1、survivin表达与含顺铂方案一线化疗治疗晚期肺腺癌患者疗效和预后关系

1、survivin表达与含顺铂一线化疗治疗晚期肺腺癌患者疗效和预后关系 1、survivin表达与含顺铂方案一线化疗治疗 晚期肺腺癌患者疗效和预后关系 肿瘤防治研究2008年第35卷第5期?335? ERCC一1,survivin表达与含顺铂方案一线化疗 治疗晚期肺腺癌患者疗效和预后关系 陈小兵,李宁,罗素霞,曾军杰 RelationshipbetweenExpressionofERCC-1,survivinandbothEfficiencyandPrognosisof Cisplatin—containedFirst-lineChemotherapyinAdvancedLungAdenocarcinoma CHENXiao-bing,,LINing2,LUOSu—xia,ZENGJun-jie2 I.TheFirstAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversity,HenanProvinceTumorHospital,Zheng— zhou450008,China;2.He'nanProvinceTumorHospital Abstract.-ObjectiveToanalyzetherelationshipbetweenexpressionofERCC-1(excisitionrepaircross complement一 1),survivinandsensitivityandprognosisofcisplatincontainedregimensfirst—linechemo — therapyinadvancedlungadenocarcinoma.MethodsIHCwasusedtoevaluateexpressionofERCC-1and survivinin80pathologicallyconfirmedadvancedlungadenocarcinomapatientsgivencisplatin-contained regimensfirst— linechemotherapy.Theresponserateandsurvivaltimewereanalyzedaccordingtotheex- pressionofERCC-1andsurvivin.ResultsOnly77patientscouldbereviewedbyIHCstaining.Theex— pressionratesofERCC-1andsurvivinwere33.77and53.25respectively.Theworseresponserate 收稿日期:2007—09—13;修回日期:2008—02—03 基金项目:河南省科技攻关资助项目(200538) 作者单位:1.450008郑州大学第一附属医院;2.河南省 肿瘤医院内科 通讯作者:罗素霞,E-mail:luosxrm@163.com 作者简介:陈小兵(1973一),男,博士在读,主治医师,主 要从事肺癌,乳腺癌及消化道癌的个体化化疗,肿瘤耐药和 生物治疗研究 andshorterTTP/PFScouldbe identifiedinERCC一1positivegroup. Patientswithpositiveexpressionof survivinhadworsesurviva1time.Con— clusionExpressionofERCC-1may beamolecularmarkerofcisplatin-con— tainedregimensfirst—-linechemothera—. PYresistanceandpoorprognosisinad— vancedlungadenocarcinomapatients. 参考文献: [1]ChenKH,WangFQ,ZhangJH,eta1.Clongingandexpression ofanovelpartialcDNArelatedtohypertension[J].ClinMed J,1998,111(4):383—384. [2]ChenKH,GuoX,MaD,eta1.DysregulationofHSGtriggers vascularproliferativedisorders[J].NatCellBiol,2004,6(11): 872—883. r3]FrinaAR,TacconelliA.CappabiancaL,eta1.Inhibitionofhu— manMDA-MB-231breastcancercellinvasionbymatrixmetal— loproteinase3involvesdegradationofplasminogen[J].Eur-J— Biochem,2002,269(18):4476—4483. [43HofmannWK,TakeuchiS,XieD,eta1.Frequentlossofhet erozygosityintheregionofD1$450at1p36.2inmyelidysplas— ticsyndromes[J].LeukRes,2001,25(5):855—858. [5]HogartyMD,MarlsJM,WhitePS,eta1.Anslysisofgenomic imprintingat1p35—36inneuroblastoma[J].MedPediatrOn— col,2001,36(32):5255. 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Keywords:Lungadenocarcinoma;ERCc_1;survivin;Cisplatin 摘要:目的晚期肺腺癌患者组织中错配切除修复蛋 白(excisitionrepaircrosscomplemen~l,ERCC-1),凋亡抑制 蛋白survivin表达同含顺铂方案一线化疗疗效和生存时间 之间的关系.方法收集1999年1月~2005年12月在本 院接受含顺铂方案一线化疗的,病理确诊为晚期肺腺癌患者 的腊块80例.采用免疫组化方法检测ERCc_1,survivin的 表达,并同化疗疗效和生存时间进行比较.结果共有77 例可以评价染色,ERCC-1阳性率为33.77,survivin阳性率 为53.25.ERCC-1阳性表达患者一线化疗有效率低,并且 TTP和PFS较短,survivin阳性表达患者生存较差.结论 ERCC-1阳性同晚期肺腺癌含顺铂方案一线化疗耐药和预后 不良相关,survivin阳性表达提示晚期肺腺癌预后不良. 关键词:肺腺癌;ERCC一1;survivin;顺铂 中图分类号:R734.2文献标识码:A 文章编号:1000—8578(2008)05—0335—04 0引言 tH,细胞肺癌是引起肿瘤相关死亡的主要原因 之一,晚期患者如不治疗,中位生存时间仅约4,6 个月l1].肺腺癌是我国常见的一类tH,细胞肺癌, 因早期诊断困难,多数患者确诊时已到晚期,失去手 术根治机会,使化疗成为其主要治疗手段,但化疗耐 药的存在使其总治愈率仍低于159/6l2].因此,寻找 化疗耐药的分子指标,实现晚期患者的个体化化疗 成为研究热点.以顺铂为基础的联合化疗是晚期肺 腺癌的一线化疗方案,顺铂主要是与肿瘤细胞的 DNA结合,形成顺铂一DNA加合产物,导致DNA链 间交联或者链内交联,引起DNA损伤[3].顺铂耐 药有多种机制,其中DNA损伤修复能力增强是重 要分子基础l4].核酸切除修复(nucleotideexcision repair,NER)基因是最常见的修复基因.而在NER 家族中,ERCC_1(excisionrepaircrosscomplement一 1)又是非常重要的一员,有研究认为ERCC一1可能 是切除修复的关键酶l5].survivin是凋亡抑制蛋白 (inhibitorofapoptosis,IAP)家族的新成员,可参与 细胞凋亡和细胞分裂双相调控,在已检测的多种人 类肿瘤中均高表达l6],但在肺腺癌中的表达目前报 道甚少.本研究利用免疫组化方法研究晚期肺腺癌 ERCC-1,survivin蛋白表达与含顺铂一线化疗方案 疗效及预后的关系,以进一步指导临床工作. 1资料和方法 1.1临床资料 收集1999年1月~2005年12月在本院使用含 顺铂一线化疗方案治疗的,病理确诊为晚期肺腺癌 患者的蜡块共80例.其中男性患者58名,女性患 者22名.年龄范围为22,81岁,中位年龄为55 岁.45名患者确诊为?期患者,35例为?期患者 (其中?A期11例,?B期24例).所有患者均接 受至少两个周期的含顺铂方案一线化疗(37例采用 TP方案:Taxol175mg/m+DDP80mg/rn2;27例 采用NP方案:NVB25mg/rn2,dl,8,+DDP80 mg/rn2;16例采用GP方案:Gemcitabine1.0g/rn2, dl,8,+DDP80mg/rn2),疗效根据WHo确 定.每两个疗程复查CT评价疗效,达到完全缓解 (CR)或部分缓解(PR)为化疗有效,稳定(SD)或进 展(PD)为化疗无效.有效患者完成至少4个疗程 化疗,无效患者换用其他方案或者采用其他治疗方 式.从停止治疗后2个月开始随访,每隔2个月重 复一次,直到患者死亡.随访1,33个月,中位随访 18个月. 1.2免疫组化试验方法 采用免疫组化方法检测ERCC一1,survivin蛋白 在肺腺癌患者蜡块中的表达.ERCC-1单抗购自 neomarker公司;survivin单抗和二抗试剂均购自 DAKO公司.具体操作如下:石蜡切片脱蜡,3H: o:室温下孵育10min,以消除内源性过氧化物酶活 性.蒸馏水冲洗,PBS浸泡5min,正常血清工作液 封闭,室温孵育10min,倾去血清,加稀释后ERCC一 1一抗(1:100)和survivin一抗(1:100),4?过夜, PBS冲洗,滴加二抗,室温下孵育1h,PBS冲洗,滴 加辣根酶标记的工作液,室温下孵育30min.PBS 冲洗三次,使用DAB染色,封片. 1.3免疫组化结果判断 由资深病理科医生在不明临床资料的情况下进 行标本的染色程度判断.ERCC-1在细胞核中出现 棕黄色颗粒为阳性染色,survivin在细胞浆内出现 棕黄色颗粒为阳性.随机选取10个视野从染色强 度和染色百分比进行评估:胞核染色阳性细胞比例 <10为阴性,10,50为阳性,>509/6为强阳 性. 1.4统计学方法 使用统计学软件SPSS10.0进行统计分析,生 存资料和时间的比较采用Kaplan-meier方法分析. 两组间比较采用卡方检验.1年生存率的计算采用 Lifetable方法. 2结果 2.1ERCC-1和survivin表达同临床特征之间的关 系 80例晚期肺腺癌患者中共有77例可进行免疫 肿瘤防治研究2008年第35卷第5期?337? 组化染色分析,其余3例因组织过少,不能判读结 果,77例患者中有26例(33.77)患者ERCC-1染 色阳性,41例(53.25)患者survivin染色阳性,见 图1.不同临床分期,不同性别的ERCC一1和sur— vivin的表达没有差异,见表1. 图1ERCC-1(a)和survivin(b)阳性染色 Fig1PositivepictureofER(X>I{a)andsurvivin(b) 表1晚期肺腺癌患者组织中ERCC-1, survivin表达同临床特征间关系 Tab1RelationshipofexpressionofER0C.1andsurvivinin lungadenocarcinomapatientswithclinicalcharacteristics TumormarkersClinicalstageSex ??PvalueMaleFemalePvalue 2.2ERCC一1和survivin表达同化疗疗效及生存时 间关系 ERCC-1阳性组化疗有效率为26.92(7/26),阴 性组有效率为54.90%(28/51),差异有统计学意义( =5.437,P=0.02).su?in阳性组化疗有效率为 生存时间(月) 36.59(15/41),阴性组有效率为52.770/6(19/36),差 异没有统计学意义(=2.038,P=0.153).在77名 患者中,两种蛋白均为阳性的有14例,其化疗有效率 为28.57;均为阴性的有23例,有效率为39.1.一 种指标为阳性的有40例,有效率为55.但是差异 无统计学意义(=3.451,P=0.178).对两种指标 行1vrP(timetoprogression),PFS(freeprogression surviva1)和生存时间的分析发现,ERCC-1阳性表达的 患者1_,PFS和中位生存时间(15个月)均比阴性 表达的患者(中位生存时间16个月)短,并且差异有 统计学意义.而survivin阳性表达的患者虽然1_rI), PFS和中位生存时间(14个月)较阴性患者(15.5个 月)短,但是并没有统计学意义,见图2,4.进一步 分析两个指标共表达同生存的关系发现,虽然全部阳 性表达患者生存时间(中位生存时间15个月)比全部 阴性患者生存时间(中位生存时间20个月)短,但是 统计学也无意义(P=0.1307). 3讨论 含顺铂方案目前用于多种实体肿瘤的治疗,而顺 铂耐药也是临床上十分常见的问.越来越多的研 究资料表明ERCC-1基因同顺铂耐药密切相关.李 体远等ET]研究发现,通过重组质粒转染细胞,将反义 ERCC-1探针导入卵巢癌细胞内,可以使细胞内的 ERCC-1mRNA水平明显下降,达到封闭ERCC-1蛋 白表达的目的.经不同浓度的顺铂处理,转染反义 ERCC-1基因后,细胞对顺铂造成的DNA损伤修复能 力明显下降.同样,在大肠癌中也有人报道ERCC-1 基因的多态性同顺铂治疗相关,这种多态性也是和 ERCC-1基因的低表达相关L8].Rosell通过定量PCR 分析了肺癌石蜡组织中ERCC-1mRNA表达,回顾性 分析发现其高表达者对顺铂耐药,并且生存率低于低 表达者L4].Olaussen在2006年发表的文章研究了 芒 性量 性.cens0red 性 性-censored T 生存时间(月)生存时间(月) 舞.璐删 全部阳性 全部阳性.censored 部分阳性 部分阳性伽s0red 图2ERCC-1阳性组和阴性组生存曲线比较图3survival阳性组和阴性组生存曲线比较 图4ERCC-1和survivin全部阳性表达,部分阳性表达和全部阴性表达之间的生存比较 Fig2SurvivalcurvesofERCC-1positiveteamandERCC-1negativeteam Fig3Survivalcurvesofsurvivinpositiveteamandnegativeteam Fig4Survivalcurvesofbothpositive,bothnegativeandpartialpositiveofERCC-1andsurviv in 量u —B^一Jfl?雪u ? 338?肿瘤防治研究2008年第35卷第5期 761名手术治疗的肺癌患者ERCC-1的阳性表达率 为44,并且辅助化疗能够明显延长ERCC_1阴性 患者的生存时间,但是对于阳性病人则无效【_8]. 目前对ERCC_1的研究多数集中在mRNA水 平上,吴一龙等【_8]研究发现ERCC_1mRNA水平高 表达的患者化疗的有效率明显低于低表达患者 (37.7vs56.6),差异有统计学意义.而在生存 时间和TTP的比较时,虽然低表达患者的生存时间 相对较长,但是却没有任何统计学意义.本研究使 用免疫组化的方法探讨晚期肺腺癌ERCC_1蛋白水 平上表达程度对含顺铂方案一线化疗疗效的影响. 结果显示,ERCC-1阳性患者的化疗有效率明显低 于阴性患者,差异有统计学意义.同时,阴性表达的 患者还具有较长的TTP和PFS.但是,ERCC-1蛋 白的表达情况同患者的长期生存却没有相关性.本 结果同以往文献报道基本一致. survivin是新近发现的IAP家族成员,在人类 常见肿瘤中均有表达,而不表达于正常成人组织,能 抑制caspase活性而发挥抗凋亡作用【_9].由于sur- vivin特异表达在G2/M期并与细胞有丝分裂装置 相互作用,可能具有选择性的细胞分裂抗凋亡作用, 以使转化细胞通过有丝分裂进行恶变【_1.本研究 晚期肺腺癌survivin的表达率为53.25,同文献水 平接近.同时进一步分析还发现,虽然survivin的 表达同患者的疗效,TTP等没有相关性,但是阴性 表达的患者有更好的生存,并且差异有统计学意义. 本研究在77名患者中,共有14名患者同时阳 性表达两种蛋白,23名患者不表达任何蛋白,但是 进一步的分析显示蛋白的表达同患者的生存时间和 化疗疗效并不明显相关.虽然P值并没有统计学 意义,但是全部蛋白阳性表达的患者生存时间比全 部阴性的患者生存时间相对较长,可能因为本研究 入组患者有限,影响研究结果. 总之,晚期肺腺癌ERCC一1蛋白表达同含顺铂 一 线化疗方案的疗效密切相关,阳性表达的患者化 疗有效率较低,维持时间较短,但是对患者的生存时 期没有影响.由于缺乏非含铂化疗方案的对比,本 研究ERCC_1蛋白阳性表达化疗有效率低除了与顺 铂耐药有关外,也可能是NVB或Taxol或GEM耐 药的问题.survivin蛋白的阳性表达虽不影响含顺 铂方案的化疗疗效,但是阴性表达的患者有更好的 生存时间.因此,有必要进行大型前瞻性研究以及 与非含铂化疗方案的对比研究,以确定ERCC_1蛋 白,survivin蛋白在晚期肺腺癌化疗中的作用,从而 实现肺腺癌患者的个体化治疗. 参考文献: [1]RosellR,FelipEPredictingresponsetopaclitaxel/carbopla— tin-basedtherapyinnon-smalllungcancer[J].SeminOncol, 2001,28(4Suppl14):37-44. 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