【doc】溶菌酶阳性巨噬细胞在口腔肉瘤浸润中的意义

【doc】溶菌酶阳性巨噬细胞在口腔肉瘤浸润中的意义 溶菌酶阳性巨噬细胞在口腔肉瘤浸润中的 意义 中华口腔医学杂志1994年11月第29卷第5期 弓溶菌酶阳性巨噬细胞在口腔 肉瘤浸润中的意义 李新明堡查赵学平R7;厂.; ^摘要作者应用免疫组化ABC法溶菌酶染色对45倒口腔颌面部闻叶组织恶性肿瘤(OMMS)中 溶菌酶阳性巨噬细胞(LPM)定量观察.将10个高倍视野(HPF)中LPM均数分成<5,,30,>3O 三组,结果LPM在恶性分缎+一+/++一+级瘤较十/++缎瘤中浸润多(P<0.05);在非整倍体 瘤较二倍体和近二倍体瘤中浸润多(P<O.05)f在患者生存<5年组肿瘤中浸润也较多.作者认为浸 润性LPM与OMMS细胞生物学特性有关,通过检测对该类肿瘤的临床处理有重要参考价值,并提 出LPM可能是未激活的巨噬细胞. 关键词肉瘤免疫组织化学巨噬细胞 巨噬细胞(Macrophage,M)是肿瘤相关的 免疫细胞,除了具有重要的抗原提成作用之外, 它对肿瘤既可抑制也可促进其生长.许多研究 这种功能性差异是由于M存在不同的亚 群,因此深入研究和探讨M亚群与肿瘤之间关 系有重要意义.我们用免疫组化酶标法对溶菌 酶阳性巨噬细胞(1ysozymepositive macrophage,LPM)原位定量观察,探讨其在 口腔颌面部间叶组织恶性肿瘤(Oromaxillo— facialmesenchymalsarcoma,OMMS)中浸润 的意义. 材料和方法 1.标本来源:收集江西医学院第一附属医院197] ,I990年间存档OMMS蜡块45例,常规切片染色,与 原始切片核对复查诊断无误,其中6倒经特殊染色鉴 别肿瘤类型.45例中男性26倒,女性19倒}年龄3, 66岁,平均31.0岁;发病部位牙龈最多,其次是颌 骨,颊部,面颌深部,软腭,颈下,舌,口底和磨牙后区 临床随访时间3个月,2O年. 2.主要仪器与试剂:樱花牌推拉式切片机(日本)? 隔水式电热恒温培养箱(上海)~Olympus光学显微镜 (日本);兔抗人溶菌酶抗体(丹麦DAKO公司).敷价1 :400;羊抗兔IgG(上海),效价1,2OO}ABC试剂盘 (美国Vector公司),技价1l100. I忡赢,俺蓖萌 3.分类与:参照WHO标准和现行常用标准 诊断和分类0].45倒分布于10个类型恶性分缎依据 肿瘤细胞构成,核异型性,有丝分裂率,坏死和血管浸 润等指标分为…+++级瘤细胞密度高,核异型 性大,有丝分裂数?6/1o个高倍视野(hhpower field,HPF),瘤内出现坏死灶及瘤细胞侵入血管基 膜时为阳性,出现1个阳性指标为+缎,2个为++级. 3个为+_'+缎,4或5个为++++级.肿瘤细胞密 度参照Costa法].接每类肿瘤通常细胞密度状况.将 瘤细胞疏密度相对分为+,++,一++缎,+++级 为密度高.判断恶性分缎采用双盲法肿瘤倍体流式 细胞术定量检测细胞核DNA指数,0.85,1.15为二 倍体和近二倍体.此外为非整倍体计算生存期仅包括 单纯经手术治疗的无瘤生存病例.每例切除标本切片 随机取lO十HPF观察M的均数,分成<5,5,3O 和>30三组.细胞计激选瘤内非炎症,非肉芽肿,非坏 死区以及瘤周贴近肿增的细胞,瘤周细胞与瘤不在一 个HPF内不计,细胞淡染或仅遗留细胞轮廓,周围散 在阳性颗粒者未计. 4.染色方法:用亲和素生物素辣根过氧化物酶复 合物(avidinbiotinperoxidasecomplex,ABC)法染色. ,PBS替代一抗 每倒蜡块做3张4tan切片.ABC染色 空白对照和HE染色各1张.方法步骤:切片入6O?烤 箱3O分钟,常规脱蜡脱水,O.5过氧化氢甲醇液阻 作者单位:453003河南省新多医学院附属三院口腔科 (李新明);江西医学院口腔医院(张永福);新多市第二医院公 疗科(赵学平) 断内源性过氧化物酶.^37?水浴精1{0分钟;流水洗 30秒.蒸馏工K漂洗3次.PBS漂洗3坎.每次5分钟. 0.1胰蛋自酶凡37('烤箱消化20分钟,重复漂洗,滴 加10猪血清置湿盒内八37?烤箱孵育60分钟;滴 血l兔抗人溶菌酶抗体置湿盎入4"C冰箱24小时.自然 复温2小时.PBS洗3次后滴加生物素标记的羊抗兔 lgG,置湿盒凡37C烤箱孵育60分钟.PBS冼3坎后滴 加ABC,在湿盘内入37c烤箱孵育6O分钟;DAB控制 显色,苏木索复染,脱水透明封片.对照片以PBS替代 抗滴加,余步骤相同: 1统计学处理:x检验. 结果 光镜下溶菌酶阳性缅胞呈黄褐色,包括中 性多核白细胞和M,两者依细胞形态容易区 别.LPM在OMMS中大多数聚集成簇分审在 血管周围.45例0MMs患者不同年龄,不同性 别问LPM的分布均无显着差异(尸>o.05).本 组l0种类型OMMs中LPM的浸润情况见表 l 表1不同类型肿瘤中LPM浸润数量分布G/ 10HPF)(倒) 中华口腔医学杂志1994年11月第29卷第6期 (一_/--+)中浸润多(P<0.05)(表2). 表2恶性肿瘤分级与LPM浸润的关系(/ 10HPF)(倒) 一 6255尸<仉05 经统计学处理两组间有显着性差异(P< 0.05)(表3),在非整倍体瘤中的浸润多于二倍 和近二倍体瘤.这些结果充分说明肿瘤恶性潜 力可影响LPM的浸润程度,恶性程度越高, 浸润越多. 表3肿瘤倍体类型与LPM漫润的关系(;/ l1)HPF)(if4) =6-480P<o-05 我们还发现低度恶性瘤中LPM<5/10 HPF占6O.9(14/23),而>3O/lOHPF占 26.1(6/23);二倍体或近二倍体瘤中LPM 5/10HPF占75.oH(9/12),而>30/10HPF 占8.3(1/12'),进一步说明在低度恶性或二 倍体,近二倍体OMMS中,LPM的浸润数量 较少.此外,我们得到随访的病例中有8例为 LPM>30/10HPF的患者,其中生存?5年组 占14.3%(2/14),生存<5年组占28.6(6/ 21),生存期短者其肿瘤中所含LPM多. 讨论 目前越来越多的学者认识到M对肿瘤可 产生不同影响.在免疫排斥中,M可与T细胞, 本组恶性分级_L级9例,++级14例,+B细胞等合作,在淋巴因子,抗体等的介导下 杀 十+级12例,+++级10例.LPM在高度伤肿瘤细胞,也可被其它一些因子激活后杀 伤 恶性瘤(+++/+++++)较低度恶性瘤肿瘤细胞M需激活后才表达对肿瘤细胞产生 中华口腔医学杂志1g94年11月第29卷第6期 细胞毒作用的观点现已趋于一致激活的M也 可与靶细胞密切接触直接将溶酶体释放入瘤细 胞,将其杀死0].与此相反.未被激活的M则通 过一些环节促进肿瘤增殖如无活性M排斥T 淋巴细胞对瘤细胞的细胞毒作用,也可诱导 恶性瘤本身抵抗细胞毒作用等.显然M在激 活前后是功能截然不同的两种亚群. M含有溶菌酶,然而激活之后释放或分泌 于胞外而不储存.不能含足够作为标记物质的 溶菌酶供满意着色,因此被激活的M染色 不佳或不染色,未被激活的M含溶菌酶丰富, 染色良好.我们由此认为LPM可能是未被激 活的M.LPM是M中的一种亚群 本文研究结果表明,0MMS中LPM浸润 的数量随肿瘤恶性程度增高而增多,恶性分级 一 ++/一+++级瘤中浸润多,非整倍体瘤浸 润多,患者生存期短的肿瘤中浸润多,说明 LPM的浸润与肿瘤细胞的生物学特性有关,瘤 恶性程度越高.患者生存期越短,LPM浸润的 越多,这个事实支持LPM属促进瘤生长的非 活性M.本组很少看到LPM与瘤细胞有 密切接触.M在血管周聚集成簇可能与其来源 于血管中单核细胞,而不是在瘤中所复制以 及M有较强的趋化性有关.Balin等研究了40 例口腔颌面部鳞癌间质中M的细胞毒作用,发 现绝大部分M是无反应性M,这些M不能杀 伤肿瘤细胞..:.作者提到的无反应性M是否同 属未激活的M或单独一类,尚难定论,但可提 示不同组织来源的肿瘤中M对肿瘤反应有相 同的功能特征 口腔颌面部间叶组织恶性肿瘤的发病率仅 占该部位所有恶性肿瘤的6.8,9.4,然 而其发展快,出现远隔脏器转移早,综合治疗效 果差,预后多不良,是临床处理较棘手的恶性肿 瘤我们认为,通过检测OMMS中LPM浸润 程度,对制定治疗计划和估计预后有参考价值, 对提高临床处理水平有重要意义.OMMS的细 胞和临床生物学行为不仅与M浸润数量有关, 更主要受M不同亚群比例及活性状态影响.我 们提出LPM可能是未激活的M,其根据是: ?大量研究表明,非活性M促瘤增殖,活性M 则抑制或杀伤肿瘤;?经淋巴因子激活后.M 的溶菌酶物质可丧失;?本组LPM浸润多时. 瘤恶性度高,预后差,与上述研究结果相吻合. 今后寻求特异性激活M的抗原标记物,用免疫 学方法标记,从而监视激活的M水平同样具有 重要意义. (本文承蒙江西省肿瘤医院免疫组化室,河北省肿 瘤研究所流式细胞室同道们的协助,特此志谢) 参考文献 1ErtzlngerFM.WeissSW.HistologicalTypingofsofttissue tumorsinternarkhalclassiJicationof~umorsNo3G 憎.WHO1g69. 2CostaJ.WesleyRA.G[atstienE.etalThegradingofsoft tissuegarcom~s.resultsofac【lnlcohlstopathol.glccorrela— tloninseriesof163cas~s.C…er.1984.53:530 3HibbsJBHeteroc)toLysisbymact'ophagesactivatedby haciIlusca[metre—iuerin:lysosomeexocytosisintotumoT eel.Science.1974.184:468. 4tr{J1?【)口ACornra1ingeffec~5ofactivatedandnenactiva~ed macrophaesandin.1crophage~jr.n】um0r—beariagJJ_Lceon ~Ut[1O[growlhinvivo.InatCanIas?,1980,689l3 5Fi…hnM.f,lJnther;.Inductioaoi?0rce]Iresistance tomacropha~~一mediated[ysisbypreexposutoacti ratedtnacrophages.Ceillmmuno1.198699241 6g6rdonS.JeanT.cohnZAInvitzosynthesisandsecretion oflysozymebymonDnuc[ea~phagocytes.JExpMed?197% 139:1228. ?NashIRGMacrophagesinhumant13mo~$}AnEmmunohis— tochemJcalsudvJPatho1.198~1鞠:73 8Ecc]esSA,alexanderP.Macrophagecontentof[umorsin reLationtometastaticspreadaadhostimmunreaction.Na ture.1974,250I667. 9BaLEnFAJM.Mononuc[earphagoc}~efunctioainheadand neckcancer}chemofacticrespons[ven~sofbloodmonoeytes inco;re[adonbetweenstolog[cgradeofthetumorandin— fihrationofthesecellsintothetHII1orarea.Cance;.1884, 84I1010. 1O张永福,杜舜颖,蒋泽先.等.口腔额面部阿叶组织恶性肿 瘤(附3l恻).华西口腔医学杂志.1986,4I244. (收稿:】993--Ol一19修回:1994—02--04)