标准曲线法测定硫酸庆大霉素片的抗生素效价

标准曲线法测定硫酸庆大霉素片的抗生素效价 标准曲线法测定硫酸庆大霉素片的抗生素 效价 2007年第16卷第15期 标准曲线法测定硫酸庆大霉素片的抗生素效价药物鉴定 田光彩 (河南省濮阳市食品药品检验所,河南濮阳457000) 摘要:用标准曲线法测定硫酸庆大霉素片的抗生素效价,其浓度在4.2—10.6U/mL范围内菌圈清晰,标准品茵圈直径与中心浓度菌圈的 差与抗生素浓度对数线性关系良好(r=0.99864),结果重现性好,效果满意. 关键词:标准曲线法;抗生素效价;硫酸庆大霉素片 中图分类号:11927.1;11978.12文献标识码:A文章编号:1006—4931(2007)15—0033—02 硫酸庆大霉素片属氨基糖苷类药物,与氨基糖苷类其他抗生 素比较,抗菌谱广,抗菌活性强.2005年版《中国药典(二部)》 用二剂量法或三剂量法…测定其抗生素微生物效价.笔者用标准 曲线法(又称一剂量法)[21测定其效价,取得了良好效果. 1仪器,试药与菌种 仪器:CAM—m型抑菌圈自动测量仪(上海波浦电脑系统工程 有限公司),H.S电恒温水浴锅(上海医疗器械厂),隔水式PYX— DHS一40X5型电热恒温培养箱(国营创新医疗器械厂),L一 160DTP分析天平(日本岛津公司),XXQ.SG41.280型手提式蒸气 灭菌器(上海华线医用核子仪器厂),测定抗生素效价用培养皿(直 径90mm),牛津杯,陶瓦盖等. 试药及菌种:磷酸二氢钾(分析纯),磷酸氢二钾(分析纯),硫 酸庆大霉素片(规格40000U,批号为20050707,20060504, 20060401,20060405,开封制药<集团>有限公司);抗生素检定培养 基I(pH值为7.8—8.0,中国药品生物制品检定所);短小芽孢杆 菌【CMCC(B)63202,河南省药品检验所】. 2方法与结果 2.1缓冲液,茵悬液及双碟制备 取磷酸氢二钾11.18g与磷酸二氢钾0.82g,加水使成2000mL, 滤过,在115~C灭菌30min,即得磷酸盐缓冲液(pH=7.8).取短 小芽孢杆菌[CMCC(B)63202】的营养琼脂斜面培养物,接种于盛 有营养琼脂培养基的培养瓶中,在35,37?培养7d,用革兰氏 染色法涂片镜检,应有芽孢85%以上,用灭菌水将芽孢洗下,在 65~C加热30min,即得短小芽孢杆菌菌悬液.取直径约90mm,高 16,17mm的平底双碟,分别注入加热融化的抗生素检定培养基I 20mL,使在碟底内均匀摊布,放置水平台上使凝固,作为底层; 另取抗生素检定培养基I适量加热融化后,放冷至60~C,加入短 小芽孢杆菌菌悬液适量(能得清晰的抑菌圈为度,使标准品溶液 的中心浓度所致的抑菌圈直径为15—17mm)摇匀,在每一双碟 中分别加入5mL,使在底层上均匀摊布,作为菌层.放置水平台 上冷却后,在每一双碟中以等距离均匀放置牛津杯6个,用陶瓦 圆盖覆盖,备用. 2.2标准曲线制备 中心浓度选择:根据抗生素的对数浓度(剂量)与抑菌圈(反 按供试品溶液制备方法处理3批样品.精密吸取供试品溶液 与对照品溶液各10,注入色谱仪中,记录峰面积,以外标法计算 含量.结果批号为20040401,20040402,20040403的3批样品中原 儿茶醛平均含量分别为0.159,0.130,0.152mg/粒. 3讨论 将原儿茶醛对照品溶液置紫外一可见分光光度计于200,400am 波长范围内扫描,结果原儿茶醛在280am波长处有最大吸收,故 选择280nm为检测波长.根据10批样品的含量测定数据,暂规定 本品含丹参以原儿茶醛(CH-O)计,不低于0.10mg/粒. 中国药业ChinaPharmaceuticals 应)关系的线性范围,选择中心浓度Co=6.8U/mL. 标准溶液浓度确定:各剂量按等比级数稀释,剂距为1:0.88, 算出与中心剂量邻近的2个高低浓度,c0+-及c0--,再分别计算各 剂量的浓度,各种浓度C(k-一‰)分别为4.2,4.8,5.5,6.4,7.2, 8.2,9.3,10.6U/mL. 硫酸庆大霉素标准溶液制备:精密称取硫酸庆大霉素标准品, 用灭菌水制成1000U/mL的溶液,精密吸取10mL,置100mL量 瓶中,加上述灭菌磷酸盐缓冲液(pH=7.8)稀释成100U/mL.再分 别精密吸取6.8,4.2,4.8,5.5,6.4,7.2,8.2,9.3,10.6mL,置100mL 表l硫酸庆大霉素标准曲线试验数据 参考文献: [1】郑虎占,董泽宏,余靖,等.中药现代化研究与应用(第一卷)[M】. 北京:学苑出版社,1998:4225. [2】苗明三,李振国.现代实用中药质量控制技术[M】.北京:人民卫生出 版社,2000:12. [3】葛建华,龚旭东,窦志华,等.高效液相色谱法测定丹参口服液中原儿 茶醛的含量[J】.时珍国医国药,2004,15(5):266. [4】邵宪平,杨广德.HPLC法测定乳块消片中原儿茶醛含量[J】.西北药 学杂志,2000,15(2):61. (收稿日期:2006—11—16) ? 33? 制剂技术 翻白草中儿茶素的提取工艺研究毒 张颖,巩学勇,冀海伟,付晓秀,齐永秀,高允生 (泰山医学院,山东泰安271000) 2007年第l6卷第15期 摘要:目的研究翻白草中儿茶素的最佳提取工艺.方法以儿茶素的提取含量为评价 指标,采用超声波提取法,通过正交试验研究不同浓 度乙醇,提取次数,提取时间,料液比4个因素对儿茶素提取的影响,并筛选出最佳 提取条件;用高效液相色谱法测定含量,以甲醇一水一 乙酸(25:74.5:0.5)作为流动相,流速为1.0mL/min,检测波长为280nm.结果最佳提取 条件为浓度30%的乙醇,料液比1:15,提取 3次,每次提取20min;儿茶素的含量茎叶中为0.2166mg/g,根中为0.1560mg/g,平均 回收率为98.52%,RSD为2.98%.结论该方法 简便,迅速,测定结果可为翻白草在临床用药中的安全性和有效性提供科学依据. 关键词:翻白草;儿茶素;超声波提取法;高效液相色谱法;正交试验 中图分类号:TQ461文献标识码:A文章编号:1006—4931(2007)15—0034—03 OptimizationofCatecinSExtractionTechnologyinPotentillaDiscoloris ZhangYing,GongXueyong,靠Haiwei,FuXiaoxiu,QiYongxiu,GaoYunsheng rTaishanMedicalCollege,Taian,Shandong,China271000) Abstract:ObjectiveTostudytheoptimalextractiontechnologyofcatecininpotentilladiscoloris,MethodsTheextractiondeterminationof catecinwasastheevaluatingindex.Orthogonaldesignmethodandultrasonicextractiontechnologywereusedforstudyingtheeffectof alcoholconcentration,rateofsolidtosolution,ultrasonictimeandtimes.HPLCwasused.ThemobilephaseWasmethanal—H20一 ~H3COOH(25:74.5:0.5),theflowrateWas1.0mL/min,thedetectingwavelengthwas280am.ResultsThebestextractingtechnical conditionWasasfollows:30%alcohol,therateofsolidtosolutionfor1:15,extractedfor3times,eachtimefor20min.Thecatecincon— tentsinleavesofpotentilladiscoloriswas0.2166mg/g,0.1560mg/ginroot.TheaveragerecoveryrateWas100.41%,RSD=1.74%. ConclusionThemethodisquickandsimplewithgoodrepetition.Thedetectingresultscanprovidethescientificbasisofstyand effectivenessforclinicaluseofpotentilladiscoloris. Keywords:potentilladiscoloris;catecin;ultrasonicextractiontechnology;HPLC;orthogonaldesign 翻白草又名鸡腿儿,反白蒿子,鸡腿根,叶下白,白背叶等,始研究证明,翻白草有抗菌, 止泻,抗肿瘤和免疫抑制作用",以及降 载于《救荒本草》,为蔷薇科(Rosaceae)委陵菜属植物翻白草Poten.血糖作用"】. 翻白草中的成分有石竹造苷元,d一儿茶素】,5种可 tilladiscolorBge.的带根全草,性平,味甘,微苦,功能清热解毒,消水解鞣质f6】,没食子酸,原儿茶酸,槲皮黄素和熊果酸等,其中儿茶 肿止血…,可治疗痢疾,疟疾,肺痈,疥痈,咳血,崩漏,疥癣.现代素具有抗氧化,预防心血管疾病,抗菌消炎,防辐射等多种生物活 泰安市科技基金资助项目,项目编号:20042—49. 量瓶中,用磷酸盐缓冲液(pH=7.8)稀释至刻度,制成中心浓度为 6.8U/mL及C(k-一l【8)各种浓度的标准溶液. 标准曲线制备:取备妥的双碟24只,分为8组,每组3只,将 每组各碟内间隔的3只牛津杯滴满标准品,cs即浓度为4.2— 10.6U/mL的溶液;另3只牛津杯内,均滴满标准品中心浓度 即6.8U/mL的溶液.在36?下培养14—16h后,逐一测量每个抑 菌圈直径.分别求得每组3个双碟中心浓度所致的抑菌直径平 均值yo,C1一所致抑菌圈直径的平抗生素浓度对数 均值yk(即.).令=一,可得1.60 出8组双碟.的8个反应参数(表1o1.40 以几值为横坐标,相应抗生素浓度对1.20 数为纵坐标,在方格纸上标点,将各点1.00 联结即成标准曲线(见图1),回归方程 Y=0.15442X+1.31954,r=0.99864. 2.3供试品效价测定 一 202 图1标准曲线图 测定方法:取中心浓度的标准溶液,并取供试品预估效价后, 取重量差异项下研细粉,精密称取适量,加灭菌水制成每1mL中 约含1000U的溶液,摇匀,静置,精密量取上清液适量,用磷酸盐 缓冲液(pH:7.8)稀释至与标准品中心浓度相同的供试液.取备妥 的放置6只牛津杯的双碟,一般不小于3个,在每一双碟中,间隔 的3只牛津杯中分别滴满中心浓度的标准液,另3只牛津杯中滴 满供试液.在36?下培养1416h后,测量各抑菌圈的直径.分别 ? 34? 求得标准液抑菌圈的直径,再求得标准液抑菌圈直径平均值和 供试液抑菌圈直径的平均值,算出的差数为(^).据此在标准曲 线上读取供试液的浓度,即可转换成供试品所含效价U/mL,亦可 以代入直线回归方程,算出供试品的效价. 样品效价测定结果:用此法测表2样品测定结果(%,=4) 定硫酸庆大霉素片(批号分别为 20050707,20060504,20060401, 20060405),并与二剂量法比较,结 果见表2. 2.4重现性试验 取硫酸庆大霉素片(批号为20060401),按本法测定6份,其平 均值为98.4%,RSD为1.36%. 3讨论 本法测定硫酸庆大霉素片抗生素效价,选标准品中心浓度为 6.8U/mL,加菌液适量可行,直径在15—17cm的菌圈边缘清晰. 本法与二剂量法比较,结果无显着差异,虽操作烦琐,但结果准确, 重现性较好. 参考文献: [1】国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[M】.北京:化学工业出 版社,2005:731,附录8l一84. [2】马绪荣,苏德模.药品微生物学检验手册[M】.北京:科学出版社, 200l:231—234. (收稿日期:2006—12—15) 中国药业ChinaPharmaceuticals