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胆红素致神经细胞内游离钙升高及牛磺酸的拮抗作用

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胆红素致神经细胞内游离钙升高及牛磺酸的拮抗作用胆红素致神经细胞内游离钙升高及牛磺酸的拮抗作用 红细胞刚性指数,成, 使红细胞变形能 红细胞聚集指数增高, 为了提高冠心病防治水平, 控制高蛋 我们应该降低血脂、 血液粘滞性增高,力降低, 造成心肌缺血。 高脂肪食品摄人, 白、 并定期进行血脂及血流变学监测。 ,, ,转移潜能不同人肝癌细胞系差异蛋白,,, 的再验证及功能分析崔杰峰 刘银冲 申华丽 张丽君 张予 孙瑞霞 陈洁 代智 宋海燕 解析比 较蛋白 ,, 质组学筛出的差异蛋白,,, 的生物学 ,(, , ( , ,, , , ,, , , ,,, ),( ,, ( ,...
胆红素致神经细胞内游离钙升高及牛磺酸的拮抗作用
胆红素致神经细胞内游离钙升高及牛磺酸的拮抗作用 红细胞刚性指数,成, 使红细胞变形能 红细胞聚集指数增高, 为了提高冠心病防治水平, 控制高蛋 我们应该降低血脂、 血液粘滞性增高,力降低, 造成心肌缺血。 高脂肪食品摄人, 白、 并定期进行血脂及血流变学监测。 ,, ,转移潜能不同人肝癌细胞系差异蛋白,,, 的再验证及功能分析崔杰峰 刘银冲 申华丽 张丽君 张予 孙瑞霞 陈洁 代智 宋海燕 解析比 较蛋白 ,, 质组学筛出的差异蛋白,,, 的生物学 ,(, , ( , ,, , , ,, , , ,,, ),( ,, ( , , ,,, ; , (( ) , ,, , ,, , , , ,功能,证实其是否在肝癌转移复发中发挥作用。: 分别以 , , ,, , , ,, ;, , , ,),, , , ,, , ( ( , , , , , , ( ), ( , , , , , ( , ( ,, , , , 及细胞免疫化学对差异蛋白 ,,, , ,, , , ,, , , ,,, , ,, , , ,, 。细胞培养上清 , , 的定量结果依次为: ( ( , ,, ) ,, ,,在转移潜能不同 人肝庙细胞系中的达情况进行再验证; 构 ,,,( ,, , , (( ) , ,, , ,, ,,, , , ,, , , ,,, , ,,, ),( , ,, , ; , ,,, ,,建,,, 反义表达质粒, 转染高转移潜能人肝痛细胞系 , ( , ,, ,;, ,, , ),( , , , ,, ; , , , ,, , , ( ),,,, , ( , ,, ) , , ( ,, , , ,, ,, ,, , 通过细胞运动实验、 ,, 细胞侵袭 实验、, , , , 定量结果依次为,( ,,,, ,, , , ,, ,, ,,, ,( , ,,, ; , ( ,, , , , ,, ,,, 定量、 , 明胶酶谱分析等与侵袭转移有关的系列 (,), ,,, ) ,( ,, ( , ,, , , , , , , , , ,,, , , , ,, , , ( , , , ; ,检测,观察目 的蛋白表达降低对 , , ,,细胞生物学行为 , ,, , ) ,,,,, ,,, 。明胶酶谱分析细胞培养上 ,( , , ( ), ,,,( , ,, )的影响。 结果: 验证结果均证实 ,,, 在有转移潜能人肝 ,, , 清显示, ,, , , ,, 转染 ,,, 反义重组表达质粒的 , , ,,细胞 , ,, , ,, ,癌细胞系 , , ,, , , ,,中呈高表达。转染 ,,, ,, 分泌的, , 活性明显弱于对照。 ,, , , (( ) , , 结论: ;, ,, , , ,, , , ,,反义重组表达质粒后 , , ,,细胞中,,, 的表达被成 ,, , , ,,细胞后, ,,, 转染,, ,, 细胞的运动与侵袭潜能均明功抑制。 侵袭实验显示穿过人工基底膜细胞数分别是:(士 ,, ,, 显降低。细胞 , , 分泌的量也显著降低。而细胞分泌 ( ( , ,, , , ,, , (( , ,,, ),( 士, , ,,,, , ,,, ;, ,, ,) , , , ,, ( , ,, , ,,, 的量则变化不明显。提示差异蛋白 ,,, 蛋白通过 , , , ,, ,, , ( ,), , , , , ,,, ( , ,, ,;, , ,( ) ,( , ,, ( 增强肝癌细胞的运动侵袭能力和上调基质金属蛋白酶的分泌 ,, , , )( , ,, 。运动实验发现穿过上室底膜的细胞数分别为: 参与肝癌细胞的侵袭转移过程。 基金项目: , 计划资助项目(,, ,,,)国家自然 国家 ,, , ,, ,,, ; 科学基金项目 ,,,,) 资助(,,,, 作者单位:,,, ,,, 上海, 复旦大学附属中山医院肝癌研究所 (崔杰峰、刘银坤、张丽君、 张予、 孙瑞霞、 代智、 陈沽、 ; 宋海燕)复 旦大学化学系( 申 华丽)胆红素致神经细胞内游离钙升高及牛磺酸的拮抗作用高小玲 居军 ,, ,, ,,, ,, , ) , 高胆红素血症(,, , , ,, 是新生儿常见病。过 士 ()饲养在昼,, ,, ,,, ,夜 , 循环, , 温度,?左右的环境中,量胆红素通过不健全的血脑屏障沉积于脑组织, 造成中枢神 由 于 ,, , 自 饮水进食。动物经两周喂养适应环境后, ,: 时按经系统损害,导致胆红素中毒性脑病。本病严重威胁新生儿 ,, 次晨 : , 早含 :合笼, ,, 取出, , 查见阴栓者为妊娠 ,。一组健康和生命,死亡率很高,是人类听力障碍、视觉异常、 智力发 , 处死, 动物于妊娠第,, 获取仔鼠,用于神经细胞原代培养。育迟缓的重要原因。正确认识胆红素神经毒性发生机制, 合 另一组自 然分娩,抚育乳鼠至出生后第四天, 用于建立胆红素理防治胆红素中毒性脑病, 对于优生优育, 提高人口 素质有重 脑病动物模型。要意义。牛磺酸是否可拮抗胆红素的神经毒性尚 未见文献报 ( ,, 主要试剂和仪器 道。本研究建立了神经细胞原代培养和乳鼠高胆红素血症动 所用试剂中胆红素、 ,, , 牛磺酸、, ,和 , 培养基、, , , ,, ,物模型,通过体内、体外实验探讨胆红素脑病神经细胞内 钙变 ,, , ,, ,,为美国, , 公司产品, 小牛血清为四季青产品。主化和牛磺酸的拮抗作用, 为胆红素脑病的机理研究和防治提 , , 超净工作台, 要实验仪器有,, , 苏州净化设备厂; 激光共供理论依据。 , , ,, ; , ,, ; , ,, ( 玖 ( 聚焦显微镜:,,, ,, ( ,, 德国生产; 培养 , 材料和方法 ( 箱等。 ( ,, 实验动物 健康成年昆明种小鼠( 由兰州医学院实 ( ,, 神经细胞原代培养方法验动物中心提供, 甘动准字,, ,)早( , ,,, 舍( , , , ,,, , 士 (), , , 取妊娠, 胎鼠脑, , , ,,,, 置冰冷的,,, ’液中, 用眼科剪 剪去头部皮肤、 小心分离出胎鼠全脑, ,, , ’ 剥离脑盖, , 用 , ,, (, 仔细别除软脑膜及血管, 液中清洗 , 次, 用吸管吹打 剪碎, , ,,兰州, , 作者单位: ,, 甘肃省人民医院省临床检验中心 ,, , , , 筛网, ,,, ,,,过 ,,目 ,,, ,,,, 滤液 ,, 离心 , , 再以 ,, , ’ 最后用 ,,, ,培养基( ,,小牛血清)洗涤一次, ,,,, 含 , 制 , ” ’ ; ,,, , , ,,, , :, , , , ,, , , , ,,, , ,护, ,成,,, , 细胞悬液。台盼兰染色检查神经细胞存活率 ( ,, 牛磺酸对胆红素引起的原代培养神经细胞内游离 , ( 细胞悬液接种于涂有鼠尾胶原的 , ,达,,以上。将 ,, , , 钙离子超载的拮抗作用 , 置于,’,, ,孔或,孔培养板中, , , , , , 培养箱中培养, 后 ,, , 结果见表 。可 以看 出在胆红素染毒之前加人 , ( ,,加培养液至, , , 灭菌小牛血清、, 培养液内含 ,, ,谷氨酞胺 , , , ,( , , , , ,,, , , 牛磺酸, , , , 可在一定程度上改善胆红素作, ,, 、 ” ,,, ,青霉素和 ,, , 链霉素各, ,, , 天加人, , ,” 第, , , , 一 ,,荧光强度 , 用引起的神经细胞内游离钙离子结合 , , ,, ,’ 每 天换液一次,, 一阿糖胞昔, , 于神经细胞培养的第 ,天将 ,, ,, 增加。 ( , , 几牛磺酸十 ,,,, 组与,( , ” ,, , 胆红素,( , , , , 浓 磺酸溶液(,( ,, ,,(, , ,,不同 度牛 , ” , , ” 加人 ,, , 红 染 组比 荧光 度呈现出 著 差 , ,,, , ,, , , ,) , 胆 , ,,,‘ 素 毒 较 强 显 异。 (到 , 后, ,, , , , , , 培养液中。,, 加人不同浓度的胆红素(, , , , , , ’ , ,” ( , 拮抗组荧光强度 , ” , , , , ,牛磺酸拮抗组比,, , , ‘ , , ,, , , , , ) , , , , , , , 作用,, 。,,(,, ,, ,, , ,,, , ,, 检测神经细胞 降低更为显著。表明牛磺酸可拮抗胆红素引起的细胞内游离内游离钙离子含量。 钙离子超载效应。还应指出,, ,, ’ ,, ,, ( , , 和 ( , , ’ , ” , , , , ( ,, 胆红素脑病动物模型的建立 牛磺酸单独作用时对原代培养的大脑神经细胞有一定的升钙 出生 ,天的健康昆明种乳鼠, 只, 组, , 随机分为 , 腹腔 作用。再一次证实了牛磺酸对细胞内游离钙离子的双向调节注 剂量分别为,,,(, (,,, ,,, 射胆红素染毒, , , , (, ,, ,,( ,, 作用。注射后 ,小时处死乳鼠,小心分离出乳鼠全脑, ,液 放入 , , ,,,, ,, ,, , ,,, ,, ,, , , ,, , , , ,,,, , , ,, , , , , , , ; ,, 十 , , , , () , (, 仔细剔除软脑膜及血管,( ,,液中清洗 , 次, 剪碎,用 ,,,, , ,, , ,,, , ,, ; , ,, , , ;, , , , , , , , , , , , ,, , 筛网,吸管吹打 ,,,过 ,,目 制成细胞悬液。牛磺酸干预 ,,, .
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