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红细胞血型抗体筛查标准操作规程

2017-11-24 7页 doc 40KB 195阅读

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红细胞血型抗体筛查标准操作规程红细胞血型抗体筛查标准操作规程 红细胞血型抗体筛查标准操作规程 红细胞血型抗体筛查标准操作程序 红细胞血型抗体检查适用于下列情况: 1(ABO血型鉴定发现受检者血清中有ABO血型以外的抗体时; 2(供血者血清抗体筛检; (输血前受血者血清抗体检查; 3 4(输血后溶血性输血反应疑为由同种抗体引起时; 5(孕妇血清的抗体检查; 6(新生儿溶血病婴儿血液中抗体检查; 7(直接抗人球蛋白试验阳性红细胞上抗体检查。 筛查方法 一、盐水介质法: 【方法原理】 有些抗体能凝集盐水混悬的红细胞。这些抗体通常是Ig...
红细胞血型抗体筛查标准操作规程
红细胞血型抗体筛查操作规程 红细胞血型抗体筛查标准操作规程 红细胞血型抗体筛查标准操作程序 红细胞血型抗体检查适用于下列情况: 1(ABO血型鉴定发现受检者血清中有ABO血型以外的抗体时; 2(供血者血清抗体筛检; (输血前受血者血清抗体检查; 3 4(输血后溶血性输血反应疑为由同种抗体引起时; 5(孕妇血清的抗体检查; 6(新生儿溶血病婴儿血液中抗体检查; 7(直接抗人球蛋白试验阳性红细胞上抗体检查。 筛查方法 一、盐水介质法: 【方法原理】 有些抗体能凝集盐水混悬的红细胞。这些抗体通常是IgM类抗体,其中许多在22?下反应最好。在室温下有活性而在37?无活性的抗体是没有什么临床意义的。对患者或供血者的血样不需要用这种方法。在37?下也有活性的样本(如抗Kell,抗D)是有临床意义的, 而这些抗体通常可用抗人球蛋白试验和酶技术来检查。 【试剂】 1(试剂红细胞:由血型参比实验室或血液中心提供,或由各血库从供血者或工作人员中进行普查得到。筛查红细胞以2个或3个人抗原互补的不同的红细胞为1套,单独分开分装,因为单一的筛查红细胞较混红细胞提供较高的敏感性。 因为许多抗体同双倍量抗原(纯合子)的红细胞反应比同单倍量抗原(杂合子)的红细胞反应要强得多,而不可能得到的都是纯合子红细胞,因此,筛查红细胞的抗原组成必须是互补,经提供尽可能多的必要的抗原。 筛查红细胞大多不包括低频率抗原,所以不可能检出低频率抗体。这种抗体只有在抗体鉴定时被测到,或在交叉配血时被发现,或在新生儿出生后出现黄疽时被发现。 每一组筛查红细胞中至少有常见的抗原,而且是互补的。 如果某种抗体只能与一种特定抗原的纯合子细胞起反应,而筛查红细胞上这种特定抗原是杂合子,则该抗体可能被漏检。 合适的纯合子表现型的供血者是很少的,为了提供有重要抗原的纯合子细胞,需要使用来自3个供血者的红细胞。 2(血清标本:虽然血清和血浆中存在相同的红细胞抗体,但一般都采用血清进行抗体检查。因为: ?如果血浆中的凝血系统发生部分激活,就可产生纤维蛋白,干扰对凝集的解释; ?只有通过激活补体的作用才能证实的抗体,不能在血浆中检出; ?常用的抗凝剂是结合Ca+来防止凝固,而Ca+对于补体的激活是必不可少的。 22 血清标本的采取时间应注意:例如,受血者血样一定要在48h内采集。为了检出由于最近红细胞刺激而产生的抗体,血样必须是新近的。如果抗体筛查结果阴性,有时需要隔数天后重新采样复查,因为此时抗体的浓度可逐渐增强。 每一样本应详细记录病史,包括姓名、性别、年龄、民族、妊娠史、输血史,使用过哪些药物(如甲基多巴、青霉素、先锋霉素等)、采样日期、有无抗凝剂、抗凝剂的种类和剂量、血液样本的外观、有无溶血、黄疽以及红细胞比积等。 【操作步骤】 1(取受检者血清2滴于标好的试管中。 2(取2%试剂(筛查)红细胞悬液l滴于每个试管中,混和。 3(1000r/min离心1min(离心速度和时间应按质控规定)。 4(观察溶血和凝集反应,记录结果。 5(按需要置室温(22,24?)温育15,30 min。 6(离心,观察溶血和凝集,并记录结果。溶血或凝集都是阳性结果。 (报告结果于检验之星中。 7 二、凝聚胺法 【方法原理】 利用低离子介质(LIM),降低介质的离子强度,减少红细胞周围的阳离子云,以促进红细胞和血清(浆)中的抗体结合。加入凝聚胺可使红细胞产生非特异性的凝聚。最后,加入悬浮液,具有中和凝聚胺的作用,使正常红细胞非特异性凝集散开,试验结果为阴性;但红细胞被相应的抗体致敏,则会被凝聚胺凝结,凝集就不会散开,试验结果为阳性。 【标本采集和处理】 1(标本采集:常规静脉采血于分离胶/促凝剂管(血清)、或静脉采血3ml于EDTA.K2(血浆),一般采用血清进行抗体检查。 2(血清标本的采取时间:要求受检者血样一定要在输血前3天内采集,血样必须是新近的。 3(标本分离保存:血清及早分离防止溶血,可冷冻保存,如用冰冻血清作抗体检查,融化后的样本要充分混和,反复冻融的标本不能供抗体鉴定用。 【试剂】 1(抗体筛查?、?、?细胞。 2(凝聚胺试剂:低离子介质(LIM )、凝聚胺(Polybrene)、悬浮液(Resuspending)。 3(3,5%红细胞悬液:取多个“O”型人红细胞,经生理盐水洗涤三次,配成3,5%红细胞悬液。 【操作步骤】 1(准备样本,患者血清(血浆)、抗体筛查?、?、?细胞或3,5%红细胞悬液。 2(取小试管2支,各加被检血清(浆)2滴,分别加入3,5%筛检红细胞1滴或?和?细胞50ul(0.8%)。 3(各加入LIM0.7ml,混合后,加凝聚胺Polybrene2滴,并混合。 4(以3400rpm,离心10秒,把上清液倒掉,轻轻摇动试管,目测红细胞有无凝集,如无凝集,则必须重作。 5(最后加入悬浮液Resuspending2滴,轻轻转动试管混合并观察结果。如凝集散开,表示由凝聚胺引起的非特异性凝集,抗体筛检结果为阴性。如凝集不散开,则红细胞抗原抗体结合的特异性反应,抗体筛检结果为阳性,应进一步作抗体鉴定。 6(报告结果于检验之星中。 五、微柱凝胶法 【方法原理】 利用凝胶过滤技术和离心技术,抗体筛查细胞上有特定的抗原,抗原可以和相应的抗体结合。当待检血清(浆)样本中有不完全抗体时,抗体筛查细胞和待检血清(浆)中不完全抗体可专一性的结合。抗人球蛋白可结合抗体,通过桥介作用使细胞凝集。凝集发生说明血清(浆)中有不完全抗体。 【标本采集和处理】 1(标本采集:常规静脉采血于分离胶/促凝剂管(血清)、或静脉采血3ml于EDTA.K2 (血浆),一般采用血清进行抗体检查。 2(血清标本的采取时间:要求受检者血样一定要在输血前3天内采集,血样必须是新近的。 3(标本分离保存:血清及早分离防止溶血,可冷冻保存,如用冰冻血清作抗体检查,融化后的样本要充分混和,反复冻融的标本不能供抗体鉴定用。 【试剂】 1(抗体筛查?、?、?细胞。 2(抗人球蛋白检测卡。 3(3,5%红细胞悬液:取多个“O”型人红细胞,经生理盐水洗涤三次,配成3,5%红细胞悬液。 【操作步骤】 1(准备样本,患者血清(血浆)、抗体筛查?、?、?细胞或3,5%红细胞悬液。 2(标记抗人球蛋白检测卡、姓名、住院号、标明?、?、?。 1( 微柱中加50ul待检样本血清(浆)。 4(加抗体筛查?、?、?细胞各50ul(0.8%)。 5(37? 15分钟,离心10分钟。 6(读结果和记录。离心时,凝集块不能通过凝胶间隙而留在凝胶上层,呈阳性反应。未凝集血细胞离心时可通过凝胶间隙而沉积在凝胶管底部,呈阴性反应。 7(报告结果于检验之星中。 【附注】 1(判读试验结果常用的代号是: 4+:一个结实的凝集块。 3+:几个大的凝集块。 2+:中等大的凝块,背景清晰。 1+:小凝集块,背景混浊。 士:微小凝集块,背景混浊。 O:无凝集或溶血。 PH:表示部分溶血,有一些细胞残留。 H:表示完全溶血,无残留细胞。 2(抗体筛查试验结果的解释 抗体筛检试验是很有价值的,但也有其局限性。一个阴性试验不一定意味着这一血清中没有抗体,而只是在使用这些技术时,缺乏与筛查细胞起反应的抗体。如果临床资料和其他实验室所见提供了另外的线索,就应扩大常规筛查方法。例如,如果ABO正反定型不符,就应在室温下做抗体筛查。如疑为溶血性输血反应、新生儿溶血病或自身免疫性溶血性贫血,有必要做酶试验或以放散液做筛查,以引起疾病的抗体。
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