HPLC法测定蒙药森登-4汤中栀子苷、槲皮素和没食子酸的含量

HPLC法测定蒙药森登-4汤中栀子苷、槲皮素和没食子酸的含量 HPLC法测定蒙药森登-4汤中栀子苷、槲皮 素和没食子酸的含量 第24卷第3期 2007年3月 沈阳药科大学 JournalofShenyangPharmaceuticalUniversity VolI24No.3 Mar.2007P.151 文章编号:1006—2858(2007)03—0151~)5 RP—HPLC法测定蒙药森登一4汤中栀子苷, 槲皮素和没食子酸的含量 许良,谭晓杰,李清,周宏,毕开顺 (沈阳药科大学药学院,辽宁沈阳110016) 摘要:目的建立测定蒙药森登一4汤中栀子苷,槲皮素和没食子酸的高效液相色谱方法.方法栀 子苷的测定条件为:HypersilC】8oDs(25O.0mm×4.6mm,5m)色谱柱,流动相为乙腈一水(体积 比为13.5:86.5),流速为0.8mL?min_.,检测波长为238rim.槲皮素的测定条件为:CenturySIL C,8BDS(250.0mm×4.6mm,5胛)色谱柱,流动相为甲醇一水一磷酸(体积比为6O.00:40.00: 0.02),流速为0.8mL?min..,检测波长为360nm;没食子酸的测定条件为:CenturySILC】8BDS (250.0mm×4.6mm,5m)色谱柱,流动相为乙腈一水一磷酸(体积比为5.00:95.00:0.02),流速 为0.80mL?min,.检测波长为272am.结果在各自的色谱条件下,栀子苷,槲皮素和没食子酸质 量浓度与峰面积具有良好的线性关系.平均回收质量分数分别为:栀子苷 96.9%(RSD=1.9%, =6);槲皮素97.1%(RSD=2.3%,=6);没食子酸98.7%(RSD=1.7%,=6).结论该方法 可作为该制剂的含量测定方法. 关键词:森登一4汤;栀子苷;槲皮素;没食子酸;高效液相色谱法 中图分类号:R917文献标志码:A 森登一4汤是蒙医临床上常用的抗风湿药,被 收载于<中华人民共和国卫生部药品标准(蒙药分 册)>.由文冠木15g,川楝子9g,诃子3g,栀子 3g组成,具有清热燥湿的功能,用于治疗关节 炎,水肿等病症…1.作者对森登一4汤进行的抗 炎,镇痛药效学试验结果表明,该药具有明显的抗 炎镇痛作用.栀子苷,槲皮素和没食子酸分别为 栀子,文冠木和诃子的主要化学成分,均有抗炎镇 HO 1仪器与材料 H 痛作用,因此它们分别是森登一4汤的有效成分 之一.3种化合物(分子结构式见图1,2,3)的 HPLC[]含量测定方法已有报道.曾经有文献 [5]报道森登一4汤中栀子苷的薄层一紫外光度含 量测定方法.为建立森登一4汤的多指标质量控 制方法,作者对森登一4汤中的3种有效成分进行 了RP-HPLC法测定. 0HO H Fig.1Thestructureofgeniposide(a),quercetin(b)andgallicacid(c) 岛津LC一10A高效液相色谱仪(包括SPD一 10A紫外检测器,CTO一10A柱温箱,N一2000双通 C H0 0H H 道色谱工作站,日本岛津公司),25.uL样品进样 器(上海安亨微量进样器厂),超声波清洗器(浙 江象山县石浦海天电子仪器厂),ZFQ一85A型旋 转蒸发仪(上海医械专机厂),电子天平(德国Sar. 收稿日期:2006—04—11 作者简介:许良(1966一),男(蒙古族),内蒙古赤峰人,副教授,博士研究生,E— mailnmgxl66@163.corn毕开顺 (1956-),男(汉族),河北唐山人,教授,主要从事中药标准化,中药药效物质基础及指 纹图谱研究,TeI.024— 23928487,E-mailbikaishun@yahoo.eom. 沈阳药科大学第24卷 torius公司). . 甲醇,乙腈,乙醇,磷酸,冰乙酸为色谱纯.栀 子苷,槲皮素和没食子酸对照品(中国药品生物制 品检定所提供),4种药材(文冠木,川楝子,栀子, 诃子,由内蒙古民族大学附属医院蒙药制剂室提 供,由内蒙古民族大学蒙医药学院布赫巴特教授 鉴定为正品). 2方法与结果 2.1色谱条件 栀子苷的测定条件为:HypersilCl8ODS (250.0mm×4.6mm,5肚m)色谱柱,流动相为 乙腈一水(体积比为13.5:86.5),流速为 0.8mI?min,,检测波长为238nm;槲皮素的测 定条件为:CenturySILCl8BDS(250.0mm× 4.6mm,5m)色谱柱,流动相为甲醇一水一磷酸 (体积比为60.00:40.00:0.02),流速为0.8mL? min,,检测波长为360nm;没食子酸的测定条件 为:CenturySILCl8BDS(250.0mm×4.6mm, 5m)色谱柱,流动相为乙腈一水一磷酸(体积比为 5.00:95.00:0.02),流速为0.80mL?min,,检测 波长为272nm;测定栀子苷时柱温为35?,其他 2种物质的色谱柱温均为室温,进样量均为 20L. 2.2系统适用性试验 栀子苷的保留时间15.3min,理论塔板数 6435,分离度为1.52(见图4);槲皮素的保留时 间8.7min,理论塔板数3643,分离度为1.53(见 图5);没食子酸的保留时间10.3min,理论塔板 数3970,分离度为1.61(见图6). > 罢 1一Geniposide Fig.2HPLCchromatogramsofgeniposide(A)andSendeng-4decoction(B) 28 24 20 名16 l2 8 4 B l 入Ol23456789l0 t/rain 1一Quercefin Fig.3HPLCchromatogramsofquercetin(A)andSendeng-4decoction(B) 2.3对照品溶液的制备 精密称取栀子苷对照品5.3mg,槲皮素对照 品10.8mg,没食子酸对照品8.8mg,分别置 10mL容量瓶中,用甲醇溶解,稀释至刻度,作为 储备液.分别精密吸取上述储备液1mL置2mL 容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,得到3种对照品 溶液. 2.4样品溶液的制备 精密称取森登一4汤粉末3g置于100mL圆 底烧瓶中,加体积分数为95%的乙醇溶液30mL, 第3期许良等:RP—HPLC法测定蒙药森登,4汤中栀子苷,槲皮素和没食子酸的 含量153 28 24 20 毫16 12 8 4 Ol23456789l0ll t/min l—Gallicacid F.4ItPLCchromat0穹r习Inlsofgallicacid(A)andSendeng-4decoction(B) 在水浴锅上回流提取3次,每次1h,每次提取后定. 过滤,合并滤液,用减压蒸馏法挥去溶剂,用甲醇2.9回收率试验 溶解残渣,置于离心试管中,离心10min精密称取3g已知含量的森登一4汤(批号 (12000r?min-1),吸取上清液,置25mL容量瓶20040617,栀子苷,槲皮素和没食子酸的质量分数 中,补甲醇至刻度,摇匀,得样品溶液.0.45m分别为0.15%,0.14%,0.068%),置100mL圆 微孔滤膜滤过,进样.底烧瓶中,分别精密加入高,中,低3种质量浓度 2.5线性关系考察的栀子苷(0.53,1.06,2.12g?L-1),槲皮素 精密吸取对照品溶液0.1,0.2,0.3,0.4和(0.108,0.216,0.432g?L-1)和没食子酸对照品 0.5mL,分别置于2mL容量瓶中,用甲醇稀释至溶液(0.44,0.88,1.76g?L-1)1mL,照"2.4"条 刻度,摇匀,分别进样10,记录色谱图和峰面处理,分别在上述色谱条件下进行测定,计算加样 积,以质量浓度(P)为自变量,峰面积为因变量回收率.平均回收率为:栀子苷97.1%(RSD= (y)进行线性回归,得线性回归方程.3种成分2.3%),槲皮素96.9%(RSD=1.9%),没食子酸 的回归方程为栀子苷:Y=3.904(104p一2.68498.7%(RSD=1.7%)(见表1). (104,r=0.9996,线性为13.2,66.2mg?L-1;2.10样品测定 槲皮素:Y=8.095(104P一7.201×10,r=精密称取不同批次的森登一4汤,照"2.4"条制 0.9993,线性为27,135mg?L,;没食子酸:备供试品,0.45m微孔滤膜滤过,进20L分 y=5.891×104o+8. 196(104,r=0.9991,线性为析.每批样品测定3份,以3次测定结果的平均 22,110rng?L,.值作为测定值,样品测定结果见表2. 2.6精密度试验斗 精密吸取同一份样品溶液20肚L,重复进样? 6次,测得栀子苷,槲皮素,没食子酸的RSD值分a.以提取溶剂(体积分数为95%的乙醇溶 别为1.6%,1.1%,1.7%.液)的用量(6倍,8倍和1O倍量),提取时间(O.5, 2.7重复性试验1.0和1.5h)和提取次数(1,2和3次)作为考察 精密称取批号为20040617的森登一4汤因素,以栀子苷,槲皮素和没食子酸的含量和提取 6份,照"2.4"条操作平行制备6份供试品溶液,浸膏量作考察指标,用正交设计试验法研究了森 微孔滤膜滤过,进样分析,测峰面积,按外标法以登一4汤的提取工艺,结果表明,当用10倍量的 峰面积计算浓度,计算出6份供试液中的栀子苷,体积分数为95%的乙醇溶液,提取1h,提取3次 槲皮素和没食子酸含量.测定结果的RSD值分时森登一4汤中3种成分的含量和提取浸膏量最 别为2.1%,1.9%,1.7%.高,因此作者采用了此提取条件. 2.8稳定性考察b.柱温对栀子苷的保留时间有影响,在室温 取同一样品溶液,分别于1,2,4,6,8,12h测下栀子苷的保留时间不稳定.实验中柱温为 定峰面积,结果槲皮素和没食子酸均在12h内稳35?时栀子苷的保留时间稳定. 154沈阳药科大学第24卷 20040412 20040617 20041022 0.2167 0.1488 0.2393 2.2 0.9 1.2 0.2340 0.1429 0.1613 1.7 0I8 1.3 1.1 1.7 1.9 C.作者在不同的色谱条件下,分别测定了森 登一4汤中3种有效成分,建立了该蒙药的多指 标成分的质量控制方法,可作为该制剂的含量测 定方法. 参考文献: [1]中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国卫生 部药品标准?蒙药分册[S].1998:185. [2]方岚,胡旭佳,张赘华.RP-HPLC测定叶下珠片中没 食子酸的含量[J].华西药学杂志,2004,19(14): 307—308. [3]童玉懿,张观德,相乐和彦,等.栀子及其制剂中栀子 甙的高压液相色谱分析[J].中国中药杂志,1989, (4):228—230. [4]茅力,金念祖,陈景衡.反相高效液相色谱法测定苹 果中槲皮素的含量[J].色谱,2005,23(5):282—284. [5]白玉霞,巴根那,吴晓兰.薄层一紫外法测定蒙药森登一 4汤中栀子甙的含量[J].时珍国医国药,1999,10 (10):734—735. RP—HPLCdeterminationofgeniposide andgallic—acidin decoction Mongolianmedicine , quercetin Sendeng'_——4 XULiang,TANXiao-jie,LIQing,ZHOUHong,BIKai—shun (SchoolofPharmacy,ShenyangPharmaceuticalUniversity,Shenyang110016,China) Abstract:ObjectiveToestablishtheHPICmethodfordeterminationofgeniposide,quercetinandgallicacid inMongolianmedicineSendeng一 4decoction.MethodThedeterminationofgeniposidewasperformedwith columnHypersilODSCls(250mmX4.6mm,5m)usingacetonitrile— water(V:V:13.5:86.5)asmo— bilephaseataflowrateof0.8mL?min 一.UVdetectivewavelengthwassetat238nn1.Thedetermination ofquercitinwasperformedonCenturySILCl8BDS(250mmX4.6mm,5btm)column,usingmethanol— water-phosphoricacid(V:V:V=60.00:40.00:0.02)asmobilephaseataflowrateof0.8mL?min一 548 182 000 第3期许良等:RP—HPLC法测定蒙药森登一4汤中栀子苷,槲皮素和没食子酸的 含量155 andUVdetectionat360nm.ThedeterminationofgallicacidwasperformedonCenturySILC18BDS (250mm×4.6mm,5/,m)column,usingacetonitrile—water— phosphoricacid(V:V:V=5.00:95.00: 0.02)asmobilephaseataflowrateof0.8mL?min, andUVdetectionat272nm.ResultsThestandard curvesofgeniposide,quercetin,andgallicacidhadagoodlinearityundertheHPLCconditions.Theaverage recoveryandrelativedeviationwere97.1%with2.3%forgeniposide,96.9%with1.9%forqu ercetin, and98.7%with1.7%forgallicacid,respectively.ConclusionThemethodsaresimple,accura te,andcan beusedasmethodsforthedeterminationofSendeng一4decoction. Keywords:Sendeng一4decoction;geniposide;quercetin;gallicacid;HPLC 【上接第144页) 护作用,在上述各渗透促进剂中可以选择EDTA 应用于PUE的眼甩制剂中.从而达到了实验目 的,为PUE眼用制剂的处方研究筛选出最优的渗 透促进剂.据文献[6]报道高质量分数的EDTA (w>0.5%)有可能对角膜造成损伤,因此下一步 实验中将考察低浓度的EDTA(w<0.5%)对葛 根素的促渗作用,从而确定最佳EDTA使用浓度. 参考文献: [1]魏树礼.生物药剂学与药物动力学[M].北京:北京医 科大学中国协和医科大学联合出版社,1997:13—14. [2]陆彬.药物新剂型与新技术[M].北京:人民卫生出版 社,1998:416—421. [3]ASHIMK.OphthalmicDrugDeleverySystems[M]. 2nd.Missouri,USA:MarcelDekker,Inc,2000:281— 307. [4]R0JANESEKULY,ROBINSONJR.Transportmech— anismsofthecornea.Characterizatimofbarrierpermse— lectivity[J].IntJPharm,1989,55(2—3):237—246. [5]国家药典委员会.中华人民共和国药典:二部[z].北 京:化学工业出版社.2005:688—689. [6]SAETT0NEMF,CHET0NIP,CERBAIR,eta1.E— valuationofocularpermeationenhancers:invitroeffects oncornealtransportoffour卢一blockers,andinvitro/ invivotoxicactivity[J].IntJPharm,1996.142(1): 1O3—1】3. Effectsofpermeationenhancersonthecornealper-- meabilityofPuerarininvitro SONGCheng-jun,LIUZhi—dong,CAOGuo—liang,WENZi—yi,LIJie,PANWei—san (SchoolofPharmacy,ShenyangPharmaceuticalUniversity,Shenyang10016,China) Abstract:0bjectiveToexplorethecornealpermeabilityofpuerarin(PUE)invitro.MethodsTheperme— ablecharacteristicsofPUEacrossthecorneaofanisolatedrabbitwithGBRdiffusionsolutionwerestudied invitrousingavarietyofosmoticenhancers.ResultsTween80of10g?L一andEDTAof5g?I 一showed asignificantimprovementasmuchas1.69and2.10timesintheapparentpermeabilityofPUE,respective— ly,comparedwiththeonesinthecontrol(P<0.01).However,HP一 CDof20g?II1andazoneof 1g.L一 didnotimprovetheapparentpermeabilityofPUE.EDTAof5g?L_..Tweens80of10g?L_.sig— nificantlyshortenedthelagtimepertinenttothecornealpermeabilityofPUE.However,HP,CDof20g? L一 andazoneof1g'L..didnotshortenedthelagtimepertinenttothecornealpermeabilityofPUE.The enhance~hadnoirritativeeffectoneyetissues.ConclusionsEDTAof5g?L一 servesthecornealapparent permeabilityofPUEbetter. Keywords:puerarin;permeationenhancers;cornealpermeability