【doc】在外耳道乳头状瘤组织中检测到人类乳头瘤病毒辣DNA序列

【doc】在外耳道乳头状瘤组织中检测到人类乳头瘤病毒辣DNA序列 在外耳道乳头状瘤组织中检测到人类乳头 瘤病毒辣DNA序列 7『-》; 中华微生物学和免疫学杂志I993年第13卷第2期 在外耳道乳头状瘤组织中检测到 人类乳头瘤病毒DNA序列 L蒋祥年茅一萍.,亭明发 麻晓迁张建是姚青橱志坚. 疋, f1) 应用三对寡核苷酸71物和多重PCR扩增法对16饲人外耳道乳头状瘤组织进行人乳头瘤病毒(HpV)感染分 型检测.结果显示,HPV一6型DNA阳性率为100(is/is),HPV--Il,一16型DNA均为75(12/16),三者均具 有较高的感染率,明HPV可能是牡耳道乳头状瘤的致病因子.?. 关键调:人乳头瘤病毒?!:运-~PCR!!旦墨b爿il韬r善 外耳道乳头状瘤(Papillomatosisofexter— nalearcana1)为我国常见耳疾,国外步有报道. 此病多发生于男性,男女患者比例为131.本 病虽属良性肿瘤,但也有可能恶变.究其病因, 推测可能与特定病毒有关,理发时挖耳可能为 其传播途径.1977年zurHausen.等提出人 类乳头瘤病毒(Humanpapillomayirus,HPV) 在宫颈癌病因中有重要作用,随后有许多报道 证实,很多良性肿瘤中存在HPV感染,并可能 恶变}恶性肿瘤如生殖器癌,舌癌,食管癌,肛门 癌,喉癌与HPV有关,甚至结肠癌中也检测到 HPV基因.1988年Zarod在研究喉乳头瘤 转变为喉癌时提出"病毒一乳头瘤一癌的发生 模型.鉴于上述情况,我们应用PCR技术对16 倒外耳道乳头状瘤石蜡标本进行敏感地检测分 型,以探讨HPV与国人外耳道乳头状瘤的可能 关系. 材料与方法 1.病饲:16饲外耳道乳头状瘤活检组织标本,为 本院耳鼻咽喉科1991年以来送病理科确诊的石蜡包 埋组织块,均取自男性患者. 2.HPv,?,一ll,一l?型阳性克隆:由禧国海禧堡 肿瘤研究中心zurHausen教授惠赠. 3.DNA的筲法嗣备:常规切取5,1m厚 切片3,5片(视组织块大小而定),经二甲苯脱蜡,无 水乙醇漂洗,晾干,加适量双蒸水,用细玻璃棒尽量捣 碎,lOOU水搭变性10分钟后,直接用于PCR扩增. ?.寡聚桉苷曩引物:HPV一6,一11,一16型特异 性引物序列参照Pao拥和高基民婀的文献报道.由上海 细胞学研究所合成.序列如下: HPV一6 1.5一AGACCAGTTGTGcAAGACTGTTAA一3 2.5J——GCACGTCTAAGATGTCTTGTTTAG——3r HPV—I1 1.5一AGACCAGTTGTGCAAGACTGTTAA一 2.5一AAGGGAAAGTTGTCTCGCCACACA一3 HPV—I6 I.5--GCTGTTAGGCACATATTTT--3' 2.5一ATGAACTAGG0T0ACATTT一3r 阳性扩增产物应分别为:263bp,144bp,100bp. ;.多一PCR扩增:取上述简法制备的横板DNA, 直接加入含有以上三对特异引物,zUTaqDNA多聚 酶,总体积为51的PCR反应缓冲液中,在DNA热循 环仪(PE公司割)中进行反应.循环参数为:93?×30s, 55?×45搴,72U×45搴.35十循环,终止于72?并延伸 10分钟. 阳性对照为HPV一6,一11,一l6克隆之片段.阴 性对照为人正常组织DNA. ?.扩增产物的檀铡t取21PCR产物,进行2琼 脂糖凝胶电泳,EB染色后,紫外灯下j匣察并照相.DNA 为×174DNA/HeaI. I.南京铁道医学院基硅部分子生物室南京 2.南京医学院散生物学教研室 3.江苏省肿瘤研究所,南京 -现在南京大学生化系 结果 PCR扩增结果见附图.用三对寡核苷酸作 引物,进行多重PCR扩增,以人正常组织DNA 作模板均显示阴性;以HPV一6,一1I,一6阳 性克隆作模板均显示特异阳性;以16蜘耳道 中华微生物学和免痤学杂志1993年第j3卷第2期 乳头瘤组织DNA为模板,16例均为HPV一6 DNA阳性,HPV一11,一16DNA各有12倒阳 性(75).其中有8倒(50)HPV一6,一1l,一 16DNA三重阳性;HPV一6,一l1或HPV一6, 一 】6DNA双重阳性各有d例(25). 附图PCR扩增补耳遭乳头状瘤组织DNA中HPV6,11,16DNA产物(2琼脂糖凝胶) Fig.AB—ege】analysisofDNAfromHPVpecificPCRaplificalion LaneN:NeBalivecontrolLaneP:Poailivecontrol Lane1,16:16p~cimcns.263,j44tIOObpbandsindiCaleHPV一6.一11,一 16.r~pcctivcly 讨论 乳头状瘤(papilloma)为常见的良性被覆 ,阴茎,肛 上皮病变,多见于皮肤,El腔粘膜,喉 门附近等处.有关耳鼻咽喉区乳头状瘤的病因 存在三种学说.:病毒学说,炎性病变组织化生 学说,内分泌改变学说.1982年Mounts等用 Southern杂交首次从成人型乳头状瘤中检出 HPV一6DNA,提出成人型乳头状瘤与HPV 有关.1990年堤康一朗进一步证实两者的关 系.外耳道乳头状瘤,据肖轼之研究认为,其病 因为一种特殊病毒.'理发师挖耳为其传播 途径. 我们对16例外耳道乳头状瘤组织的PCR 分型检测,发现瘤组织中HPV检出率分别为 HPV一6DNA,1O0(16/16)1HPV一11 DNA,75(12/16);HPV一16DNA,75(12/ 16).并存在双重与多重感染.我们的结果表明 HPV与外耳道乳头状瘤的发生可能有重要关 系. HPV与许多人类疾病与癌有关.不同型别 表现出不同的症状.目前认为HPV—l6,,18, 一 3l,一33型为主要致癌倾向HPV,称为"高 危HPV;HPV一6,一11主要存在于癌前疾病 中,是为"低危HPV".肖轼之等报道外耳道 乳头状瘤恶变率仅为2.09.,倪合也等报道 为5.7(3/52).",我们在16例外耳道乳头状 瘤中检测到12倒(75)中有HPV一16DNA 序列,均尚未恶变.尽管HPV感染可能存在地 区差异,但总的看来,外耳道乳头瘤恶变率不 高这可能表明HPV一16致癌变具有严格的 细胞特异性,致细胞转化需要通过包括病毒本 身和细胞因子在内的多种因子,多层次的相关 作用. HPV至今未能在体外培养,其生物学行为 的研究要借助于分子生物学手段.最近已有 PCR方面的工作.本文首先应用多重PCR技 术在国人外耳道乳头状瘤组织中进行HPV一 6,一儿,一16型DNA分型检测,16例中阳性 率分别为1o0,75,75.这表明PCR技术 具有很高的敏感性,对探讨病因具有重要价值. 1993年第13卷第2 参考文献 I.肖轼之,等-井耳道乳共状瘤.中华医学杂志,1949,() l297. 2.z.IrHausenH?.tal-Attemptstodetectvspecific DNAsequenceinhumant~mor:Nucleicacidhybrididatian withcomplementaryRNAofhumanwartidrus-IntJC3n— vet,1974,l3l650. 3.KkganDtte-AssociationofhumanpapiHomaidrusand colonplB-ArchofSurqery?199O,125t862. 4-ZAP,etal?Malignantprogressionollaryngealpap~- Iomaassocmtcdwithhumanp8pino?aBtypeb(HPV — b)DN^-JClpatholt1988,41I280- 8-PaoCC—eta1.Detectianofhumanpapillomavirusesincer— vicorasinalveilsusingpolymerasechainreaction-Jhf.n Dis,1990,161tll3. ?93? 6.高基民.等.应用体外基因放大法检测宫顼癌组织中人乳共 瘤病毒l6垄DNA.中华医学杂志.1991,71l391. .北京一人民卫生出版社. 7.肖轼之着,耳鼻咽喉科学.第3腹 1889,664. 8.埋康一朗,成人喉共乳肿l:与卞竹HumanPapiHe一 删s关与——南种0成人喉乳头肿小儿E同样 T,工性南.医学南咖^.1890,152?592. 9.曹亮振,等,耳鼻咽喉科学常觅良性肿瘤.觅:陶正簋主编. 耳鼻咽喉科学理论与实鹿,第1版.北京:人民卫生出腹社, 1991.412—421. 10-Batt~taC?eta1.Presenceofhumanpapillomavirustype, 16and18in8enitinlWillsandcervneopl~ias-M On~olTumorPhatmacother,1988,8l1. 11.倪台也,等.耳鼻咽喉部乳共状瘤.中华耳鼻咽喉科杂志. 1881.6l244. (收蔷:l992一O7,l7售回:1992—09—12) HUMANPApILLoMAVIRUSSDETECTEDINPApILL0M^ToS 0FEXTERNALEARCANALBYP0LYMERASECHAINREACT10N XieWei,etal '州珥抖'Df4r口面f口,,?4_m4I|Me~'mt~llege) ThreesetsofprimerswereusedtodetectandidentifyHPViII16specimensofpapfllomatosiso fexternalear canalbymultiplePCR.Thep~itivepercentagesofHPV一6DNA.HPV一11DNAandHPV 一16DNAinall16 speCimenswere100(1e/16).75(12/10and75(12/16),respectively.ThedatasusgestthatHpvcat1proba- blybethepathogenofpapillomatostsofexternalearcana1.However,thehishposhivepercentaseofHPV——16 DNAinthesepapitlomawithoutmaligt~nt出 angesinparallelindicatethatthecompetenceofHPV一16causing mal~tumtchangemayheresulatedbysomeotherelements,especiallybyhostwlls-Anyway,thetechnologyof PCRthem08Isensitivei~egrJftandplaysnaimportantrolefordetectingtheaetidlogy- K目w~rdz:Papitlematm/sofexternalearcanal;HumanOapillomavJru9(HPV)olymerase曲且il.rvactinn} Aetinlogy 更正 1.本刊今年一期第12页'长期培养时抗CD3对胎脾细胞增殖厦LAK活性的影响 卜文中所有D3均为 抗CD3. 2.第46页'聚合酵链反应柱抄眼表原体厦其质粒特异核酸卜一文的第一作者汪妍 应为饪玎妍.