盐酸恩诺沙星与其他四种抗菌药物对水产致病菌的体外抗菌作用

盐酸恩诺沙星与其他四种抗菌药物对水产致病菌的体外抗菌作用盐酸恩诺沙星与其他四种抗菌药物对水产致病菌的体外抗菌作用福建水产,2005年3月第1期JOURNALOFFUJIANFISHERIESNO.1Mar.25.2oo5盐酸恩诺沙星与其他四种抗茵药物对水产致病菌的体外抗菌作用樊海平,曾占壮,林煜(福建省淡水水产研究所,福建福州350002)摘要:用琼脂平板稀释法测定了盐酸恩诺沙星,盐酸环丙沙星,氟哌酸,米诺沙星和氟苯尼考对常见水产致病菌的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC),结果明:同一抗菌药物对不同致病菌的抗菌效果存在较大差异,不同抗菌药物对同一致病菌的抗菌效果也存在较大差异.使用4倍MBC的药物浓度对嗜水气单胞菌,温和气单胞菌和非O1一群霍乱弧菌杀菌时间随药物种类和致病菌不同而存在差异.关键词:抗菌药物;水产致病菌;体外抗菌作用盐酸恩诺沙星,盐酸环丙沙星,氟哌酸,米诺沙星等喹诺酮类抗菌药物对G,G一细菌均具有强大的抗菌作用,对细菌性疾病具有良好的控制效果.氟苯尼考为氯霉素的替代药物…,在水产养殖中被广泛使用.在水产养殖中,米诺沙星在日本规定可应用于鳗鲡养殖,盐酸恩诺沙星,盐酸环丙沙星,氟哌酸则不得使用;我国恩诺沙星可应用于养殖业,但不得使用于养殖鳗鲡.盐酸环丙沙星,氟哌酸为水产禁用药物.为探索盐酸恩诺沙星,氟苯尼考及米诺沙星在水产养殖中的应用,本文对上述药物进行了常见水产致病菌的体外抗菌试验.l与方法1.1试验材料1.1.1试验菌株非Ol一群霍乱弧菌(V/br/ocho/erae(11011一O1)VNO—O1)),嗜水气单胞菌(AeromonashydrophiaA.h),温和气单胞菌(AeromonassobriaA.s),豚鼠气单胞菌(AeromonascauieA.c)由福建省淡水水产研究所分离保存;哈维氏弧菌(Vibrio胱V.h)由福建省农业科学研究院赠送;迟钝爱德华氏菌(Ed-wardsiellatardaE.t),鳗弧菌(Vtbr/o口ng姗V.a)由福建省防疫站赠送.1.1.2试验药品盐酸恩诺沙星由浙江国邦兽药有限公司生产,含量为99.17%;盐酸环丙沙星由浙江国邦兽药有限公司生产,含量为98.5%;氟哌酸由福建省兽药监察所提供,含量为98.5%;氟苯尼考由浙江海翔医药化工有限公司生产,含量为99.7%;米诺沙星由El本丸红株式会社生产,含量为5%.1.1.3药液配置准确称取上述各种药品每种1g,分别用无菌蒸馏水溶解配置成含量为10000mg/L的原液及时使用.1.1.4试验药液的配置将母液用牛肉膏蛋白胨培养基对倍稀释至所设试验浓度2倍.1.1.5培养基牛肉膏蛋白胨培养基,普通营养琼脂.1.1.6菌液配置保存菌种先接种于普通营养琼脂平板,于基金项目:农业部渔业局资助(2004年03号)作者简介:樊海平(1967一),男,江苏武进人,副研究员,主要从事水产养殖病害研究.第1期樊海平等:盐酸恩诺沙星与其他四种抗菌药物对水产致病菌的体外抗菌作用3530~C培养24h,挑选典型菌落接种于牛肉膏蛋白胨培养基,30~C培养过夜,用牛肉膏蛋白胨培养基作百倍稀释后作为试验菌液.1.2试验方法1.2.1最小抑菌浓度(MIC)的测定采用管外对倍稀释法进行测定,试验药液与试验菌液等量混合.1.2.2最低杀菌浓度(MBC)的测定自最小抑菌浓度试验无菌生长管中以0.01IIll容量接种环挑取一环接种于普通营养琼脂,作次代培养,30~C培养过夜,能杀死原始试验菌(平板上无菌生长)的最低浓度为该药物对该试验菌的MBC.1.2.3杀菌曲线的测定取4倍MBC浓度的药液(米诺沙星除外),分别与等量嗜水气单胞菌,温和气单胞菌和非O1一群霍乱弧菌的菌液混合,对照管中不含抗菌药物;于30~C下培养,间隔0,2,4,6,8,10,12,14,16,18,20,22,24h取出培养液进行平板活菌计数.以培养时间为横坐标,菌落对数为纵坐标,绘出杀菌曲线.2结果2.1体外抑菌作用5种药物对试验菌的最小抑菌浓度和最低杀菌浓度见表1.由表1可见,除豚鼠气单胞菌外,盐酸恩诺沙星,盐酸环丙沙星,氟哌酸对试验菌株的MIC较低,氟苯尼考和米诺沙星相对较高.由此可见,盐酸恩诺沙星对常见水产致病菌的作用效果优于氟苯尼考和米诺沙星.表1五种抗菌药物对试验菌株的MIC与MBC值(mg/L)2.2杀菌曲线盐酸恩诺沙星,盐酸环丙沙星,氟哌酸,氟苯尼考对嗜水气单胞菌,温和气单胞菌和非O1一群霍乱弧菌的杀菌曲线见图1—4.由图可见盐酸恩诺沙星,氟哌酸对试验菌显示了明显,迅速的杀菌作用,12h内即能杀死全部细菌;盐酸环丙沙星需要16—24h;氟苯尼考需要20—22h.3讨论杨雨辉等研究结果表明恩诺沙星对嗜水气单胞菌的MIC与MBC值为0.0125和0.05mg/L,抗菌活性仅次于环丙沙星J,本文所使用的恩诺沙星和环丙沙星是水溶性的盐酸恩诺沙星和盐酸环丙沙星,结果显示盐酸恩诺沙星对嗜水气单胞菌的MIC与MBC值均为0..o488mg/L,但作用效果优于盐酸环丙沙星.水产养殖中的给药方法主要有浸浴与口服,一般药物为水溶性,因而,使用药物的剂量应根据水溶性药物的MIC与MBC值来指导给药剂量.同样,根据杀菌曲线可以看出,有些药物在短时间内不能杀灭病原体,因此,使用不同药物浸浴防治疾病,应保持不同时间才能杀灭致病菌,才能达到控制疾病的目的.福建水产总第104期1翘O51O152O253O时间(h)菌株A.h菌株A.S菌株VNO-O1图14倍MBC浓度的盐酸恩诺沙星对嗜水气单胞菌,温和气单胞菌和非O1一群霍乱弧菌的杀菌曲线棚15螽1o恳5药物对细菌的抗菌效果的研究结果与试验菌株的来源密切相关,肖永红等-4研究环丙沙星对金黄色葡萄球菌,大肠杆菌,沙雷氏菌临床分离细菌的MIC值分别为0.125mg/L,0.5mg/L和1mg/L,而陈汉源等利用菌株研究结果分别为?0.06—4mg/L,?0.06—4(平均为1)mg/L和?0.06—1mg/L,本文所用菌株为临床分离,所得结果与其他来源菌株应有区别,尤其是豚鼠气单胞菌由欧洲鳗鲡败血症分离,可能是应用了大量的抗菌药物控制疾病,导致菌株对试验药物产生耐药能力,所以MIC与MBC值均高于其他菌株.参考文献[1]王丽平,汪善祥,史晓丽等.氟苯尼考体外抗菌活咖l1螽时间(h)菌株A.h菌株A.s菌株VNO—Ol图24倍MBC浓度的盐酸环丙沙星对嗜水气单胞菌,温和气单胞菌和非O1一群霍乱弧菌的杀菌曲线0510152O253O时间(h)菌株A.h菌株A.s菌株VNO—Ol图44倍MBC浓度的氟苯尼考对嗜水气单胞菌,温和气单胞菌和非O1一群霍乱弧菌的杀菌曲线性测定[J].兽药与饲料添加剂,2003,8(2):13,14.刘裕昆,汪复等.临床抗菌药物学[M].[2]戴自英,北京:人民卫生出版社,1989,6.[3]杨雨辉,佟恒敏,卢彤岩等.恩诺沙星在水生动物疾病防治上应用的研究进展[J].水产学杂志,2003,16(1):80,82.[4]肖永红,王其南,钱元恕等.环丙沙星药代动力学和体外抗菌活性研究.中国抗生素杂志,1992,17(4):293,296.[5]陈汉源,张敬德,周乐等.国产环丙沙星的体外抗菌活性研究[J].中国抗生素杂志,1990,15(5):437,444.[6]王丽平,汪善祥,史晓丽等.氟苯尼考体外抗菌活性测定[J].兽药与饲料添加剂,2003,8(2):】3,】4.第1期樊海平等:盐酸恩诺沙星与其他四种抗菌药物对水产致病菌的体外抗菌作用37TheVitroAntibacterialActivityofEnrofloxacinwithOtherFourAntimicrobiaiAgentsAgainstAquaticPathogenicBacteriaFANHai—ping,ZENGZhan—zhuang,LINYu(TheFreshwaterFisheriesResearchInstituteofFujianProvince,Fuzhou35@2,China)Abstract:Theminimalinhibitoryconcentrations(MIC)andminimalbactericidalconcentration(MBC)ofenrofloxaein,eipro-floxaein,norfloxaein,miloxacinandflorfenieolantimierobialagentsagainstaquaticpathogenicbacteriaofAeromona~hydrophia,Aeromonassobria,Aeromona~cavie,Vibriocholerae(non—O1),Vibrioharvey,EdwardsiellatardaandVibrioanguillarumweredeterminedbymeansofagardiskdilutionmethod.Theresultsshowthatthesanleantimierobialagentshadthedifierenteffectagainstdifferentpathogenicbacteriaasdifferentantimierobialagentstosamepathogenicbacteria.Thebactericidaltimeofenrofloxacin,eiprofloxaein,norfloxaeinandflorfenicolagainstAeromona~,lrophia,AeromonassobriaandVibriocholerae(non—O1)weredifferentwithdifferentantimierobialagentsandpathogenicbacteriaatthefourtimesMBCconcentration.Keywords:antimierobialagent;aquaticpathogenicbacteria;vitroantibacterialactivity盒盒盒盒盒盒盒盒盒盒盎盒盒盎盎客盒盒盒盒盒盒盒盒客盒客客盒盒盒盎能盎盎盒客套盒盒盒客盒^^客盒盒客盒客盒(上接第77页)某行为是大禹疏浚公司集体行为缺乏有力的证据.同样,案例二中的章某虽属于承包组成员,但承包组既无法人执照,又无集体名称,无法认定为违法主体.所以二案的违法主体应为现场作业的当事人.2,违法事实:二起案件事实清楚,当事人动机明确,证据确凿,对违法事实无论是当事人还是案中牵涉到的"大禹疏浚公司"和"渔业承包组"其他人员都无异议.3,资源利用权的合法取得并不代表对资源的随意处置,更不意味着可以使用违法的捕捞方法进行资源利用.电力捕鱼既然被渔业法规明确为禁止使用的捕捞方法,就应该严厉打击.3案后的思考和启迪随着水面开发力度的不断加大,水面利用日趋企业化,市场化,综合化,类似上述二起案件的情况也日益增多,如何适应形势发展的需要,正确运用渔业法律法规,妥善处理新形势下出现的渔业违法违规案件,是摆在我们渔业行政执法部门和每个渔业行政执法人员面前的一项新课题.对此,我们谈一些粗浅的看法,与大家探讨.1,渔业违法案件的处罚主要是行为罚,只要符合渔业法规和行政处罚法规定的要求,我们就应该按照法定职责和法定程序进行调查处理.2,渔业资源的合法利用权必须得到有效的保护,但在此掩盖下的违法行为也必须给予有力的打击,资源利用权的合法性不能代表对资源的违法利用.3,对于市场化,企业化运作的渔业资源利用应预先加人管理,引导当事人合理利用资源,合法经营生产.