促肝细胞生长素提取工艺研究

促肝细胞生长素提取工艺研究 促肝细胞生长素提取工艺研究 2006年第l5卷第5期 促肝细胞生长素提取工艺研究 制剂技术 刘忠权',高国峰,陶洪臣' (1.哈药集团三精制药有限公司,黑龙江哈尔滨150060;2.黑龙江省绥化市药品检验所,黑龙江绥化152000) 摘要:目的通过对促肝细胞生长素提取因素的研究,确定最终提取工艺.方法首先确定促肝细胞生长素提取的其他因素,然后将另一个 因素设定几个梯度,以多肽提取率最高者确定其最佳水平,这样即可找出提取因素的所有最佳水平.结果提取工艺为按新鲜小牛肝l倍 质量加纯化水,匀浆4次,反复冻融5次,90?保温5rain变性,6K超滤.结论通过该方法找出了促肝细胞生长素提取的最佳工艺,以此制 备的促肝细胞生长素溶液可使多肽含量达到l,6%. 关键词:促肝细胞生长素;冻融;变性;超滤;提取工艺 中图分类号:TQ460.6文献标识码:A文章编号:1006—4931(2006)05—0053—02 促肝细胞生长素(HGF)溶液是自健康的乳猪或未哺乳新生牛 新鲜肝脏中提取的具有生物活性的多肽溶液,主要成分为HGF,临 床上主要用于各种重型病毒性肝炎的辅助治疗…. 1与仪器 新鲜的未哺乳小牛的肝脏(哈尔滨市肉类联合加工厂提供); 其他试剂均为国产分析纯.JMS一80型胶体磨(河北廊坊通用机 械厂);LXJ一1I型吊桶式离心机(上海安亭离心机有限公司); Mimitan—X型密理博超滤器(6K,美国密理博公司);TU一1901型双 光束紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司); PHS一3C型精密pH计(上海雷磁仪器厂). 2方法与结果 21生产工艺 生产工艺线路为:新鲜小牛肝脏匀浆液垦提 取液坦离心液』墅—HGF. 合格的小牛肝脏准备:取新鲜小牛肝脏,目检,表面应光滑,无 任何豆状突起,色泽为粉红色.将合格的小牛肝脏盛装于洁净的塑 料袋中,密封,一18?以下冷冻保存. 新鲜小牛肝脏匀浆制备:将新鲜的小牛肝脏洗净,剔除筋膜, 切成5,10cm的小块,按总量比例1:1(纯化水:肝脏)加人纯化 水,在胶体磨通人冷却水的条件下,匀浆4次,得肝脏匀浆液. 匀浆液冻融提取:将匀浆液于一18?冷冻,冻实后,室温缓慢 化冻,完全融化后,再将其于一18?冷冻,如此反复5次,破碎肝脏 细胞,提取多肽. 提取液加热变性:将提取液pH值调节为6.5,7.0,水浴加热 至90?,保温5rain,冷却至室温,离心,得上清液. 值RSD=0.28%(n=5),供试品溶液峰面积积分值RSD=0.36% (n=5),表明供试品溶液4h内基本稳定. 精密度试验:精密吸取同一0.12mg/mL绿原酸对照品溶液, 连续进样5次,测定.结果峰面积积分值基本一致,RSD=0.34%. 回收率试验:精密称取已知含量的样品(批号为04071701)6 份,分别精密加人一定量的绿原酸对照品,按供试品的制备与测定 方法,在上述色谱条件下进行含量测定,并计算回收率,结果见表1. 表1绿原酸加样回收试验结果 中国药业ChinaPharmaceuticals 超滤:用截留分子量为6000的超滤膜超滤离心上清液,即得 HGF溶液. 2.2提取方法的确定 生化原料的提取破碎方法一般有机械法,冻融法,冷热交替 法,超声波处理法,加压破碎法,化学法,酶处理法等几种,其中机 械法,冻融法对设备环境条件要求较低,并能较好地保持生化原料 中天然成分的活性.因此,笔者采用了机械法和冻融法联合使用的 提取方法,并对提取过程中的一些影响参数进行了比较. 匀浆次数:将切好的肝脏按总量比例1:1(纯化水:肝脏)加人 纯化水,调节好胶体磨的最小间隙,匀浆,离心,取上清液测定多肽 的含量,结果见图1.可见,匀浆次数越多,粉碎效果越好,多肽提取 率越高;匀浆4次时多肽含量几乎达到最大,再增加匀浆次数,多 肽含量几乎不再增加.因此,匀浆次数选定为4次. 冻融次数 0l234567 图2冻融次数对多肽提取率的影响 样品含量测定:按上述条件与方法测定3批银黄颗粒样品含 量.结果批号为04071701,04071801,04071901的3批样品中绿原 酸含量分别为67.50,57.90,62.7lrag/袋. 3讨论 按照国家食品药品监督管理局《中药配方颗粒管理暂行规定》 要求,在《中国药典》金银花的鉴别和含量测定方法…基础上,笔者 参考有关文献I,对部分实验条件进行优化,并对银黄颗粒的质量 进行了研究.结果表明,所用方法简便可行,重现性好,能有效 控制产品质量,并能确保产品临床用药的安全,有效. 参考文献: 【1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)【M】.北京:化学工业出 版社.2000:177. 【2]苗明三,李振国.现代实用中药质量控制技术【M].北京:人民卫生出 版社.2000:684. (收稿日期-2005—05—18:修回日期:2005—08—10) ? 53? 制剂技术 含量几乎呈直线上升;但5次冻融后,含量随冻融次数增加呈减少 趋势,再增加1次冻融,多肽含量增加不大,反而会延长生产周期. 因此,冻融次数选定为5次. 加水比例:纯化水与肝脏的比例分别按0.5:1,1:1,1.5:1, 2:1加入纯化水,匀浆4次,冻融5次,离心取上清液,测定多肽含 量,结果见图3.可见,加水比例为1:1时,多肽提取率最大;再增 大加水比例,多肽含量无明显提高,反而会使溶液的浓度降低.因 此,选用1:1的加水比例比较合理. 多肽含量/mg 20 l0 0纯化水/肝脏 UU.511)22.5 图3加水比例对多肽提取率的影响 2.3热变性温度和时间的选择 热变性主要目的是使提取液中大分子蛋白质变性沉淀而得到 澄清溶液.不同温度,不同时间的变性试验结果见表1.可见,85% 保温15min,90~C保温5min以上都能达到良好的变性效果,且 90%保温5min条件下变性,表1不同温度,时间的变性试验结果 保温时间短,对溶液中有效成 分破坏较小.因此,选用90~C 保温5min条件下变性较合 理. 2.4超滤膜的选择 时间(min) HGF溶液的国家药品标准中高分子物质检查项以胰岛素(分 子量5800)为对照品.故选用截留分子量为6000的超滤膜进行分 子截留. 2.5样品分析 采用上述工艺研究确定的工艺路线,在符合GMP的生产车间 进行了3批样品的生产,按标准检验各项指标均符合规定【4l,3批 2006年第15卷第5期 样品的分析结果见表2.对加速试验留样6个月的样品进行检验, 各项指标与留样前比较无明显变化,符合标准要求.说明该工艺条 件合理可行,产品质量符合要求,存放期间稳定. 表23批样品质量分析结果 3讨论 优选的工艺条件是将新鲜小牛肝脏匀浆4次,反复冻融5次, 90~C保温5min变性,6000分子量超滤.通过该工艺制备的产品提 取率能达到1.6%(多肽含量/肝脏),且各项指标均符合国家药品 标准.该工艺制备简单,对设备要求低,适合制药企业大规模生产. 参考文献: [1]杨新荣.促肝细胞生长素的临床应用[Jl-医药导报,2003,22(SI):lO. [2]李良铸,李明晔.最新生化药物制备技术[M].北京:中国医药科技出 版社,2001,3(1):9—12. [3]李良铸,由永金,卢盛华,等.生化制药学[M].北京:中国医药科技出 版社,1991:10—30,101—103. [4]WS一10001一(HD一0806)一2002,国家药品监督管理局?促肝细胞生 长素溶液质量标准[S]. (收稿日期:2oo5一O7—26;修回日期:2005—10—17) 翁沥通片生产工艺及生产条件研究 刘秦,张高峰,杨爱玲 (西安阿房宫药业有限公司,陕西西安710016) 摘要:目的探讨翁沥通片的生产工艺条件.方法以翁沥通片处方中粉碎药材粉碎后药粉量为评价指标,确定制粒时所需药材原粉量的平 均收粉率;以处方中提取药材所得干膏量和栀子苷得量为评价指标,确定提取药材时的加水量;考察颗粒成型工艺条件.结果以药材粉碎 后的平均收粉率,提取加水量10倍量所提干膏量配比,湿润剂为90%乙醇,所制得 的颗粒抗潮性强,流动性好.结论该工艺条件为翁沥通 片的大生产提供了试验依据. 关键词:翁沥通片;生产工艺;吸湿性 中图分类号:TQ461;R286文献标识码:A文章编号:1006—4931(2O06)o5—0054— 02 翁沥通片是在翁沥通胶囊的基础上改剂型而成…,其处方组 成,处方量及生产工艺没有任何质的改变,故在此仅对相关参数进 行考察,现报道如下. 1仪器与试药 粉碎机(上海精密实验设备有限公司);干燥箱(上海华东集团 松迪电子仪表有限公司);ZP35B型压片机(上海天祥健台制药机 械有限公司);AG285型电子天平(Mettler—ToledoGROUP);SPD一 10AVP型高效液相色谱仪(13本岛津).栀子苷对照品(中国药品生 物制品检定所,批号为110749—200309);乙醇(宝鸡酒精厂);中药 浸膏粉(自制);药材细粉(自制). 2方法与结果 ? 54? 2.1处方及生产工艺 处方:薏苡仁300g,浙贝母200g,川木通180g,栀子(炒)180g, 金银花200g,旋覆花180g,泽兰180g,大黄60g,铜绿10g,甘草 80g,黄芪(蜜制)240g. 生产工艺:以上11味药材中,取浙贝母,铜绿粉碎成细粉,过 100目筛,备用.取川木通等其余9味药材,加水煎煮3次,每次1h, 合并煎液,滤过,滤液浓缩成相对密度为1.20,1.25(55%热测)的 稠膏,干燥,加入上述细粉,混匀,制粒,压制成1000片,包薄膜衣, 即得. 2.2制备工艺条件考察 2.2.1粉碎工艺研究 中国药业ChinaPharmaceuticals