间试剂和氯化钙溶液加入 凝血仪的相应区域。 7.2.2 上机测试凝固时间 7.2.2.1 将供试品杯加到供试品盘上～并按要求在相应的供试品杯中加入 供试液,标准品、比较品和供试品稀释液,和相应试剂。具体加 入位置如下: Dil杯加入稀释液, 18号杯加入人凝血因子?缺乏血浆, 1~14号杯加入待测液, 7.2.2.2 按仪器操作规程启动人凝血因子?效价测定程序, 7.2.2.3 测定结束后～记录返回的凝固时间 7.2.3 测定时要求每个稀释度平行测定2管～两管之差不得超过均值10%～否 则重测。 7.3 结果处理 7.3.1 标准曲线制作: 将标准品5个不同稀释度所含人凝血因子?效价,IU/ml,～分别取对 数值,再将其各相应浓度所测得的凝固时间,秒～s,～也分别取对数 值。然后按统计学方法作直线回归方程,用excel计算,: logy = blogx+a 其中:x为人凝血因子?效价～IU/ml, y为测得相应凝固时间～秒,s,。 7.3.2 供试品及比较品效价计算: 将3个不同浓度的供试品所得到凝固时间,秒,分别代入方程式计算 x值,然后将所得x值分别乘以相应的供试品稀释倍数～即得到3个 相应的效价,IU/ml,,计算这3个效价值的平均值作为供试品中人凝 血因子?效价。 7.4 注意事项 7.4.1 标准曲线直线回归相关系数应不低于0.98。 7.4.2 每个稀释度的标准品或供试品平行测定2管～2管之差不得超过均值 10%～否则重测。 7.4.3 直接接触标准品、供试品和血浆的器皿应为塑料制品或硅化玻璃制品。 7.4.4 应急预案 7.4.4.1 仪器与电脑无法连接,仪器无法将实验数据传到电脑上不易于对 实验的考察及结果分析～试验过程中数据未能在电脑上读取,。检 查线接口～重新连接仪器电脑。 7.4.4.2 如遇到供试品还未上机检验停电～则待来电后～检验照常进行。 如遇上机过程中断电在不影响检验结果的情况下继续检验直到结 束～否则重新检验。 7.4.4.3 电源无法关闭～可能是电路短路～会导致机器死机。 7.4.4.4 长期频繁的开关会导致仪器电源的松弛～仪器不容易关闭～应减 少开机次数～按仪器使用说明书定期维护。 7.4.4.5 针头堵塞～操作仪器点击清洗～将针头冲干净。 8 判定基准 检验结果的判定依据相应品种的质量标准进行 9 生效日期 本规定自2015年12月01日起正式生效。