卡介苗多糖核酸微乳的研究

卡介苗多糖核酸微乳的研究 ? 实用预防医学2006年2月第13卷第1期PracticalPreyentiveMedicine,Feb.2006.V.113,No.1l73 文章编号:1006—3110(2006)010173—03 卡介苗多糖核酸微乳的研究 丁燕飞,姚瑶,姜素芳,陶昱斐 【实验研究】 摘要:目的制备卡介苗多糖棱酸(BCG—PsN)微乳.方法采用磷脂为乳化剂,乙醇为助乳化剂,油酸乙酯为 油相,用改良三角相图法确定微乳区域,优化BCG—PSN微乳处方组成.结果与结论所制得BCG—PSN微乳澄清透 明,性质稳定. 关键词:卡介苗多情核酸;微乳;磷脂;油酸乙酯 中图分类号R186.2文献标识码A StudyonPreparationBCG—PSNMicroemulslonDINGYah—fei’,YAOYao’,JIANGSu一,口ng,eta1.(1.Schoolof PharmaceuticalSciencesofCentralSouthUniversity,Changsha410013,Hunan;2.MedicalCollege,H unanNormal University,Changsha410013,Hunan) Abstract:0bjectiveTopreparepolysaccharidenucleicacidfractionofbacillusCalmette—Guerin(BOG—PSN)mi. croemulsion(ME).MethodLecithinwasusedasemulsifier,anhydrousalcoholaSassistantemulsifier.et hyloleateasthe oilphase.Thetriangularphasediagramswereusedtoidentifytheareaofwlomicroemulsion.Anoptimiz edformulationhad beenestablished.ResultandConclusionTheobtainedBOG—PSNmicroemulsionhasgoodappearanc eandstability. Keywords:PoIysaccharidenucleicacidfractionofbacillusCalmette—Guerin(BCG—PSN);Microemulsion;Lecithin; Ethyloleate 微乳是一种透明,低粘度的热力学及动力学稳定的油水混 合体系,目前已在药学领域广泛应用?].微乳作为药物载体 可延长水溶性药物的释药时间,具有缓释和淋巴靶向作用】. 卡介苗多糖核酸(BCG—PSN,是一种免疫增强剂,能调节机体 的细胞免疫与体液免疫功能,对全身免疫系统具有长期稳定的 激活作用.本文通过选用具有生物相容性的材料将水溶性卡 介苗多糖核酸制备成口服微乳制剂,使其具有淋巴定向性,同 时提高药物在胃肠道的稳定性,促进药物的吸收,以增加药物 疗效. 1仪器与试剂 仪器:旋涡振荡器(上海沪西);1721型电子天平(SARTO— RIUS);电导仪(Lida);90PlusParticleSizeanalyzer(美国Brook— heaven).试剂:卡介苗多糖核酸(BCG—PSN,斯奇康公司惠 赠);大豆卵磷脂(PCSIO0)和蛋黄卵磷脂(E80,德国Lipoid);大 豆卵磷脂(Epikuron200.Degus~);油酸乙酯(EO,上海试剂二 厂);豆油(SBO,营口);丁酸乙酯(EB,上海);无水乙醇(分 析纯)’ 基金项目:中南大学药学院中青年教师科研基金I 作者单位:1中南大学药学院(湖南长沙410013);2湖南师范大 学医学院 作者简介:丁燕飞(1974),女.讲师.通讯作者:姚瑶(1962一),女,副 教授.主要从事药物制剂及新剂型开发研究工作. 2方法与结果 2.1微乳处方组成的筛选根据预试验结果,并参考文献资 料HJ,选择油相(Oil),表面活性剂(sf),助表面活性剂(CoSf)以 及表面活性剂与助表面活性剂的质量比(K)四个影响微乳形 成的关键性因素,每一因素各取三个水平,见表1.选用(3) 正交试验表,进行正交试验.以所得L.微乳区的面积大小 Aw/.为考察指标,进行处方条件的优化,结果见表2. 衰1正交试验因素及水平设计 5l9 394 71 448 l 2 3 3 1 2 2 3 1 27+6 35+9 349 8+3 35143774 “mm0 4918 .2323.3.2 4286 2323.23 ?23456789qm. 174实用预防医学2006年2月第l3卷第1期 PracticalPreventiveMedicine,Feb.2006.Vol13,No.1 由极差分析(Rj)结果可知,因素A(油相)对试验结果影响较 大,各因素取试验结果最优水平,同时考虑到乙醇作为药用辅 料较异丙醇更实用.因此最优处方为A.B.C.D2,即EO/PCS一 100/乙醇/水体系,最佳K为1. 2.2卵磷脂微乳相图研究通过以上因素水平的考察,确定 了微乳的最优处方组成.在EO/PCS一100/乙醇/水体系中,再 1.0oI O 采用改良三角相图即固定水相和助乳化剂比值(W/A)来研 究药用w/o型微乳形成条件,以减少乳化剂用量:在具塞的玻 璃试管中,分别加入一定比例的卵磷脂与油酸乙酯(w/w:9:1, 8:2.7:3,6:4,5:5,4:6,3:7,2:8和1:9),总量各1g,涡旋条件 下向试管中滴加一定浓度的醇水(W/A=0.6)记录系统的状态 变化情况,采用Origin7,0软件绘制改良三角相图,见图1. 1oo 75 50 O.00O 图1微乳三角相圈(M:w/o型微乳区) 2.3BCG—PSN微乳的制备根据对微乳改良三角相图及性 质的研究,综合考虑体系中表面活性剂的用量.选用EO:PC: AlcohOl:H’O=10:10:10:6作为微乳的处方制备BCG—PSN微 乳.将PC和无水乙醇混合后,加EO混合均匀,涡旋条件下,缓 慢滴入BCG—PSN水溶液得澄清,透明的含药微乳. 2.4BCG—PSN微乳的理化性质 2.4.1微乳的外观所得BCG—PSN微乳外观上为淡黄色澄 明均一液体. 2.4,2微乳的鉴别电导法实验证实BCG—PSN微乳的样品 电导率极低,则认为形成w/o型微乳;通过用苏丹红和亚甲蓝 在微乳中的扩散实验,结果红色扩散快于蓝色,则认为形成w/ O型微乳. 2,4,3微乳粒径测定取BCG—PSN空白微乳液适量,用激 光粒子测定仪测定粒子大小及分布范围.结果见图2. BCG—PSN微乳的平均粒径为57.8nm,其中约85%的粒 子的粒径小于80nm,多分散系数为0.153.说明制得的BCG— PSN微乳的粒径分布较为理想. 2,5稳定性的研究 2.5.1室温对微乳稳定性的影响取制得的BCG—PSN微乳 适量于试管内,密封管口,静置常温下室内放置,经放置3个 月微乳剂仍保持澄清透明,未见BCG—PSN析出及油水分层 现象. 2.5.237?水浴对微乳剂稳定性的影响取制得的BCG一 - { - I__ / {-L1O.O1oo.O 圈2微乳的粒径分布(nm) PSN微乳适量于试管内.密封管口,置于37?的恒温水浴箱 内进行水浴观察,经水浴8d微乳剂仍保持澄清透明,未见 BCG—PSN析出及油水分层现象. 2,5,3离心加速试验对微乳剂稳定性的影响取制得的BCG — PSN微乳适量于试管内,密封管I=I,置高速离心机中,以 3000rpm的转速进行离心,经10min离心微乳剂仍保持澄清 透明.未见BCGPSN析出及油水分层现象. 3讨论 微乳形成的关键是选择合适的水,油相,乳化剂和助乳化剂 及其配比.不需要很强的外力做功,这有利于在制备过程中保持 药物的活性.微乳I=I服后可经淋巴管吸收,从而克服首过效应 以及大分子通过胃肠道上皮细胞膜的障碍】,将卡介苗多糖核 酸制备成I=I服药用微乳,可促进药物吸收,提高生物利用度,同 时使药物特意性的向淋巴系统转运. 本实验采用正交设计筛选了微乳组成,再用改良三角相图 法优化微乳形成条件,进一步减少了乳化剂用量,同时选用生物 相容性好及可生物降解的辅料使BCG—P.SN微乳用药更为 安全. 对BCGPSN微乳稳定性进行了初步考察,结果表明:经 室温,加温试验和加速离心试验20份生鸡肉中分离到沙门菌34株,分离率为15.5%,沙门 菌对4种抗生素的耐药率超过30%.结论深圳市生鸡肉中沙门菌污染率严重,沙门菌耐药性值得关注. 关键词:沙门菌;耐药;生鸡肉 中图分类号:R378.22文献标识码:A SurveyonAntibioticResistanceofSalmonellaIsolatesFromRawChickeninShenzhenLinQ—hui(InstituteforDisease Control母PreventionofGuanlan,Shenzhen518110,Guangdong,China) Abstract:ObjectiveToexplorethecontaminationofSalmonellaspeciesandtheirantibioticresistancein rawchick. eninShenzhen.MethodSalmonellaspecieswereisolatedfrOmrawchickenaccordingtoGB47894—94.AntimicrobiaI susceptibilityto19antibioticswastestedbyusingtheK—Bmethod.ResultsThirty—fourSalmonellast rainswereisolated from220rawchickensamples.Theisolationratewas15.5%.ResistancetO4antibioticswaspresentedwi thinmorethan 30%samples.ConclusionThecontaminationofSalmonellaspeciesandtheantibioticresistanceareseri ousinrawchick eninshenzhen. Keywords:Salmonella;Antibioticresistance;Rawchicken 沙门菌是引起人畜共患疾病的重要肠道病原菌,也是在我 国引起细菌性食物中毒位居首位的食源性致病菌”.).监测深 圳地区生鸡肉沙门菌的污染状况与耐药性,将为本地区沙门菌 食物中毒和感染的防治工作提供科学依据. 1材料与方法 1.1材料 1.1.1标本220份深圳市售生鸡肉. 1.1.2诊断血清沙门多价血清(卫生部成都生物制品 研究所). 1.1.3抗生素药敏纸片氨苄西林(AMP,10g/片),哌拉西 林(PIP,100g/片),头孢噻吩(CEP,30g/片),头孢呋辛 (CXM,30g/片),头孢曲松(CRO,30正g/片),头孢美唑(CMZ, 30g/片),氨曲南(AZT,30g/片),阿莫西林一克拉维酸 (AMC,lOg/片),链霉素(STR,10g/片),庆大霉素(GEN,10 g/片),奈替米星(NET,30g/片),妥布霉素(TOB,10 作者单位:深圳市宝安区观澜预防保健所(广东深圳518110) g/片),萘啶酸(NAL,30g/片),诺氟沙星(NOR,10g/片),环 丙沙星(CIP,5g/片),四环素(TCY,30g/片),氯霉素(CHL, 30g/片),磺胺甲基异恶唑(SSS,300g/片)和复方新诺明 (SXT,25g/片),购自北京天坛药物生物技术开发公司. 1.2方法 1.2.1沙门茵分离鉴定按国标GB/T4789.4—94进行分离 和鉴定,用玻片凝集法对所分离的沙门菌进行血清学分型. 1.2.2抗生素敏感试验质控菌株为大肠杆菌ATCC25922, 采用WHO推荐的K—B法,参照美国国家临床试验标准委员 会(NCCLS)方法2001年版进行操作及结果判读. 2结果 2.1沙门茵分离鉴定从220份生鸡肉中分离到沙门菌34 株,分离率为15.5%.34株沙门菌血清学分型结果如下:伤寒 沙门菌9株,阿贡纳沙门菌7株,肠炎沙门菌7株,德比沙门菌 5株,鼠伤寒沙门菌4株,圣保罗沙门菌2株. [参考文献] 【1JLamreneeMJ.Surfaetantsystem:Microemulsionsandvesiclesasvehi. tiesfordrugdelivery[J].EurJDrugMetabPharmacokinet,1994, 19:257. [2]鲁莹,蒋雪涛.新型药物载体:微乳[J],国外医学一合成药,生化 药.制剂分册,1999,20(4):253. [3]LeeMJ,LeeMH,ShimCK.Inversetargetingofdrugtoretieuloen- dothelialsystemrichorgansbylipidmicroemulsionemulsifiedwith poloxamer338[J].IntJPharm.1995,113:175. [4]Fernandez,Patrick;Andr6,Val6rie.Nanoemulsionformationby emulsionphaseinversion[J].ColloidsandSurfacesA:Physieochemieal andEngineeringAspects,2004,251(1—3):53—58. [5]陆彬.张正全,用三角相图法研究药用微乳的形成条件[J].药学学 报,2001,36(1):58—62. [6]张正全,陆彬.微乳给药系统研究概况[J].中国医药工业杂志, 2001,32(3):139(收稿日期:2005一O9一l3)