胆红素致神经细胞内游离钙升高及牛磺酸的拮抗作用
红细胞刚性指数,成, 使红细胞变形能 红细胞聚集指数增高, 为了提高冠心病防治水平, 控制高蛋 我们应该降低血脂、 血液粘滞性增高,力降低, 造成心肌缺血。 高脂肪食品摄人, 白、 并定期进行血脂及血流变学监测。 ,, ,转移潜能不同人肝癌细胞系差异蛋白,,, 的再验证及功能分析崔杰峰 刘银冲 申华丽 张丽君 张予 孙瑞霞 陈洁 代智 宋海燕 解析比 较蛋白 ,, 质组学筛出的差异蛋白,,, 的生物学 ,(, , ( , ,, , , ,, , , ,,, ),( ,, ( , , ,,, ; , (( ) , ,, , ,, , , , ,功能,证实其是否在肝癌转移复发中发挥作用。
: 分别以 , , ,, , , ,, ;, , , ,),, , , ,, , ( ( , , , , , , ( ), ( , , , , , ( , ( ,, , , , 及细胞免疫化学对差异蛋白 ,,, , ,, , , ,, , , ,,, , ,, , , ,, 。细胞培养上清 , , 的定量结果依次为: ( ( , ,, ) ,, ,,在转移潜能不同 人肝庙细胞系中的
达情况进行再验证; 构 ,,,( ,, , , (( ) , ,, , ,, ,,, , , ,, , , ,,, , ,,, ),( , ,, , ; , ,,, ,,建,,, 反义表达质粒, 转染高转移潜能人肝痛细胞系 , ( , ,, ,;, ,, , ),( , , , ,, ; , , , ,, , , ( ),,,, , ( , ,, ) , , ( ,, , , ,, ,, ,, , 通过细胞运动实验、 ,, 细胞侵袭 实验、, , , , 定量结果依次为,( ,,,, ,, , , ,, ,, ,,, ,( , ,,, ; , ( ,, , , , ,, ,,, 定量、 , 明胶酶谱分析等与侵袭转移有关的系列 (,), ,,, ) ,( ,, ( , ,, , , , , , , , , ,,, , , , ,, , , ( , , , ; ,检测,观察目 的蛋白表达降低对 , , ,,细胞生物学行为 , ,, , ) ,,,,, ,,, 。明胶酶谱分析细胞培养上 ,( , , ( ), ,,,( , ,, )的影响。 结果: 验证结果均证实 ,,, 在有转移潜能人肝 ,, , 清显示, ,, , , ,, 转染 ,,, 反义重组表达质粒的 , , ,,细胞 , ,, , ,, ,癌细胞系 , , ,, , , ,,中呈高表达。转染 ,,, ,, 分泌的, , 活性明显弱于对照。 ,, , , (( ) , , 结论: ;, ,, , , ,, , , ,,反义重组表达质粒后 , , ,,细胞中,,, 的表达被成 ,, , , ,,细胞后, ,,, 转染,, ,, 细胞的运动与侵袭潜能均明功抑制。 侵袭实验显示穿过人工基底膜细胞数分别是:(士 ,, ,, 显降低。细胞 , , 分泌的量也显著降低。而细胞分泌 ( ( , ,, , , ,, , (( , ,,, ),( 士, , ,,,, , ,,, ;, ,, ,) , , , ,, ( , ,, , ,,, 的量则变化不明显。提示差异蛋白 ,,, 蛋白通过 , , , ,, ,, , ( ,), , , , , ,,, ( , ,, ,;, , ,( ) ,( , ,, ( 增强肝癌细胞的运动侵袭能力和上调基质金属蛋白酶的分泌 ,, , , )( , ,, 。运动实验发现穿过上室底膜的细胞数分别为: 参与肝癌细胞的侵袭转移过程。 基金项目: , 计划资助项目(,, ,,,)国家自然 国家 ,, , ,, ,,, ; 科学基金项目 ,,,,) 资助(,,,, 作者单位:,,, ,,, 上海, 复旦大学附属中山医院肝癌研究所 (崔杰峰、刘银坤、张丽君、 张予、 孙瑞霞、 代智、 陈沽、 ; 宋海燕)复 旦大学化学系( 申
华丽)胆红素致神经细胞内游离钙升高及牛磺酸的拮抗作用高小玲 居军 ,, ,, ,,, ,, , ) , 高胆红素血症(,, , , ,, 是新生儿常见病。过 士 ()饲养在昼,, ,, ,,, ,夜 , 循环, , 温度,?左右的环境中,量胆红素通过不健全的血脑屏障沉积于脑组织, 造成中枢神 由 于 ,, , 自 饮水进食。动物经两周喂养适应环境后, ,: 时按经系统损害,导致胆红素中毒性脑病。本病严重威胁新生儿 ,, 次晨 : , 早含 :合笼, ,, 取出, , 查见阴栓者为妊娠 ,。一组健康和生命,死亡率很高,是人类听力障碍、视觉异常、 智力发 , 处死, 动物于妊娠第,, 获取仔鼠,用于神经细胞原代培养。育迟缓的重要原因。正确认识胆红素神经毒性发生机制, 合 另一组自 然分娩,抚育乳鼠至出生后第四天, 用于建立胆红素理防治胆红素中毒性脑病, 对于优生优育, 提高人口 素质有重 脑病动物模型。要意义。牛磺酸是否可拮抗胆红素的神经毒性尚 未见文献报 ( ,, 主要试剂和仪器 道。本研究建立了神经细胞原代培养和乳鼠高胆红素血症动 所用试剂中胆红素、 ,, , 牛磺酸、, ,和 , 培养基、, , , ,, ,物模型,通过体内、体外实验探讨胆红素脑病神经细胞内 钙变 ,, , ,, ,,为美国, , 公司产品, 小牛血清为四季青产品。主化和牛磺酸的拮抗作用, 为胆红素脑病的机理研究和防治提 , , 超净工作台, 要实验仪器有,, , 苏州净化设备厂; 激光共供理论依据。 , , ,, ; , ,, ; , ,, ( 玖 ( 聚焦显微镜:,,, ,, ( ,, 德国生产; 培养 , 材料和方法 ( 箱等。 ( ,, 实验动物 健康成年昆明种小鼠( 由兰州医学院实 ( ,, 神经细胞原代培养方法验动物中心提供, 甘动准字,, ,)早( , ,,, 舍( , , , ,,, , 士 (), , , 取妊娠, 胎鼠脑, , , ,,,, 置冰冷的,,, ’液中, 用眼科剪 剪去头部皮肤、 小心分离出胎鼠全脑, ,, , ’ 剥离脑盖, , 用 , ,, (, 仔细别除软脑膜及血管, 液中清洗 , 次, 用吸管吹打 剪碎, , ,,兰州, , 作者单位: ,, 甘肃省人民医院省临床检验中心 ,, , , , 筛网, ,,, ,,,过 ,,目 ,,, ,,,, 滤液 ,, 离心 , , 再以 ,, , ’ 最后用 ,,, ,培养基( ,,小牛血清)洗涤一次, ,,,, 含 , 制 , ” ’ ; ,,, , , ,,, , :, , , , ,, , , , ,,, , ,护, ,成,,, , 细胞悬液。台盼兰染色检查神经细胞存活率 ( ,, 牛磺酸对胆红素引起的原代培养神经细胞内游离 , ( 细胞悬液接种于涂有鼠尾胶原的 , ,达,,以上。将 ,, , , 钙离子超载的拮抗作用 , 置于,’,, ,孔或,孔培养板中, , , , , , 培养箱中培养, 后 ,, , 结果见表 。可 以看 出在胆红素染毒之前加人 , ( ,,加培养液至, , , 灭菌小牛血清、, 培养液内含 ,, ,谷氨酞胺 , , , ,( , , , , ,,, , , 牛磺酸, , , , 可在一定程度上改善胆红素作, ,, 、 ” ,,, ,青霉素和 ,, , 链霉素各, ,, , 天加人, , ,” 第, , , , 一 ,,荧光强度 , 用引起的神经细胞内游离钙离子结合 , , ,, ,’ 每 天换液一次,, 一阿糖胞昔, , 于神经细胞培养的第 ,天将 ,, ,, 增加。 ( , , 几牛磺酸十 ,,,, 组与,( , ” ,, , 胆红素,( , , , , 浓 磺酸溶液(,( ,, ,,(, , ,,不同 度牛 , ” , , ” 加人 ,, , 红 染 组比 荧光 度呈现出 著
差 , ,,, , ,, , , ,) , 胆 , ,,,‘ 素 毒 较 强 显 异。 (到 , 后, ,, , , , , , 培养液中。,, 加人不同浓度的胆红素(, , , , , , ’ , ,” ( , 拮抗组荧光强度 , ” , , , , ,牛磺酸拮抗组比,, , , ‘ , , ,, , , , , ) , , , , , , , 作用,, 。,,(,, ,, ,, , ,,, , ,, 检测神经细胞 降低更为显著。表明牛磺酸可拮抗胆红素引起的细胞内游离内游离钙离子含量。 钙离子超载效应。还应指出,, ,, ’ ,, ,, ( , , 和 ( , , ’ , ” , , , , ( ,, 胆红素脑病动物模型的建立 牛磺酸单独作用时对原代培养的大脑神经细胞有一定的升钙 出生 ,天的健康昆明种乳鼠, 只, 组, , 随机分为 , 腹腔 作用。再一次证实了牛磺酸对细胞内游离钙离子的双向调节注 剂量分别为,,,(, (,,, ,,, 射胆红素染毒, , , , (, ,, ,,( ,, 作用。注射后 ,小时处死乳鼠,小心分离出乳鼠全脑, ,液 放入 , , ,,,, ,, ,, , ,,, ,, ,, , , ,, , , , ,,,, , , ,, , , , , , , ; ,, 十 , , , , () , (, 仔细剔除软脑膜及血管,( ,,液中清洗 , 次, 剪碎,用 ,,,, , ,, , ,,, , ,, ; , ,, , , ;, , , , , , , , , , , , ,, , 筛网,吸管吹打 ,,,过 ,,目 制成细胞悬液。牛磺酸干预 ,,, .