体外培养人牙囊细胞及其在牙齿萌出程中的作用道

体外培养人牙囊细胞及其在牙齿萌出程中的作用道 主要英文缩略词 ,,,,, ?一,,,,,,, ,,,,,,,,〕,,,,,, ,—,,,培养基,,,—, ;,,,,, ,,,,,,,,,,, ,,;,,,—, 集落刺激因子一,,,, ,,,,,,,,, ,,,,,, ,,;,,, 表皮生长因子,,，,, ,,,,,,一, ,,,,, ,,,,,,,,,,,,, ,,,,, 酶联免疫吸附剂测定,,, ,,,,, ;,,, ,,,,,, 胎牛血清，,一,? ,,,,,,,,,,,—, , 白细胞介素一, ,，,一, , ,,,,, ,,,,,一, 白细胞介素一,,,,一, ,,,,;,,, ;,,,,,,;,,; ,,,,,,, 单核细胞趋化蛋白一,,, ,,,,;,, ,,,,,,, 光密度,,, ,,,,,,,,,—,,,,,,,, ,,, ,,, 磷酸盐缓冲液,,,,, , ,,,,,,,,,,,, ,,,,,, ,,;,,,—, , 转化生长因子一, ,,,,,, ,,,,, ,,;,,, ,, ,,;,,,—, 肿瘤坏死因子一,,,,,,,, ,,;,,,, ,,;,,, ,,,,, 核心因子,,,,, ,,,, —,,,,,,,,,,,,, ,,;, ,,, ,,,,,,,, , ,,, 原位末端转移酶标记法 ，,, ,, ,,,, ,,,,,,,,,,,,, 原位杂交 ,, ,,,,,,,,,, 成骨细胞 ,, ,,,,,;,,,, 破骨细胞 ,,，, ,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,, ,,;,,, 破骨细胞发生抑制因子 ,,, ,,,,,,,,,,,,,,, 骨保护素 ,,, ,,,,,;,?, ,,艉,,,,,,,,, ,,;,,, 破骨细胞分化因子 ,,:,,, ,,,,,,, ,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,, ;,,,, ,,,;,,,,逆转录聚合酶链反应 ,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,;,, ,,,,,,,,,,, 抗酒石酸酸性磷酸酶 ,,,, ,,,;,,,, ,,,,,,,,,,, ,,,,,, ,,;,,, 血管内皮生长因子 ,,,,, ,,,,,,,,,,, ,,,,,,,—,,,,,,, ,,,,,,,甲状腺素相关蛋白 体外培养人牙囊细胞及其在牙齿萌出过程中的作用 (摘要) 博士后: 金作林 合作导师: 罗颂椒教授 牙齿萌出的机制极其复杂，研究表明牙囊在牙齿萌出过程中起重要的作用，目前对牙囊细胞的研究比较深入，从组织学和细胞学两方面都有研究，但其在牙齿萌出的机制中的作用并不完全明了，国外通过研究大鼠牙囊细胞观察牙囊细胞的生物特性，初步研究牙囊细胞合成与分泌细胞基质蛋白及其在牙齿萌出中的作用，但尚无关于人牙囊细胞研究的报道。本研究通过体外培养人牙囊细胞生物学特性的研究，观察其对牙齿萌出的影响，探讨牙齿萌出的机制。 研究工作包括以下几个方面:第一部分人牙囊细胞的体外培养及其特性研究一人牙囊细胞的体外培养及其鉴定 目的:体外培养人牙囊细胞并研究其特性。方法:取年龄为,,岁男孩埋藏阻生第三磨牙的牙囊，组织块法进行人牙囊细胞的培养，,,染色、扫描电镜观察人牙囊细胞的形态，免疫组织化学染色技术观察波形蛋白在牙囊细胞中的表达及定位。结果:培养的人牙囊细胞呈梭形、卵圆形及多角形，形似成纤维细胞;扫描电镜可见细胞多呈梭形，也可见多角形，所有细胞表面均有折光性较强的颗粒状突起，有的细胞表面多且密，有的细胞表面较少，围绕细胞核周围细胞膜表面分布较多:在牙囊细胞中波彤蛋白的表达呈阳性，定位于细胞的胞质中，围绕细胞核周围染色较强，细胞核内染色阴性。结论:体外可以培养人牙囊细胞，人牙囊细胞具有成纤维 细胞的特性。〔关键词〕人牙囊细胞;细胞培养;扫描电镜:免疫组化二体外培养人牙囊细胞，型胶原与纤维连接素的表达 目的:通过体外培养人牙囊细胞，研究，型胶原与纤维连接素在细胞中的表达，探讨其在牙齿萌出过程中转化为牙周膜细胞的机制。方法:取年龄为,,岁男孩埋藏阻生牙齿的牙囊，组至;,块法进行人牙囊细胞的培养，通过免疫组织化学 ,染色技术?鄄欤尚徒涸 跋宋 铀卦谘滥蚁赴 械谋泶锛岸ㄎ弧,峁 号嘌 娜搜滥蚁赴 仕笮巍?言残渭岸嘟切危 嗡瞥上宋 赴 ,谘滥蚁赴 校尚徒涸 拖宋 铀氐谋泶锍恃粜裕 ㄎ挥谙赴 陌 手校 葡赴 酥芪 旧 锨浚 赴 四谌旧 跣浴,崧郏禾逋馀嘌 搜滥蚁赴 哂谐上宋 赴 奶匦裕 芎铣捎敕置冢尚徒涸 胂宋 铀氐哪芰Α～补丶 省橙搜滥蚁赴 唬尚徒涸 幌宋 铀兀好庖哂 馊旧 诙 糠秩搜滥蚁赴 屑 浯碳ひ蜃右唬保ǎ茫樱埔唬保?谋泶镆约傲魈寰惭沽ο碌母谋洹 茫樱埔唬痹谔逋馀嘌 搜滥蚁赴 械谋泶?目的:研究体外培养的人牙囊细胞中,,,一,表达及定位，以及不同浓度的，,一, ,对牙囊细胞分泌,,,一,的影响，探讨,,,,,在牙齿萌出中的作用。方法:取年龄为,,岁男孩埋藏阻生牙齿的牙囊进行人牙囊细胞培养，用免疫组织化学染色技术(观察,,,一,在细胞中的表达及定位。使用,,，,,方法观察,,，,,,,,,,的五个不同浓度的白介素一, ,(，,—, ,)对培养的牙囊细胞分泌,,,,,的影响。结果:培养的人牙囊细胞呈梭形，主要为成纤维样细胞，在牙囊细胞中,,,一,的表达呈阳性，定位于细胞的胞质中，围绕细胞核周围染色较强，细胞核内染色阴性，细胞外未见阳性表达。培养细胞加入，,—, ,后，,,,,,的浓度明显增加并随，,一, ,的浓度增加而增加。结论:培养的人牙囊具有合成与分泌,,,一,的能力，，,一,?可以促进体外培养的人牙囊细胞分泌,,,,,。〔关键词〕人牙囊细胞;,,,—,:，,一, ,:免疫组化:,,，,, ，二流体静压力作用下人牙囊细胞,,,一,的表达 目的:研究体外培养的人牙囊细胞在不同流体静压力作用下对细胞分泌,,,一,的影响，探讨,,,一,在牙齿萌出过程中的作用。方法:取年龄为,,岁男孩埋藏阻生牙齿的牙囊进行人牙囊细胞培养，将传代的培养细胞分别在,,、,,,、,,,、,,, ,,,流体静压力作用,小时后再分别培养,,、,,、,,小时，使用,,，,,方法观察细胞培养液中,,,一,的浓度。结果:培养的人牙囊细胞呈梭形，主要为成纤维样细胞，细胞免疫组化染色显示人牙囊细胞中,,,一,的表达呈阳性，定位于细胞的胞质中，随流体静压力的增大染色增强，随压力的增大而增强。,,，,,检测的,,,一,浓度随流体静压力的增大而增加，在一定的时间段内也随培养时间的延长丽增加，具有时间性。结论:培养的人牙囊细胞具有合成与分泌,,,一,的能力，流体静压力可以促进体外培养的人牙囊细胞,,,,,的分泌。 免陕键词从牙囊驴 ?孓慵体静压力 化:疑，,, 蛾芦，第三部分人牙囊细胞中表皮生长因子(,,,)的表达以及流体静压力下的改变 目的:研究体外培养的人牙囊细胞,,,的表达以及在不同流体静压力作用下对细胞分泌,,,的影响，探讨,,,在牙齿萌出过程中的作用。方法:取年龄为,,岁男孩埋藏阻生牙齿的牙囊进行人牙囊细胞培养，将传代的培养细胞应用原位杂交的方法表达,,,，分别在,,、,,,,,,流体静压力作用,小时后,,—,,,方法观察细胞,,,的浓度变化。结果:培养的入牙囊细胞呈梭形，主要为成纤维样细胞，原位杂交染色显示人牙囊细胞中,,,的表达呈阳性，定位于细胞 的胞质中，,,,,,流体静压力表达略有增加，,,,,,,压力表达明显降低，说明流体静压力在一定力值范围内对人牙囊细胞中有,,,的表达具有空间性，结论:培养的人牙囊细胞具有合成与分泌,,,的能力，流体静压力可以影响体外培养的人牙囊细胞,,,的分泌。〔关键词〕人牙囊细胞;,,,:流体静目动:原位杂交:,,,,,,, , ?第四部分人牙囊细胞中细胞程序性死亡以及流体静压力下的改变 目的:研究体外培养的人琴囊细胞细胞程序性死亡以及在不同流体静压力作用下对细胞程序性死亡的改变，探讨细胞程序性死亡在牙齿萌出过程中的作用。方法:取年龄为,,岁男孩埋藏阻生牙齿的牙囊进行人牙囊细胞培养，将传代的培养细胞应用,,,,,的方法标记细胞程序性死亡，分别在,,、,,,,,,流体静压力作用,小时后观察细胞程序性死亡变化。结果:人牙囊细胞细胞程序性死亡,,,,,流体静压力阳性细胞减少，阴性细胞增加;,,,,,,压力阳性细胞增加，阴性细胞减少，说明流体静压力对人牙囊细胞中细胞程序性死亡有影响，结论:流体静压力可以影响体外培养约人牙囊细胞细胞程序性死亡。〔关键词〕人 ,,,,;,, ,,,牙蹇绸胞;细胞程序性死亡:流体静乒力;,,,,, , ,,,, ,,,,,,,,,,,;,, ;,,, ,, ,,,,, ,,,,,,,, (,,,,,,;,) ,,,,,,;,,,:,,, ,,,,,, ,,,,,,,,,,:,,, ,,,,,,,, ,,,,, ,,,,,,,, ,, , ,,;,,,,,, ,,,,,,,,,,,,, ,,,,, ,,, ,,,,,,;, ,, ,,,,,,,,, ,,, ,,？,,,,, ,,, ,,,;,,，, ,,,,, ;,,,,;,,,, ,,,,,, ,,; 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