药学论文-金果榄中盐酸药根碱与盐酸巴马汀提取方法的研究

药学论文-金果榄中盐酸药根碱与盐酸巴马汀提取的研究 作者：陈黎，吴燕燕，朱海涛，王启斌，叶立红，涂自良 目的 研究不同提取方法对金果榄提取物中盐酸药根碱与盐酸巴 马汀含量的影响。方法用不同极性的溶剂对金果榄进行提取，计算出膏率，采用 高效液相色谱法测定金果榄中生物碱的含量，以此做为定量指标，确定最佳提取 工艺。结果采用乙醇回流提取后，利用酸提碱沉法，盐酸药根碱与盐酸巴马汀含 量最高。结论金果榄中的生物碱大多为季铵碱，水溶性较强，适合用极性较大的 溶剂进行提取。 金果榄 提取方法 盐酸药根碱 盐酸巴马汀 高效液相色谱 Abstract：Objective To study the effects of different solvents extraction to the alkaloid content of Radix Tinosporae.MethodsTo extract the alkaloids of Radix Tinospora with different solvents，reckon the ratio，determine Jatrorrhizine Hydrochloride and Palmation Hydrochloride by HPLC，taking this as the indexes，to ascertain the optimum extraction technology.ResultsThe alkaloid content was the highest after circumfluence extraction by ethanol acid-base precipitation.ConclusionIn Radix Tinosporae alkaloid mostly is the amine quaternary ammonium base， the water-solubility is strong，suitable for extraction with high polar solvent. Key words：Radix Tinosporae； Extract methods； Jatrorrhizine hydrochloride; Palmation hydrochloride； HPLC 金果榄Radix Tinosporae为防己科植物青牛胆Tinospora sagittata (Oliv.) Gagnep.或金果榄Tinospora capillipes Gagnep.的干燥块根。金果榄分布在南岭山脉及南至中南半岛，青牛胆分布在秦岭以南至南岭山脉，主产于四 川、湖南、广西、湖北、贵州等省区，是《中国药典》收载的具有本地区特色的 中药材，含盐酸巴马汀、盐酸药根碱等生物碱类活性成分［1，2］。具有清热解毒，利咽止痛之功效，主治咽喉肿痛、痈疽疔毒、泄泻、痢疾、脘腹热痛等［3］。笔者采用不同极性的溶剂进行提取，并采用高效液相色谱法对金果榄中主要成分 盐酸药根碱与盐酸巴马汀进行含量测定，确定最佳提取工艺，为金果榄药材的进 一步开发利用提供科学依据。 1.1 仪器 戴安UltiMateTM3000型高效液相色谱仪，包括四元梯度泵、自动进样器、 柱温箱、紫外检测器、变色龙（chromeleon）软件数据处理系统；岛津AUW120D分析天平（d＝0.1 mg/0.01 mg）；UP5200H超声波清洗器（熊猫集团南京电子 计量有限公司）。 1.2 试药 甲醇为色谱纯，四甲基乙二胺（上海化学试剂公司，Acros进分，批号20000517），其它试剂均为分析纯，水为纯化水。盐酸药根碱（批号0733－200005）、盐酸巴马汀（批号110732－200506）对照品由中国药品生物制品检定所提供。 金果榄购自广西苍梧，经湖北中医学院詹亚华教授鉴定为防己科植物金果榄 Tinospora capillipes Gagnep.的干燥块根。 2.1 提取 2.1.1 精密称取金果榄粉末3份，每份5.0 g，加50 ml乙醇加热回流2次，1 h/次，过滤，合并滤液，回收乙醇，得粗浸膏，加15 ml纯化水溶解，用浓盐酸调节pH 1～2，用氯仿提取3次，20 ml/次，取脱脂后的酸水液，用氢氧 化钠溶液调节pH 9～10［4，5］，加醋酸乙酯提取2次， 20 ml/次，取碱液浓缩成浸膏，低温干燥，称重并。 2.1.2 精密称取金果榄粉末3份，每份5.0 g，先用4 ml NH3?H2O润湿，加50 ml乙醇加热回流2次，1h/次，过滤合并滤液，浓缩得浸膏，低温干燥， 称重并记录。 2.1.3 精密称取金果榄粉末3份，每份5.0 g，先用4 ml NH3?H2O润湿，用50 ml醋酸乙酯加热回流2次，1 h/次，过滤合并滤液，浓缩得浸膏， 低温干燥，称重并记录。 2.2 色谱条件 Diamonsiltm C18色谱柱：(4.6 mm×250 mm，5μm）；流动相：甲醇?水（1?1）（含四甲基乙二胺3.5 ml/L，用磷酸调pH＝7.5）：检测波长345 nm；流速1.0 ml/min；柱温25?；灵敏度0.1AUFS；理论塔板数按盐酸药根碱、盐酸巴马 汀计算均不低于1 500。 2.3 对照品溶液的制备 精密称取盐酸药根碱对照品7.9 mg，盐酸巴马汀对照品9.2 mg，分别置25 ml容量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀即得。 2.4 供试品溶液的制备 分别取“2.1”项下金果榄提取物浸膏约0.1 g，精密称取，各取3份，置5 ml容量瓶中，加适量流动相溶解，超声提取10 min，加流动相至刻度，摇匀过 滤，取续滤液，作为供试品溶液。 2.5 线性关系考察 精密称取盐酸药根碱7.9 mg，盐酸巴马汀对照品9.2 mg，分别置25 ml容量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，采用二倍稀释法，精密量取溶液5 ml置10 ml容量瓶中，分别加流动相稀释至刻度，依次稀释6个浓度，按上述色谱条件测定峰面积。以盐酸药根碱峰面积为纵坐标，盐酸药根碱含量为横坐标， 绘制曲线，统计学计算回归方程为：Y=830.492 7X＋1.488 3（r=0.999 9）。结果明：盐酸药根碱的进样量在0.009 8～0.316 mg/ml范围内，浓度与峰面 积呈良好线性关系；以盐酸巴马汀峰面积为纵坐标，盐酸巴马汀含量为横坐标， 绘制标准曲线，统计学计算回归方程为：Y=607.429 3X-1.425 3（r=0.999 9）。盐酸巴马汀在0.011 5～0.368 mg/ml范围内，浓度与峰面积呈良好线性关系。 2.6 精密度实验 精密吸取盐酸药根碱、盐酸巴马汀对照品溶液10 μl，按上述色谱条件，连续进样5次，依次测定各峰的峰面积值，结果：盐酸药根碱对照品含量 RSD=0.27%，盐酸巴马汀对照品含量RSD=0.13%，表明精密度良好。 2.7 稳定性实验 精密吸取密封室温保存的供试品溶液10μl，分别于0，2，5，8，10 h进样，测定其峰面积值，结果：盐酸药根碱含量RSD= 1.97%（n=3），盐酸巴马汀含量RSD= 1.38 %（n=3），结果表明，供试品溶液在10 h内检测对结果无影响，稳定性良好。 2.8 重现性实验 取同一批样品，按供试品溶液制备方法平行制备5份供试液，分别精密吸取 对照品溶液与供试品溶液各10 μl，测定5份供试品中盐酸药根碱、盐酸巴马 汀的含量，结果：盐酸药根碱RSD=1.83%，盐酸巴马汀RSD=1.86%。 2.9 含量测定 各取3批金果榄药材，分别按“供试品溶液制备”方法制备供试品，分别精 密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，用外标法测定， 计算样品中盐酸药根碱、盐酸巴马汀的含量。结果见表1～2。表1 金果榄提取 物实验结果（略）表2 金果榄浸膏中盐酸药根碱、盐酸巴马汀的含量测定结 果（略） 提取溶剂的选择：将金果榄药材粉末碱化后，采用乙醇与醋酸乙酯两种不同 极性的溶剂进行提取，通过比较收膏率与金果榄中盐酸药根碱与盐酸巴马汀的含 量可以看出，乙醇提取的收膏率与生物碱的含量均高于醋酸乙酯，提示金果榄中 的生物碱多为水溶性生物碱，适合于用极性较大的溶剂提取。 提取工艺的选择：用乙醇回流提取后采用酸提碱沉法所得的金果榄提取物收 膏率与浸膏中盐酸药根碱与盐酸巴马汀的含量均高于直接碱化后用乙醇提取的， 而前者的提取工艺比较复杂，适合于实验室研究用，后者的提取工艺相对简单， 适合于工业生产。 ［1］黄维垣，陈群，朱任宏.金果榄碱的鉴定［J］.化学学报，1957，23(5)： 230. ［2］宋纯清，徐任生，任亚明.金果榄化学成分的研究（?.新呋喃三萜苷一金果榄苷的结构）［J］.化学学报，1988，10：1049. ［3］江苏新医学院.中药大辞典，上册［M］.上海：上海科学技术出版社，1986：1319. ［4］徐海星，何明三，刘小平.芒齿小檗提取工艺的研究［J］.时珍国医国药，2004，15(6)：6. ［5］马爱瑛.生物碱的提取与分离［J］.固原师专学报（自然科学），2006，27(2)：3.