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芒果叶黄酮提取

2019-08-30 6页 doc 26KB 42阅读

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芒果叶黄酮提取攀枝花学院实验报告 实验目的:用乙醇回流提取法,提取芒果叶中总的黄酮,并在料液比,乙醇浓度,浸取时间一定的条件下,建立时间的温度梯度,找到最佳浸取温度。在此过程中,学会设计实验,并做出可行性报告,学会使用分光光度计,并绘制芦丁标准曲线。 实验仪器、药品、器材:粉碎机1台,2个100ml的容量瓶,1个10ml的容量瓶,80目筛,2个100ml的烧杯,4个50ml的圆底烧瓶,1个50ml的量筒,1支1ml的移液管,1支5ml的移液管,恒温水浴摇床、分光光度计。 药品:80%的乙醇溶液、5%亚硝酸钠溶液、4%氢氧化钠溶液、10%硝...
芒果叶黄酮提取
攀枝花学院实验报告 实验目的:用乙醇回流提取法,提取芒果叶中总的黄酮,并在料液比,乙醇浓度,浸取时间一定的条件下,建立时间的温度梯度,找到最佳浸取温度。在此过程中,学会实验,并做出可行性报告,学会使用分光光度计,并绘制芦丁曲线。 实验仪器、药品、器材:粉碎机1台,2个100ml的容量瓶,1个10ml的容量瓶,80目筛,2个100ml的烧杯,4个50ml的圆底烧瓶,1个50ml的量筒,1支1ml的移液管,1支5ml的移液管,恒温水浴摇床、分光光度计。 药品:80%的乙醇溶液、5%亚硝酸钠溶液、4%氢氧化钠溶液、10%硝酸铝溶液、120℃干燥恒重的芦丁10mg 实验原理(装置):黄酮类为有机物,具有相似相容的性质,本实验中,用乙醇有机溶液与芒果叶料浸取黄酮类物质。利用相似相溶原理,通过系统中不同组分在溶剂中有不同的溶解度来分离混合物的单元操作,由于所提取的组分的不同,此次为浸提法(固—液萃取法)提取。 实验步骤: 1、 芒果叶粉末的制备 采集同一品种适量的芒果叶,先用自来水洗净,再用蒸馏水冲洗,放入烘箱中烤干,把温度设置在60?C,再用粉碎机粉碎,用80目筛过筛,即制的芒果叶粉末。 2、配制80%的乙醇溶液。 3、准确称取4个2g的粉末,放如4个圆底烧瓶中,再用量筒量取40ml的80%乙醇溶液倒入50ml圆底烧瓶中,分别在贴上50?C、60?C、70?C、80?C的标签,放入恒温水浴摇床上,按标签调定相应温度,作用90min。提取完毕,用与提取剂的质量分数相同的乙醇溶液(80%)反复洗涤圆底烧瓶,将其倒入100ml的容量瓶中定容。然后精确吸取0.5ml提取液置于10ml的容量瓶中,分别加入5%亚硝酸钠溶液0.30ml,摇匀,静置6min;再加入10%硝酸铝溶液0.30ml,摇匀,静置6min;再加4%氢氧化钠溶液4.00ml,用80%乙醇稀释至刻度,摇匀,静置12min,在510nm处测吸光度。每个温度重复3次。数据记录与表2 提取工艺 不变因素:①料液比:1:20(g/ml);②提取温度:80?C;③提取时间90min;④颗粒大小为80目;⑤乙醇浓度80% 标准曲线的绘制 芦丁标准液的配制:精密称取120℃干燥恒重的芦丁10mg于100ml容量瓶中,用乙醇溶解并定容至刻度,即得0.1mg/ml的芦丁标准溶液。 分别精密吸取芦丁对照液(0.1mg/ml)0.00,0.50,1.00,2.00,3.00,4.00,5.00ml于10ml容量瓶中,分别加入5%亚硝酸钠溶液0.30ml,摇匀,静置6min;再加入10%硝酸铝溶液0.30ml,摇匀,静置6min;再加4%氢氧化钠溶液4.00ml,用80%乙醇稀释至刻度,摇匀,静置,12min,以试剂做空白,在510nm处测吸光度。 5%亚硝酸钠溶液的配制:准确称取5g亚硝酸钠,再加入95ml(95g)的蒸馏水,搅拌溶解即可。 4%氢氧化钠溶液的配制:准确称取4g氢氧化钠,再加入94ml(94g)的蒸馏水,搅拌溶解即可。 10%硝酸铝溶液的配制:准确称取10g硝酸铝,再加入90ml(90g)的蒸馏水,搅拌溶解即可。数据填入表1 表1分光光度计测定芦丁的吸光度 X(mg/ml) 0.00 0.005 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 吸光度                               表2不同提取温度对芒果叶黄酮的提取结果 提取温度(?C) 50 60 70 80 吸光度1         吸光度2         吸光度3         平均值                   附页 分光光度计的使用 1.使用仪器前,使用者应该首先了解本仪器的结构和工作原理。以及各个操作旋钮之功能。在未接通电源前,应该对仪器的安全性进行检查,电源线接线应牢固。通地要良好,各个调节旋钮的起始位置应该正确,然后再接通电源开关。仪器在使用前先检查一下,放大器暗盒的硅胶干燥筒(在仪器的左侧),如受潮变色,应更换干燥的蓝色硅胶或者倒出原硅胶,烘干后再用。     2.将灵敏度旋钮调置“1”档(放大倍率最小)。  3.开启电源,指示灯亮,选择开关置于“T”,波长调至测试用波长。仪器预热20分钟。  4.打开试样室盖(光门自动关闭),调节“0”旋钮,使数字显示为“00.0”,盖上试样室盖,将比色皿架置与蒸馏水校正位置,使光电管受光,调节透过率“100%”旋钮,使数字显示为“100.0”。  5.如果显示不到“100.0”,则可适当增加微电流放大器的倍率档数,但尽可能置低倍率档使用,这样仪器将有更高的稳定性。但改变倍率后必须按(4)重新校正“0”和“100%”。  6.预热后,按(4)连续几次调整“0”和“100%”,仪器即可进行测定工作。     7.吸光度A的测量按(4)调整仪器的“00.0”和“100%”,将选择开关置于“A”,调节吸光度调零旋钮,使得数字显示为“.000”,然后将被测样品移入光路,显示值即为被测样品的吸光度值。  8.浓度C的测量:选择开关由“A”旋置“C”,将已标定浓度的样品放入光路,调节浓度旋钮,使得数字显示为标定值,将被测样品放入光路,即可读出被测样品的浓度值。  9.如果大幅度改变测试波长时,在调整“0”和“100%”后稍等片刻,(因光能量变化急剧,光电管受光后响应缓慢,需一段光响应平衡时间),当稳定后,重新调整“0”和“100%”即可工作。  10.每台仪器所配套的比色皿,不能与其它仪器上的比色皿单个调换。     11.本仪器数字表后盖,有信号输出0~1000MV,插座1脚为正,2脚为负接地线。  吸收池(即比色杯)使用注意事项:  ① 要彻底清洗,尤其是盛过蛋白质等溶液,干后形成一层膜,不易洗去,通常杯子不用时可放在 1%洗洁净液中浸泡,去污效果好,使用时用水冲洗干净,要求杯壁不挂水珠,还可以用绸布丝线或软塑料制作一个小刷子清洗杯子。  ② 严禁用手指触摸透光面,因指纹不易洗净。严禁用硬纸和布擦拭透光面,只能使用镜头纸和绸布。  ③ 严禁加热烘烤。急用干的杯子时,可用酒精荡洗后用冷风吹干。决不可用超声波清洗器清洗。  ④ 吸收池的校正:要固定参比杯和样品杯,可在杯的毛玻璃面上写上记号。用盛有参比液的参比杯和样品杯测定吸光度“A0”,样品杯换上样品液后测定的吸光度为“A1”,则校正后的实际吸光度A为:A= A1-A0  摇床的使用方法. 1、使用水浴恒温摇床前,先将调速旋钮置于最小位置,关“振荡开关”。  2、装培养试瓶应注意以下几点:①均匀分布;②装液量不能偏少,防止产生试瓶漂浮;③密封好试瓶口,防止凝结的水珠滴入试瓶。 5.将自来水注入水箱,水位应略高于培养试瓶的内液面。 6.接通外电源,将电源开关置于“开”的位置,指示灯亮。 3、选择恒温温度:  a.设定温度:按SET键可设定或查看温度设定点。按一下SET键数码管字符开始闪动,表示仪表进入设定状态,按△键设定值增加,按▽键设定值减小,长按△或▽键数据会快速变动,再一次按SET键仪表回到正常工作状态温度设定完毕,开始加热指示灯亮。  b.提前设置:按SET键3秒仪表进入内层参数设定状态。第一个出现并闪动的参数为即停止的提前量,提前量参数要慎重调整,为减少温度过冲,仪表控制加热输出时会提前截止加热,当温度下跌到提前量以下时又开始加热,在设定值与提前量范围内输出(继电器)是不会工作的,这样可减少继电器动作次数以延长继电器使用寿命。例:若设定值为50.0℃,提前量为0.5,仪表控制加热到49.5℃时继电器释放,温度下跌到50.0℃-0.5℃=49.5℃时继电器又吸合。提前量越大继电器动作次数越少,提前量过大会降低控制精度。调整好提前量参数后按SET键3秒仪表回到工作状态。﹙注意:提前设置是为防止加热停止后温冲过高而专门设置的,一般情况下不需要修改﹚。 c.误差的修正:在确认仪表显示的值不是正确的测量值时可对显示值进行修正。按SET键3秒进入仪表内层菜单,第一个出现并闪动的参数为E00即提前量,再按一次SET键出现并闪动的参数即误差修正参数,配合△或▽键可修改此参数。误差修正的范围为-9.9℃到+9.9℃,修正完成后再按一下SET键退出。仪表出厂时修正值为0.0,使用时要防止把显示正确的仪表修正至不正确。  4、选择定时,将定时旋钮调至“定时”或“常开”位置。  5、开“振荡开关”,指示灯亮,缓慢调节调速旋钮,升至所需转速。 10.每次停机前,各开关应置于非工作状态,定时器置“零”,切断电源。  禁止在水箱无水状态使用加热器。若长期停用水浴恒温摇床,应将水箱内的水排除并用软布擦干。
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