沙门氏菌检验

沙门氏菌检验 摘 要 通过本实验学习沙门氏菌的检测方法和技术，了解沙门氏菌的一些生化特性;本实验是检测鸡肠的沙门氏菌，先用显色培养基找出可疑菌落，再做生化试验找出可疑的典型性的沙门氏菌，再通过血清学试验最终确定;实验检测结果与典型性沙门氏菌又很大出入，但是血清学鉴定是阳性;最后只判断出是沙门氏菌。 关键词:沙门氏菌 接种 生化试验 血清学鉴定 1 前言 沙门氏菌病是指由各种类型沙门氏菌所引起的对人类、家畜以及野生禽兽不同形式的总称。感染沙门氏菌的人或带菌者的粪便污染食品，可使人发生食物中毒。据统计在世界各国的种类细菌性食物中毒中，沙门氏菌引起的食物中毒常列榜首。我国内陆地区也以沙门氏菌为首位。沙门氏菌病的病原体。属肠杆菌科，革兰氏阴性肠道杆菌。已发现的近一千种(或菌株)。按其抗原成分，可分为甲、乙、丙、丁、戊等基本菌组。其中与人体疾病有关的主要有甲组的副伤寒甲杆菌，乙组的副伤寒乙杆菌和鼠伤寒杆菌，丙组的副伤寒丙杆菌和猪霍乱杆菌，丁组的伤寒杆菌和肠炎杆菌等。除伤寒杆菌、副伤寒甲杆菌和副伤寒乙杆菌引起人类的疾病外，大多数仅能目引起家畜、鼠类和禽类等动物的疾病，但有时也可污染人类的食物而引起食物中毒。 2 实验材料 2.1 材料 鸡肠、BPW培养基、TTB培养基、SC培养基、BS培养基、HE培养基、营养琼脂、三糖铁(TSI)琼脂、蛋白胨水、靛基质试剂、尿素琼脂(pH 7.2)、氰化钾(KCN)培养基及其对照培养基、赖氨酸脱羧酶试验培养基及其对照培养基、甘露醇、山梨醇、邻硝基酚 β-D半乳糖苷(ONPG)、沙门氏菌O和H诊断血清、生化鉴定试剂盒。 2.2 实验器材 250mL三角瓶，100mL量筒，培养皿、移液枪，注射器，酒精灯，接种环，接种针、载玻片、牛皮纸、橡皮筋、报纸，手提式高压灭菌锅，电磁炉，恒温箱，均质器、不锈钢杯等。 1 3 实验方法 3.1培养基的配制 分组配制BPW培养基、TTB培养基(碘液、煌绿在培养基灭菌冷却后加入)、SC培养基、BS培养基、HE培养基、营养琼脂培养基。 3.2增菌 称取25g(mL)样品放入盛有25 mL BPW的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min,2 min。轻轻摇动培养过的样品混合物，移取5mL，转种于50mL TTB内，于42 ??1 ?培养 18 h,24h。同时，另取5 mL，转种于50 mL SC 内，于 36 ??1 ?培养18 h,24 h。 3.3分离 每个样品，选择3个适宜的连续稀释度分别用接种环取增菌液 1 环，划线接种于一个 BS 琼脂平板和一个 HE 琼脂平板 。于 36 ??1 ?分别培养 18 h,24 h(HE 琼脂平板)或 40 h,48 h(BS琼脂平板) ，观察各个平板上生长的菌落,各个平板上的菌落特征。 3.4生化试验 自选择性琼脂平板上分别挑取 2 个以上典型或可疑菌落，接种三糖铁琼脂，先在斜面划线，再于底层穿刺;继续接种赖氨酸脱羧酶试验培养基、蛋白胨水、靛基质试剂、尿素琼脂(pH 7.2)、氰化钾(KCN)培养基、邻硝基酚 β-D半乳糖苷(ONPG)培养基、甘露醇、山梨醇和在营养琼脂平板划线，于36??1 ?培养 18 h,24 h，必要时可延长至 48 h。然后对照国标上面的表判断是否是沙门氏菌、是哪种类型的沙门氏菌。 3.5血清学鉴定 在载玻片上滴一滴血清，然后用接种环挑取一小块菌落沾到血清中央搅匀，静置2min，观察细菌的凝集状况。 4 结果与 检测的结果表: 检测项目 产气 硫化氢 赖氨酸脱羧酶 蛋白胨 尿素 氰化钾 甘露醇 山梨醇 ONPG 结果 + + + + + + + + + 本次实验的全部的检测项目都是显阳性，与典型性沙门氏菌有很大差别。但是做血 2 清学实验的时候，有发生凝集现象。经过小组讨论，认为最大原因是因为接种的时候取的不是单一分离的菌落，而且接种量都比较大，可能同时取了不同种类的沙门氏菌，以致每一个都是阳性，但是血清学实验是阳性，所以最后还是判断该细菌为沙门氏菌，但是细致的类型还是无法判断的出来。 5 讨论 本次实验在生化试验的检测项目上与典型性沙门氏菌的显色反应有很大出入，但是在血清学实验是阳性，根据分析，原因如下: 1.接种的时候，取的菌不是同一个菌落(由于制备的培养基培养出来的单菌落比较小，取了附近的几个菌落)。 2.KCN瓶口打开太久，挥发过多，效力远远不及。 3.划线的时候，取样过多或是过少，导致菌落大面积聚集在一起或是只有很小的一点，不能很好地取样。 其中又以原因1为主要原因。 参 考 文 献 [1]沙门氏菌检验GB 4789.4-2010.食品安全国家,中华人民共和国卫生部 [2]PKsou资源网.文章仓库.自然.微生物.沙门氏菌2010.8.21 [3]谭镜明.罗东生 湖南畜牧兽医 湖南农业大学动物医学院 2009.8.6 3